Pour effectuer le passage de neurosphères obtenues à partir de cellules souches neurologiques isolées de la zone sous-ventriculaire du neurone, prélevez le milieu contenant les neurosphères à partir des plaques multipuits et transférez-les dans un tube à centrifuger de 15 millilitres. Centrifugez les neurosphères pendant cinq minutes à 300 G.Après avoir retiré le surnageant, ajoutez 200 microlitres de solution enzymatique à la pastille et tapotez doucement le fond du tube pour le déloger. Incuber pendant 10 minutes à température ambiante pour faciliter la dissociation de la neurosphère.
Ajoutez ensuite un millilitre de milieu témoin pour arrêter la réaction enzymatique. Dissociez mécaniquement les neurosphères à l’aide d’une micro pipette P 1000 en pipetant 10 à 20 fois vers le haut et vers le bas. Ajouter un volume supplémentaire de quatre millilitres de milieu témoin et mélanger par inversion pour laver les cellules.
Centrifugez les cellules pendant cinq minutes à 300 G avant de retirer le surnageant. Ajoutez un millilitre de milieu complet et remettez la pastille en suspension pour homogénéiser la suspension cellulaire en pipetant de haut en bas 10 fois. Après avoir dilué une partie d’une aliquote de la suspension cellulaire avec une partie de bleu de trypan, comptez la suspension cellulaire à l’aide d’une chambre Neubauer.
Pour étendre la culture, ensemencez des cellules à une densité de 10 000 cellules par centimètre carré en utilisant un milieu complet dans une plaque ou un flacon de culture approprié.
