Commencez par couper le plant de maïs vieilli désiré au niveau du tissu mésocotyle à l’aide d’un petit couteau ou d’une paire de ciseaux. Nettoyez le semis avec un pinceau. Tenez ensuite le dénudeur de fil avec ses mâchoires face à la goulotte.
Placez la goulotte sur le trou sélectionné et pressez les poignées du décapant ensemble. Faites glisser le décapant loin de la goulotte pour couper la partie supérieure des feuilles. Utilisez une règle pour mesurer la longueur de la pointe du primordium à la base de la goulotte.
Pour commencer l’imagerie du primordium foliaire, maintenez la goulotte stable sur une surface lisse sous un stéréomicroscope à un grossissement d’environ 0,8x. À l’aide d’une lame de rasoir ou d’un scalpel, effectuez une coupe initiale légèrement au-dessus de la région cible pour éliminer la partie distale de la goulotte. Obtenez ensuite des sections minces d’environ 0,25 à 0,8 millimètre aux points souhaités le long du primordium.
Une fois cela fait, montez la section de la feuille sur une lame de verre propre. Appliquez quelques gouttes d’eau directement sur la section à l’aide d’une pipette. Et placez un bordereau de couverture sur le dessus.
Appliquez quelques gouttes supplémentaires sur les bords du bordereau de couverture si nécessaire. Placez la lame sur la platine du microscope à épifluorescence et ajustez les réglages pour visualiser le fluorophore. À l’aide de cette méthode, l’échantillonnage aléatoire de la résection a été normalisé en mesurant les primordia avant la section.
Une tendance a été découverte montrant que le gland deux disparu avait une primordie plus large et plus de nervures que la normale, indiquant que le défaut du mutant a commencé tôt dans le développement de la feuille. Cette méthode a également permis l’examen systématique des profils d’expression des rapporteurs de protéines fluorescentes de réponse hormonale dans la primordie foliaire.
