Системное лечение постнатальных, ювенильных и взрослых мышей методом инъекции ретробульбарного синуса

Наши исследования включают в себя разработку генной терапии для редких генетических заболеваний, в частности, с акцентом на группу метаболических нарушений, известных как органические ацидемии. Цель нашего исследования — определить, какие подходы могут быть наиболее подходящими для перехода к клиническим испытаниям на людях. Множественная генная терапия одобрена для лечения различных генетических заболеваний, чего не было десять лет назад.

На самом деле, несколько клинических испытаний генной терапии органической ацидемии завершены, продолжаются или планируются. Системная доставка в зеркальные модели тяжелых генетических заболеваний может быть сложной задачей, поскольку мыши могут не достигать взрослого размера. Этот протокол ретробульбарных инъекций позволит тестировать генную терапию в зеркальных моделях с тяжелыми фенотипами и, как мы надеемся, позволит разработать новые методы лечения для пациентов.

Для начала разбавьте AAV до желаемого объема и концентрации со стерильным PBS в стерильной микроцентрифужной пробирке объемом 1,5 миллилитра для каждой инъекции. Перед заполнением одноразового стерильного шприца несколько раз переместите поршень вверх и вниз, чтобы обеспечить плавное нажатие на поршень. Затем наполните шприц до нужного объема, следя за тем, чтобы в нем не было пузырьков воздуха.

Если вы правша, положите мышь под наркозом на левый бок так, чтобы морда была направлена в правую руку, чтобы ввести правый глаз. Затем нанесите одну или две капли офтальмологического анестетика на глазное яблоко, которое будет введено. С помощью стерильной абсорбирующей марлевой салфетки удалите излишки раствора офтальмологического анестетика.

Мягко надавите кончиками пальцев на кожу, тыльную и вентральную к глазу, чтобы частично выпячивать глазное яблоко мыши из глазницы. Теперь вставьте скос иглы вниз под углом 30 градусов в медиальный кантус. Медленно и плавно надавите на поршень шприца, чтобы подать инъекцию.

Наконец, снимите маску с мыши, чтобы дать возможность восстановиться после анестезии. В гепатоцитах наблюдалась экспрессия РНК метилмалонилкоэнзима CoA-мутазы, что свидетельствует об успешной ретробульбарной инъекции.