Préparation d’embryons de poisson-zèbre et de produits chimiques pour tester la toxicité neuromusculaire et générale sur les embryons

Pour commencer, collectez des embryons aux stades de clivage, en particulier du stade de deux à huit cellules à partir du frai naturel, dans une boîte de Pétri de 10 centimètres. Retirez les œufs non fécondés, les débris et les écailles de la boîte de Pétri pour la nettoyer. Placez 60 embryons dans une boîte de Pétri contenant 15 millilitres de milieu E3.

Placez tous les plats contenant des embryons dans une chambre humidifiée préparée avec du papier absorbant imbibé d’eau. Ensuite, incubez-les 72 heures après la fécondation dans un incubateur réglé à 28,5 degrés Celsius. Ensuite, récupérez les solutions mères de produits chimiques souhaitées du congélateur à moins 20 degrés Celsius et laissez-les décongeler.

Préparez une dilution en série de chaque produit chimique dans un milieu E3 dans une bouteille en verre. Inspectez la solution pour détecter les précipitations et, le cas échéant, notez-la. Ensuite, diluez davantage pour atteindre la concentration la plus élevée suivante.

Vérifiez et répétez jusqu’à ce qu’il n’y ait plus de précipitations. Vérifiez et notez ensuite le pH de la solution d’exposition. S’il se situe en dehors de la plage de pH 7,0 à 8,5, ajustez-le à 7,4 avec de l’acide chlorhydrique ou de l’hydroxyde de sodium.

Jetez tout milieu d’exposition inutilisé conformément aux réglementations locales.