Cloning of Solute Carriers (SLCs) into pHTBV1.1 Bacmid for High-Throughput Protein Expression

Pour commencer, ajoutez 150 nanogrammes de support de soluté, ou clone SLC, et 100 nanogrammes du vecteur dans une plaque à 96 puits. Porter le volume de réaction à 8 microlitres avec une solution tris de 10 millimolaires pH 8. Ajoutez ensuite 2 microlitres de mélange d’enzymes recombinantes et incubez pendant une heure à température ambiante.

Après incubation, ajoutez 1 microlitre de protéinase K et incubez pendant 30 minutes à 37 degrés Celsius. Ajouter 4 microlitres de mélange réactionnel à 50 microlitres de cellules E. coli Mach1 chimiquement compétentes et transformer les cellules en utilisant la méthode du choc thermique. Après transformation, placez la suspension bactérienne sur une plaque de gélose LB.

Identifier les colonies hébergeant le vecteur pHTBV1.1 à l’aide de l’insert du gène SLC à l’aide d’amorces appropriées et de protocoles standard pour la PCR des colonies.