Nossa pesquisa envolve o desenvolvimento de terapias genéticas para doenças genéticas raras, em particular com foco em um grupo de distúrbios metabólicos conhecidos como acidemias orgânicas. O objetivo de nossa pesquisa é determinar quais abordagens podem ser mais adequadas para avançar para ensaios clínicos em humanos. Várias terapias genéticas são aprovadas para tratar uma variedade de doenças genéticas, o que não acontecia há uma década.
De fato, vários ensaios clínicos de terapia gênica para acidemia orgânica estão concluídos, em andamento ou planejados. A entrega sistêmica a modelos espelhados de doenças genéticas graves pode ser um desafio, pois os camundongos podem não atingir o tamanho adulto. Este protocolo de injeção retrobulbar permitirá o teste de terapias gênicas em modelos de espelhamento com fenótipos graves e, esperançosamente, permitirá o desenvolvimento de novas terapias para os pacientes.
Para começar, dilua o AAV até o volume e concentração de injeção desejados com PBS estéril em um tubo de microcentrífuga estéril de 1,5 mililitro para cada injeção. Antes de encher a seringa estéril de uso único, mova o êmbolo para cima e para baixo várias vezes para garantir que o êmbolo possa ser pressionado suavemente. Em seguida, encha a seringa até o volume desejado, garantindo que não haja bolhas de ar.
Se for destro, posicione o mouse anestesiado do lado esquerdo com o focinho apontando para a mão direita para injetar o olho direito. Em seguida, aplique uma ou duas gotas de anestésico oftálmico no globo ocular a ser injetado. Usando uma gaze absorvente estéril, remova qualquer excesso de solução anestésica oftálmica.
Aplique uma leve pressão com as pontas dos dedos na pele, dorsal e ventral no olho para projetar parcialmente o globo ocular do mouse da órbita. Agora, insira o chanfro da agulha em um ângulo de 30 graus no canto medial. Aplique pressão lenta e suavemente no êmbolo da seringa para administrar o injetado.
Finalmente, remova a máscara facial do mouse para permitir a recuperação da anestesia. A expressão da metilmalonil coenzima CoA mutase RNA foi observada em hepatócitos, indicando injeção retrobulbar bem-sucedida.
