Tratamiento sistémico para ratones adultos posnatales, juveniles y revolucionados mediante inyección en el seno retrobulbar

Nuestra investigación consiste en el desarrollo de terapias génicas para trastornos genéticos raros, en particular, centrándose en un grupo de trastornos metabólicos conocidos como acidemias orgánicas. El objetivo de nuestra investigación es determinar qué enfoques podrían ser los más adecuados para avanzar a los ensayos clínicos en humanos. Múltiples terapias génicas están aprobadas para tratar una variedad de enfermedades genéticas, lo que no era el caso hace una década.

De hecho, varios ensayos clínicos de terapia génica para la acidemia orgánica están terminados, en curso o planificados. La entrega sistémica a modelos espejo de enfermedades genéticas graves puede ser un desafío, ya que es posible que los ratones no alcancen el tamaño adulto. Este protocolo de inyección retrobulbar permitirá probar terapias génicas en modelos espejo con fenotipos severos y, con suerte, permitir el desarrollo de nuevas terapias para los pacientes.

Para comenzar, diluya el AAV hasta el volumen y la concentración de inyección deseados con PBS estéril en un tubo de microcentrífuga estéril de 1,5 mililitros para cada inyección. Antes de llenar la jeringa estéril de un solo uso, mueva el émbolo hacia arriba y hacia abajo varias veces para asegurarse de que el émbolo se pueda presionar suavemente. A continuación, llene la jeringa hasta el volumen deseado asegurándose de que no haya burbujas de aire.

Si es diestro, coloque el ratón anestesiado en su lado izquierdo con el hocico apuntando hacia la mano derecha para inyectar el ojo derecho. A continuación, aplique una o dos gotas de anestésico oftálmico en el globo ocular que se va a inyectar. Con una gasa absorbente estéril, elimine el exceso de solución anestésica oftálmica.

Aplique una presión suave con las yemas de los dedos sobre la piel, dorsal y ventral hasta el ojo para sobresalir parcialmente el globo ocular del ratón de la cuenca. Ahora, inserte el bisel de la aguja en un ángulo de 30 grados en el canto medial. Aplique presión lenta y suavemente al émbolo de la jeringa para administrar la inyección.

Por último, retire la mascarilla del ratón para permitir la recuperación de la anestesia. La expresión de ARN de metilmalonil coenzima CoA mutasa se observó en los hepatocitos, lo que indica una inyección retrobulbar exitosa.