Высокопроизводительный метод количественной оценки образования внеклеточных ловушек нейтрофилов в нейтрофилах человека в режиме реального времени

Наши исследования сосредоточены на нейтрофилах, которые являются важными первыми в иммунной системе и играют важную роль при различных заболеваниях. За последние два десятилетия стало ясно, что нейтрофилы способствуют развитию рака, аутоиммунных заболеваний и других воспалительных состояний, нарушая иммунорегуляцию. Это включает в себя формирование нейтрофильных внеклеточных ловушек, сеток, паутинчатых структур, которые реагируют на воспаление и могут быть мишенью для терапии этих заболеваний.

Однако, несмотря на то, что некоторые многообещающие молекулы нацелены на сети, в разработке до сих пор нет одобренной терапии, которая конкретно воздействует на этот механизм. Это, по крайней мере, частично объясняется отсутствием объективного, непредвзятого, воспроизводимого и высокопроизводительного метода количественной оценки для формирования сетей. Наш протокол использует двухцветную визуализацию живых клеток для анализа поведения нейтрофилов с использованием проницаемых для мембран и непроницаемых красителей для точного отслеживания образования сетки.

Этот метод различает сетчатые и здоровые нейтрофилы на основе целостности мембраны и обеспечивает четкую дифференциацию типов клеточной гибели через морфологические изменения, поглощенные при фазово-контрастной визуализации. Этот метод преодолевает проблемы, связанные с ранее описанными методами количественной оценки образования сети, и обеспечивает эффективную, воспроизводимую и точную количественную оценку сетки в автоматическом режиме. Этот метод поможет в разработке лекарств, нацеленных на нейтрофилы, предоставляя возможность скрининга нескольких терапевтических мишеней против образования сетки в высокопроизводительном режиме.