私たちの研究は、特に希少な遺伝性疾患に対する遺伝子治療の開発に関わっており、特に有機酸血症と呼ばれる代謝障害群に焦点を当てています。私たちの研究の目標は、ヒト臨床試験に進むためにどのアプローチが最適かを判断することです。複数の遺伝子治療は、10年前にはそうではなかったさまざまな遺伝性疾患の治療に承認されています。

実際、有機性酸血症に対するいくつかの遺伝子治療臨床試験が完了、進行中、または計画されています。重篤な遺伝性疾患のミラーリングモデルへの全身送達は、マウスが成体サイズに達しない可能性があるため、困難な場合があります。この球後注射プロトコルにより、重度の表現型を持つミラーリングモデルでの遺伝子治療の試験が可能になり、患者向けの新しい治療法の開発が可能になることを願っています。

まず、AAVを滅菌済み1.5ミリリットルのマイクロ遠心チューブ内の滅菌PBSで目的の注入量と濃度に希釈します。シングルユース滅菌シリンジを充填する前に、プランジャーを数回上下に動かして、プランジャーをスムーズに押し下げることができます。次に、シリンジを希望の容量まで充填し、気泡がないことを確認します。

右利きの場合は、麻酔をかけたマウスを左側に置き、鼻を右手に向けて右目を注入します。次に、注射する眼球に1〜2滴の眼科麻酔薬を塗布します。滅菌吸収性ガーゼパッドを使用して、余分な眼科麻酔薬溶液を取り除きます。

指先で皮膚、背側、腹側で眼に優しく圧力をかけ、マウスの眼球を眼窩から部分的に突き出させます。次に、針の斜角を内側眼鏡に30度の角度で挿入します。シリンジプランジャーにゆっくりとスムーズに圧力をかけ、注射液を送達します。

最後に、マウスからフェイスマスクを取り外して、麻酔からの回復を待ちます。メチルマロニル補酵素CoAムターゼRNAの発現が肝細胞で観察され、球後注射が成功したことを示しています。