L’objectif principal de cette étude est d’utiliser un modèle murin de ligature des cæcaux et de la septicémie induite par ponction pour évaluer un biomarqueur sanguin fiable de la septicémie. La ligature et la ponction des cæcales, ou CLP en abrégé, est un modèle cliniquement pertinent de septicémie. CLP est un modèle couramment utilisé dans la recherche sur la septicémie.
L’histone citrullinée H3, ou CitH3, provient de la NETosis induite par la septicémie. Notre étude précédente démontre que CitH3 est un biomarqueur diagnostique fiable de la septicémie. Sélectionnez les souris C57BL/6 mâles.
Peser la souris et anesthésier la souris par inhalation d’isoflurane à 1,5%. Fixez la souris sur un coussin chauffant. Appliquez une crème dépilatoire sur l’abdomen et ne laissez pas plus d’une minute avant de retirer la crème et les cheveux.
Préparer des instruments chirurgicaux stériles adaptés à la chirurgie des rongeurs. Désinfectez la peau abdominale avec de l’iode au moins trois fois. Couvrez la zone chirurgicale opératoire avec la draperie chirurgicale stérile appropriée.
Utilisez des ciseaux chirurgicaux stériles pour faire une incision d’environ deux centimètres dans la paroi abdominale, le long de la linea alba. Identifier et isoler le caecum hors de la cavité péritonéale avec une pince à épiler stérile. Ligate 75 volume du caecum avec suture de soie 4-0.
Ne ligaturez pas les vaisseaux sanguins mésentériques. À noter, un pourcentage différent de caecum ligaturé détermine la gravité de la septicémie. 25 % conduit à une septicémie de bas grade, 50 % conduit à la septicémie de grade moyen et 75 % conduit à une septicémie de haut grade.
Percer le caecum par une perforation traversante avec une aiguille de calibre 21 au milieu entre l’extrémité de la queue et la ligature. Pressez doucement les matières fécales hors du caecum par des trous de pénétration. À noter, la quantité de matières fécales pressées dans la cavité péritonéale doit être constante, car les matières fécales déterminent également la gravité de la septicémie.
Replacez doucement le caecum ainsi que les matières fécales dans la cavité abdominale. Fermez la couche musculaire abdominale et la couche de peau avec une suture de soie 6-0. Désinfectez l’incision avec de l’iode.
L’injection de kétoprofène, cinq milligrammes par kilogramme, doit être effectuée sur le quadrant inférieur gauche de l’abdomen pour éviter le caecum. Placez la souris sur un coussin chauffant jusqu’à récupération complète. La souris est logée dans une pièce à température contrôlée et a libre accès à la nourriture et à l’eau.
Les animaux seront euthanasiés par surdose de dioxyde de carbone avec des symptômes de septicémie, pertinents pour nos critères d’évaluation prédéfinis basés sur notre étude présentée. Les souris sont divisées au hasard en groupe placebo, groupe CLP et groupe de traitement CLP plus Cl-amidine ou YW3-56. Les souris du groupe simulé reçoivent toutes les procédures CLP, à l’exception de la ligature du caecum et de la ponction.
Prélever le sang périphérique 24 heures après l’opération et préparer le sérum par centrifugation. La concentration de CitH3 a été déterminée par transfert Western et un kit ELISA développé par l’unité. Comme le montre la figure deux, aucun CitH3 n’a été détecté dans le groupe fictif.
Les taux de CitH3 étaient élevés après l’insertion de CLP, ce qui a été atténué par l’inhibition de la PAD de manière significative. Sur la base de nos données, nous concluons que le CitH3 circulant est un biomarqueur diagnostique fiable de la septicémie.
