Pour commencer, prenez 10 milligrammes de mitochondries de levure brutes fraîchement isolées et mettez-les en suspension dans 1,6 millilitre de tampon SM à quatre degrés Celsius par pipetage. Ensuite, transférez la suspension mitochondriale dans un erlenmeyer pré-refroidi de 100 millilitres. Lentement, ajoutez 16 millilitres de tampon gonflant, à l’aide d’une pipette en verre de 20 millilitres tout en remuant doucement et constamment sur de la glace.
Incuber les échantillons en remuant doucement et constamment pendant 30 minutes sur de la glace. Ensuite, ajoutez lentement cinq millilitres de solution de saccharose à 2,5 molaires à l’aide d’une pipette en verre de cinq millilitres, en permettant à la membrane interne de rétrécir. Incuber les échantillons en remuant doucement pendant 15 minutes sur de la glace.
Pour générer des vésicules membranaires sous-mitochondriales, transférez la suspension mitochondriale dans une cellule de rosette pré-refroidie et sonifiez la suspension à 10% d’amplitude pendant 30 secondes tout en refroidissant la cellule de rosette dans un bain de glace. Reposez la suspension pendant 30 secondes dans un bain de glace.
