Trattamento sistemico per topi adulti postnatali, giovanili e runted mediante iniezione di seno retrobulbare

La nostra ricerca riguarda lo sviluppo di terapie geniche per malattie genetiche rare, in particolare con particolare attenzione a un gruppo di malattie metaboliche note come acidemie organiche. L'obiettivo della nostra ricerca è determinare quali approcci potrebbero essere più adatti per passare agli studi clinici sull'uomo. Le terapie geniche multiple sono approvate per il trattamento di una varietà di malattie genetiche, cosa che non era il caso un decennio fa.

Infatti, diversi studi clinici di terapia genica per l'acidemia organica sono stati completati, in corso o pianificati. La somministrazione sistemica a modelli speculari di gravi malattie genetiche può essere impegnativa in quanto i topi potrebbero non raggiungere le dimensioni adulte. Questo protocollo di iniezione retrobulbare consentirà di testare terapie geniche in modelli speculari con fenotipi gravi e, auspicabilmente, consentirà lo sviluppo di nuove terapie per i pazienti.

Per iniziare, diluire l'AAV al volume e alla concentrazione di iniezione desiderati con PBS sterile in una provetta sterile da microcentrifuga da 1,5 millilitri per ogni iniezione. Prima di riempire la siringa sterile monouso, muovere lo stantuffo su e giù più volte per assicurarsi che lo stantuffo possa essere premuto senza problemi. Quindi riempire la siringa fino al volume desiderato assicurandosi che non vi siano bolle d'aria.

Se destrorso, posizionare il topo anestetizzato sul lato sinistro con il muso rivolto verso la mano destra per iniettare l'occhio destro. Quindi, applicare una o due gocce di anestetico oftalmico sul bulbo oculare da iniettare. Utilizzando una garza assorbente sterile, rimuovere l'eccesso di soluzione anestetica oftalmica.

Applicare una leggera pressione con la punta delle dita sulla pelle, dorsale e ventrale sull'occhio per sporgere parzialmente il bulbo oculare del topo dall'orbita. Ora, inserisci lo smusso dell'ago verso il basso con un angolo di 30 gradi nel canto mediale. Applicare lentamente e senza intoppi una pressione sullo stantuffo della siringa per erogare l'iniettato.

Infine, rimuovere la maschera facciale dal mouse per consentire il recupero dall'anestesia. L'espressione del metilmalonil coenzima CoA mutasi RNA è stata osservata negli epatociti, indicando il successo dell'iniezione retrobulbare.