Nous tenons à remercier nos nombreux collègues qui ont fourni une aide, des conseils et des intrants essentiels à différents stades du projet. La production de cet article vidéo a été soutenue par des fonds provenant du ministère allemand de l&#39;Education et la Recherche (BMBF) pour le Centre allemand de recherche sur le diabète (DZD, <a href="http://www.dzd-ev.de">http://www.dzd-ev.de</a> ), IMIDIA ( <a href="http://www.imidia.org">http://www . imidia.org</a> ) et l&#39;Hôpital universitaire Carl Gustav Carus à l&#39;Université de Technologie de Dresde. La recherche menant à ces résultats a reçu un financement du Programme de la Communauté européenne septième programme-cadre (FP7/2007-2013) pour l&#39;Initiative Médicaments Innovants sous convention de subvention n ° 115005.

1. Collecte de tissus pancréatiques dans la salle d&#39;opération <ol><li> Le chirurgien effectue une résection partielle du pancréas. </li><li> Après avoir placé le spécimen du pancréas dans une boîte sur la glace, le livrer immédiatement à l&#39;anatomopathologiste. </li></ol> 2. Sélection de tissus pour l&#39;isolement des îlots <ol><li> Le pathologiste sélectionne tissu qui semble douce et saine, tout en conservant les tissus endommagés à des fins diagnostiques. Tissu fibreux et les spécimens offrant moins de 2 g de tissu utilisable sont exclus de l&#39;isolement des îlots. </li><li> Immerger le tissu pancréatique en Euro Collins Solution et livrer sur la glace au laboratoire. </li></ol> 3. L&#39;isolement des îlots humains <ol><li> Peser le tissu pancréatique, puis le placer dans un plat de 10 cm. </li><li> Mettez 150 ml de RPMI médias dans un flacon de 500 ml. </li><li> Dans un flacon de 250 ml, préparer la solution d&#39;enzymes digestives en combinant 130 ml de RPMI médias avec 100 mg / ml et 20 ml de DNase de RI Libérase 5mg/ml. Draw 10 ml de cette solution dans une seringue pour injecter le tissu pancréatique. </li><li> Injecter la solution d&#39;enzymes digestives dans les tissus du pancréas, visant à la dilater de façon homogène. Si cela est empêché par la fibrose, la digestion sera probablement échouer. Ensuite, émincer les tissus dans ~ 4 mm 3 pièces sur la glace. </li></ol> 4. Homme circuit de la digestion du pancréas <ol><li> Assemblez le circuit de digestion comme le montre la figure 1. La direction du flux dans la chambre de Ricordi est dans le bas et dehors au dessus de la chambre. </li><li> Ajouter la solution d&#39;enzymes digestifs restant dans le ballon de 500 ml pour un volume total de 300 ml et insérer un thermomètre. </li><li> Transfert du tissu pancréatique dans la chambre, insérer le treillis (diamètre des pores: 600 um) et trois billes nitrure de silicium (diamètre: 15 mm), à proximité de la chambre et démarrer la pompe avec le flux fixé à 140 ml / min. </li><li> Lorsque la température du circuit atteint 37 ° C, commencer à chronométrer et périodiquement prélever des échantillons afin de déterminer quand arrêter la digestion. Coloration à la dithizone (2 mg / ml) permet la visualisation microscopique des îlots au sein du tissu digéré 4. </li><li> Une fois les îlots sont séparés du tissu acineux environnantes, arrêter rapidement la digestion en plaçant la bobine de chauffage sur la glace et ajouter 200 ml de milieu lavage à froid (900 ml de RPMI 1640 avec 5,5 mM de glucose et 10% de FBS) pour le circuit. </li><li> Recueillir la solution îlot dans 250 ml tubes coniques comme elle sort du tube échantillon. Continuez jusqu&#39;à ce que le circuit est vide. </li></ol><img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/2962/2962fig1.jpg" /> Figure 1. Le circuit de pancréas humain la digestion Le circuit pancréas humain de digestion comprend une chambre de Ricordi contenant mailles (diamètre des pores: 600 um) et trois billes de nitrure de silicium (diamètre: 15 mm). Les sorties de la chambre est entraîné dans la fiole de collecte des tissus par la pompe péristaltique (140 ml / min). Les flèches indiquent la direction du flux. Une température optimale pour la digestion enzymatique est maintenue en immergeant le serpentin de chauffage dans un bain d&#39;eau à 37 ° C. 5. Lavage après la digestion <ol><li> Centrifuger les tubes coniques de 250 ml contenant la solution îlot à 1000 rpm, 4 ° C pendant 5 min. </li><li> Jeter le surnageant, resuspendre le culot îlot au milieu de lavage (900 ml de RPMI 1640 avec 5,5 mM de glucose et 10% de FBS) et le distribuer dans des fractions égales à tubes de 50 ml conique. (Facultatif:. Répartir dans des tubes coniques supplémentaires pour améliorer le lavage) Centrifuger à 1000 rpm, 4 ° C pendant 5 min. </li><li> Rejeter le surnageant et les boulettes de détacher doucement en secouant manuel. </li></ol> 6. La purification sur gradient de Ficoll <ol><li> Reprendre le culot avec Ficoll médias à une densité de 1,125 g / ml, pH 7,4 et lentement superposition aliquotes de 10 ml de Ficoll des médias avec des densités de 1,080, 1,060 et 1,037 g / ml. </li><li> Centrifuger les gradients de Ficoll à 2400 rpm, 4 ° C pendant 20 min. </li></ol> 7. Collection Islet et de la Culture <ol><li> Après centrifugation, les composants des tissus différents peuvent être distingués par leur cloisonnement dans le dégradé. </li><li> Jeter la couche supérieure constituée de tissus adipeux et conjonctifs. </li><li> Soigneusement la récolte de la première couche de granulats à l&#39;îlot de 1,037 à 1,060 g / ml d&#39;interphase. Cette couche contient les îlots les plus purs isolés. Recueillir les fractions séparément pour l&#39;isolement efficace. </li><li> Recueillir le second, la fraction moins pur des agrégats à l&#39;îlot de 1,060 à 1,080 g / ml d&#39;interphase. </li><li> Diluer le gradient de Ficoll en ajoutant des médias de lavage (900 ml de RPMI 1640 avec 5,5 mM de glucose et 10% de FBS) à chaque tube conique jusqu&#39;à un volume total de 50 ml. Centrifuger à 1000 rpm, 4 ° C pendant 5 min. </li><li> Jeter le surnageant par aspiration. Faites attention que le culot soit lâche due au gradient de Ficoll. </li><li> Lavez le wi granulése laver les médias (900ml RPMI 1640 avec 5,5 mM de glucose et 10% de FBS) et centrifuger à 1000 rpm, 4 ° C pendant 5 min. Répétez l&#39;aide de milieux de culture des îlots </li><li> Resuspendre les îlots de milieux de culture et de les placer dans l&#39;incubateur avec 5% de CO 2 à 37 ° C pendant 24-48 heures avant traitement ultérieur. </li></ol>

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	<li>Kahn, S. E., Zraika, S., Utzschneider, K. M., Hull, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+beta+cell+lesion+in+type+2+diabetes:+there+has+to+be+a+primary+functional+abnormality.">The beta cell lesion in type 2 diabetes: there has to be a primary functional abnormality.</a> Diabetologia. 52, 1003-1012 (2009).</li><li>Deng, S., Vatamaniuk, M., Huang, X., Doliba, N., Lian, M. M., Frank, A., Velidedeoglu, E., Desai, N. M., Koeberlein, B., Wolf, B., Barker, C. F., Naji, A., Matschinsky, F. M., Markmann, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+abnormalities+in+the+islets+isolated+from+type+2+diabetic+subjects.">Structural and functional abnormalities in the islets isolated from type 2 diabetic subjects.</a> Diabetes. 53, 624-632 (2004).</li><li>Ricordi, C., Lacy, P. E., Finke, E. H., Olack, B. J., Scharp, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+method+for+isolation+of+human+pancreatic+islets.">Automated method for isolation of human pancreatic islets.</a> Diabetes. 37, 413-420 (1988).</li><li>Latif, Z. A., Noel, J., Alejandro, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+of+staining+fresh+and+cultured+islets.">A simple method of staining fresh and cultured islets.</a> Transplantation. 45, 827-830 (1988).</li><li>Ehehalt, F., Knoch, K., Erdmann, K., Krautz, C., J&#228;ger, M., Steffen, A., Wegbrod, C., Meisterfeld, R., Kersting, S., Bergert, H., Kuhlisch, E., Bornstein, S., Bonifacio, E., Saeger, H. D., Solimena, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+insulin+turnover+in+islets+from+type+2+diabetic+patients.">Impaired insulin turnover in islets from type 2 diabetic patients.</a> Islets. 2, 30-36 (2010).</li><li>Hardt, P. D., Brendel, M. D., Kloer, H. U., Bretzel, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+pancreatic+diabetes+(type+3c+diabetes)+underdiagnosed+and+misdiagnosed?.">Is pancreatic diabetes (type 3c diabetes) underdiagnosed and misdiagnosed?.</a> Diabetes Care. 31, S165-S169 (2008).</li><li>Meisterfeld, R., Ehehalt, F., Saeger, H. D., Solimena, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+disorders+and+diabetes+mellitus.">Pancreatic disorders and diabetes mellitus.</a> Exp Clin Endocrinol Diabetes. 116, S7-S12 (2008).</li><li>Verge, C. F., Gianani, R., Kawasaki, E., Yu, L., Pietropaolo, M., Jackson, R. A., Chase, H. P., Eisenbarth, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+of+type+I+diabetes+in+first-degree+relatives+using+a+combination+of+insulin,+GAD,+and+ICA512bdc/IA-2+autoantibodies.">Prediction of type I diabetes in first-degree relatives using a combination of insulin, GAD, and ICA512bdc/IA-2 autoantibodies.</a> Diabetes. 45, 926-933 (1996).</li><li>Alberti, K. G., Zimmet, P. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definition,+diagnosis+and+classification+of+diabetes+mellitus+and+its+complications.+Part+1:+diagnosis+and+classification+of+diabetes+mellitus+provisional+report+of+a+WHO+consultation.">Definition, diagnosis and classification of diabetes mellitus and its complications. Part 1: diagnosis and classification of diabetes mellitus provisional report of a WHO consultation.</a> Diabet Med. 15, 539-553 (1998).</li><li>Marselli, L., Thorne, J., Ahn, Y. B., Omer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Expression+of+Purified+{beta}-Cell+Tissue+Obtained+from+Human+Pancreas+with+Laser+Capture+Microdissection.">Gene Expression of Purified {beta}-Cell Tissue Obtained from Human Pancreas with Laser Capture Microdissection.</a> Journal of Clin. Endocrinol. Metab. 93, 1046-1053 (2008).</li></ol>

Aucun conflit d&#39;intérêt déclaré.

En utilisant notre protocole, îlots humains peut être isolé du tissu pancréatique recueilli à partir d&#39;un pancréatectomie partielle. Le succès de ce protocole repose sur le soin apporté à quelques points essentiels. Pour préserver la viabilité des cellules bêta, il est essentiel que l&#39;échantillon soit transporté rapidement sur la glace au laboratoire. En outre, la durée de la digestion des tissus doivent être optimisés de façon empirique en fonction de la teneur de la fibrose des tissus et l&#39;activité enzymatique de la presse. Cela est également vrai pour le degré de force mécanique appliquée manuellement à la chambre de Ricordi. Ainsi pour obtenir un rendement îlot bonne, le protocole est mieux effectuée par un scientifique dédié ou d&#39;un assistant technique. La rupture initiale est la norme à moins que l&#39;équipe est déjà connu dans l&#39;isolement d&#39;îlots. Il ya des différences fondamentales entre notre protocole d&#39;isolement des îlots et la méthode standard isolement d&#39;îlots humains: 1) Bien que nous utilisons des tissus pancréatiques soumis à plusieurs heures d&#39;ischémie pendant l&#39;intervention chirurgicale, il est immédiatement transformé sur place. Ceci est en contraste avec pancréas explanté de mort cérébrale donateurs pour le pancréas / transplantation d&#39;îlots, qui restent ischémique pendant plusieurs heures lors de l&#39;attribution et la livraison au centre d&#39;isolement des îlots. 2) Nous injectons collagénase directement dans le tissu pancréatique, tandis que le protocole standard est pour lui insuffler dans le canal pancréatique. 3) Nous nous séparons les îlots en utilisant un gradient de Ficoll discontinu au lieu de recueillir les îlots à partir d&#39;un gradient de Ficoll continu en utilisant un processeur cellulaire COBE. Dans les cas où le prélèvement chirurgical est trop fibreux ou rares pour isoler un nombre suffisant d&#39;îlots, les tissus peuvent encore être récupérées par microdissection par capture laser (LCM) 10. Cela permet à des données d&#39;expression génique à être récupéré à partir de pratiquement tous les spécimens, même si l&#39;isolement des îlots échoue ou si le rendement est très faible. Malheureusement, LCM ne produisent pas de cellules vivantes pour des études fonctionnelles et leur montant est généralement insuffisante pour l&#39;analyse protéomique. Ainsi, en utilisant LCM en parallèle avec notre protocole digestion par la collagénase pour récupérer les îlots peut être le moyen le plus efficace pour traiter les prélèvements chirurgicaux. Lors de la collecte des tissus pour l&#39;isolement des îlots de pancréatectomies partielle, il est important d&#39;examiner attentivement l&#39;histoire clinique du patient et l&#39;état métabolique. Un patient partiellement pancréatectomisés pourrait être affectée par le type 3c diabète, le diabète secondaire à-dire le désordre du pancréas conduisant à une chirurgie 6. Parmi les 43 patients participant ayant subi cette chirurgie dans notre département en 2010, 32 étaient des non-diabétiques, 5 ont été affectés par le diabète de type 2 et 6 avaient de type 3c diabète. Ces données concordent avec les études précédentes pointant vers métabolisme du glucose et du diabète dans une fraction non négligeable de patients souffrant de cancer du pancréas ou pancréatite chronique 6. Nous avons considéré le diabète comme étant d&#39;origine primaire si elle a été diagnostiqué au moins un an avant l&#39;apparition des symptômes conduisant à 7 chirurgie pancréatique. Les niveaux d&#39;anticorps dirigés contre des autoantigènes îlot devraient également être mesurés pour évaluer une origine auto-immune potentielle du diabète 8. Parce qu&#39;un patient subissant une pancréatectomie pourrait souffrir d&#39;un diabète non diagnostiqué ou d&#39;être intolérants au glucose, tous les patients non diabétiques doivent être soumis à un test oral de tolérance au glucose avant la pancréatectomie 9.

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th></tr><tr><th> Équipement </th><th></th><th></th></tr><tr><td> 1 ml pipette sérologique (CELLSTAR) </td><td> Greiner Bio-One </td><td> 604181 </td></tr><tr><td> 10 ml pipette sérologique (CELLSTAR) </td><td> Greiner Bio-One </td><td> 607180 </td></tr><tr><td> 25 ml pipette sérologique (CELLSTAR) </td><td> Greiner Bio-One </td><td> 760180 </td></tr><tr><td> Seringue de 10 ml </td><td> BD (Becton, Dickinson and Company) </td><td> 300912 </td></tr><tr><td> 50 ml Seringue </td><td> BD (Becton, Dickinson and Company) </td><td> 300865 </td></tr><tr><td> Seringue 5 ml </td><td> BD (Becton, Dickinson and Company) </td><td> 309050 </td></tr><tr><td> 18 G 1,1 / 2 aiguilles Microlance 3 </td><td> BD (Becton, Dickinson and Company) </td><td> 304622 </td></tr><tr><td> 27 GX1 / 2 aiguilles </td><td> Braun </td><td> 4658300 </td></tr><tr><td> 27 GX3 / 4 Microlance aiguille 3 </td><td> BD (Becton, Dickinson and Company) </td><td> 302200 </td></tr><tr><td> 3 cm de culture cellulaire plat grille 2x2 mm </td><td> Nunc </td><td> 174926 </td></tr><tr><td> 20 cm boîte de culture de tissus </td><td> BD (Becton, Dickinson and Company) </td><td> 353003 </td></tr><tr><td> 6 cm Prise en main facile boîte de Pétri </td><td> BD (Becton, Dickinson and Company) </td><td> 351016 </td></tr><tr><td> 150 ml bouteille de stockage </td><td> Corning Incorporated </td><td> 431175 </td></tr><tr><td> 250 ml Erlenmeyer </td><td> Schott Duran </td><td> 21 217 36 </td></tr><tr><td> 500 ml Erlenmeyer </td><td> Schott Duran </td><td> 21 217 44 </td></tr><tr><td> 250 ml Visser le capuchon du tube conique Bas Centrifugeuse </td><td> Corning Incorporated </td><td> 430776 </td></tr><tr><td> Falcon de 50 ml conique du tube </td><td> BD (Becton, Dickinson and Company) </td><td> 352070 </td></tr><tr><td> 260 ml Easyflask non-traitées </td><td> Nunc </td><td> 156800 </td></tr><tr><td> Filtre Millex GV Unité Duropore (0,22 um) </td><td> Millipore </td><td> SLGV033RB </td></tr><tr><td> Bouteille vide Top filtre (PSE 70 mm de diamètre Membran, 0,22 um de taille des pores, la taille du cou 45 mm, 500 ml de volume) </td><td> Corning Incorporated </td><td> 431118 </td></tr><tr><td> Densitomètre (Densito 30PX) LWE37463 </td><td> Mettler Toledo </td><td> 51324450 </td></tr><tr><td> Rapide PES Unité filtre 0,2 um </td><td> Nalgene </td><td> 569-0020 </td></tr><tr><td> Batterie de chauffage </td><td> Technologies Inc BioRep </td><td> HC-02 </td></tr><tr><td> Multifuge 4 KS-R </td><td> Heraeus </td><td> 75015680 </td></tr><tr><td> Pompe Typ PD5206 </td><td> Heidolph </td><td> 523-52060-00-2 </td></tr><tr><td> Ricordi chambre (treillis métallique de 600 um de diamètre de pore) </td><td> Technologies Inc BioRep </td><td> Modèle 50-U-01, 0503-001 série </td></tr><tr><td> Préparation stand </td><td> Technologies Inc BioRep </td><td> 50-PS-01 </td></tr><tr><td> O-Rings </td><td> Technologies Inc BioRep </td><td> OU-50-U-01 </td></tr><tr><td> Marbles nitrure de silicium (15 mm de jeu 9) </td><td> Technologies Inc BioRep </td><td> SN-01 </td></tr><tr><td> Tubes Silicon </td><td> Tygon </td><td> R 3603 8,0 X4, 0 mm </td></tr><tr><td> Pinces chirurgicales </td><td> Braun </td><td> BD168R </td></tr><tr><td> Ciseaux chirurgicaux (Aesculap) </td><td> Braun </td><td> BC273R </td></tr><tr><td> Bain-marie MCO 200 </td><td> Grant </td><td> MCO 200 </td></tr><tr><th> Réactifs </th><th></th><th></th></tr><tr><td> Collagénase - RI Libérase&gt; (100 mg) </td><td> Roche </td><td> 11815032001 </td></tr><tr><td> D (+)-Glucose </td><td> Merck </td><td> 1.08337.1000 </td></tr><tr><td> Diméthylsulfoxyde (DMSO) </td><td> Merck </td><td> 1.16743.1000 </td></tr><tr><td> Diphénylthiocarbazone (DTZ) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D5130 </td></tr><tr><td> DNase I (100 mg) </td><td> Roche </td><td> 10104159001 </td></tr><tr><td> Dulbeccos 1xPBS </td><td> Laboratoires AAP </td><td> H15-002 </td></tr><tr><td> Electrolytsolution E154 </td><td> Serumwerk </td><td> 00509 </td></tr><tr><td> Sérum fœtal bovin (FBS) </td><td> Laboratoires AAP </td><td> A15-101 </td></tr><tr><td> Ficoll 400 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F9378 </td></tr><tr><td> Fœtale sérum bovin (FBS) </td><td> Gibco </td><td> 10270-106 </td></tr><tr><td> 2 - (4 - (2-hydroxyéthyl) - 1-pipérazinyl)-ethansulfons ‰ Ure (HEPES) </td><td> Roth </td><td> 9105.3 </td></tr><tr><td> NaOH 5 M </td><td> pharmacie clinique, hôpital </td><td> - </td></tr><tr><td> Pénicilline / streptomycine (100x) </td><td> Laboratoires AAP </td><td> P11-010 </td></tr><tr><td> Pipettaid (EXPRESS) </td><td> BD (Becton, Dickinson and Company) </td><td> 357591 </td></tr><tr><td> Potassiumchlorid </td><td> Fluka </td><td> 60132 </td></tr><tr><td> Potassiumdihydrogenphospate anhydre </td><td> JT Baker </td><td> 0241 </td></tr><tr><td> Potassiummonohydrogenphosphate </td><td> JT Baker </td><td> 3246-01 </td></tr><tr><td> Milieu RPMI 1640 [-] D-glucose [+] L-Glutamine </td><td> Gibco </td><td> 11879-020 </td></tr><tr><td> Milieu RPMI 1640 [+] L-Glutamine </td><td> Laboratoires AAP </td><td> E15-840 </td></tr><tr><td> Sodiumhydrogencarbonat </td><td> Merck </td><td> 1.06329.0500 </td></tr></tbody></table> Médias et Solutions Solution de dithizone <ul><li> Dissoudre 100 mg dans 10 ml DTZ DMSO et diluées dans 40 ml de PBS </li><li> Filtre stérile la solution (0,22 um) </li></ul> Solution enzymatique <ul><li> Dissoudre 100 RI Libérase mg dans 20 ml de milieu RPMI 1640 (sans les suppléments) </li><li> Dissoudre 100 mg de DNase dans 1 ml du milieu RPMI 1640 (sans les suppléments) </li><li> Filtre stérile la solution (0,22 um) et de garder l&#39;enzyme sur la glace </li></ul> Lavez les médias (1000ml/5.5mM glucose) <ul><li> Dissoudre 100 ml de FBS (inactivé par la chaleur) </li><li> Ajouter 450 ml de RPMI 1640 (pas de glucose) </li><li> Ajouter 450 ml de RPMI 1640 (11 mM de glucose) </li><li> Filtre stérile la solution (0,22 um) </li></ul> Islet culture médiatique (500ml / 5,5 mM de glucose) <ul><li> Dissoudre 10 ml d&#39;HEPES 1M (pH 7,4) </li><li> Ajouter 50 ml de FBS </li><li> Ajouter 5 ml de pénicilline / streptomycine (100x) </li><li> Ajouter 2,75 ml 1 une solution de glucose M </li><li> Ajouter 432,25 ml de RPMI 1640 (pas de glucose) </li><li> Filtre stérile la solution (0,22 um) </li></ul> Euro Collins Solution <ul><li> 4083 hydrogénophosphate de potassium g </li><li> 70,0 g de glucose </li><li> 2237 g de chlorure de potassium </li><li> 14,80 g de potassium monohydrogénophosphate </li><li> 1680 g d&#39;hydrogénocarbonate de sodium </li><li> 40 ml de solution d&#39;électrolyte (E 154) </li><li> pH 7,4 </li><li> Ajouter de l&#39;eau distillée jusqu&#39;à 2000 ml </li><li> Filtre stérile la solution (0,22 um) </li></ul> Solution mère de Ficoll <ul><li> Ajouter 1000 ml d&#39;Euro Collins solution à 500 g de Ficoll </li><li> Ajouter 8,94 g d&#39;HEPES </li><li> Remuer jusqu&#39;à ce jour au lendemain Ficoll est résolu </li><li> pH 7,4 </li><li> Mesurer la densité </li></ul> Dégradés de Ficoll <ul><li> Calculez le montant de FBS, Euro Collins solution et la solution de Ficoll stock en fonction de la densité </li><li> Combinez les trois solutions et mesurer la densité avec un densitomètre </li><li> Ajouter Euro Collins solution ou la solution de Ficoll stock jusqu&#39;à ce que la densité est ajustée </li><li> Stérile, filtrer la solution (0,22 m) et stocker à 4 ° C </li></ul>

isolation of human islets from partially pancreatectomized patients

Les enquêtes sur la pathogenèse de diabète de type 2 et les îlots de Langerhans dysfonctionnement 1 ont été entravés par la disponibilité limitée des îlots de diabète de type 2 à partir de 2 donneurs d&#39;organes. Ici, nous partageons notre protocole pour isoler les îlots de tissu pancréatique humaine obtenue à partir diabétiques de type 2 et les patients non diabétiques ayant subi une pancréatectomie partielle due à des maladies pancréatiques différentes (tumeurs pancréatiques bénignes ou malignes, la pancréatite chronique, et cholédoque ou de tumeurs duodénales) . Tous les patients concernés ont donné leur consentement à cette étude, qui avait également été approuvé par le comité d&#39;éthique local. Les spécimens chirurgicaux ont été immédiatement remis à la pathologiste qui a choisi douce et saine du tissu pancréatique pour l&#39;isolement des îlots apparaissant, en conservant les tissus endommagés à des fins diagnostiques. Nous avons constaté que d&#39;isoler plus de 1.000 îlots, nous avons dû commencer avec au moins 2 g de tissu pancréatique. Également essentiel de notre protocole était d&#39;visiblement distendre les tissus lors de l&#39;injection des médias contenant des enzymes et ensuite on mâche pour faciliter la digestion en augmentant la surface. Pour étendre l&#39;applicabilité de notre protocole d&#39;inclure le cas occasionnels dans lequel une grande quantité (&gt; 15g) de tissu pancréatique humaine n&#39;est disponible, nous avons utilisé une chambre de Ricordi (50 ml) pour digérer les tissus. Pendant la digestion, nous avons manuellement secoué la chambre Ricordi 3 à une intensité qui varie selon éprouvette en fonction de son niveau de fibrose des tissus. Un gradient discontinu de Ficoll a ensuite été utilisée pour séparer les îlots du tissu acineux. Nous avons noté que le culot de tissus devraient être assez petit pour être homogène en suspension dans un milieu de Ficoll avec une densité de 1,125 g / ml. Après isolement, nous avons cultivé des îlots dans des conditions sans stress (pas de secouer ou de rotation) avec 5% de CO 2 à 37 ° C pendant au moins 48 h afin de faciliter leur récupération fonctionnelle. L&#39;application généralisée de notre protocole et de son amélioration future pourrait permettre la récolte en temps opportun de grandes quantités d&#39;îlots humains à partir diabétique et clinique correspond sujets non diabétiques, grandement progresser la recherche du diabète de type 2.

Notre protocole a produit une moyenne d&#39;environ 500 îlots par gramme de tissu pancréatique, bien que ce qui a beaucoup varié entre les préparations en raison principalement de différences dans la fibrose et l&#39;activité de la collagénase. Nous avons atteint une pureté&gt; 90% des îlots par coloration d&#39;abord avec la dithizone lors du traitement des tissus, puis triées à la main les 24 heures après l&#39;isolement. Pour déterminer la qualité des îlots purifiés, nous avons testé pour 25 mM de glucose stimulée par la sécrétion d&#39;insuline dans des conditions statiques pendant 2 heures. Nous avons trouvé la sécrétion d&#39;insuline comparable à celle obtenue à partir des îlots ECIT îlot isolement et centres de transplantation. Comme des îlots isolés de pancréas partiellement pancréatectomisés sont pas destinés à la transplantation d&#39;îlots, l&#39;évaluation de l&#39;IEQ totale n&#39;a pas été considérée comme un facteur critique. Surtout, notre méthode nous a permis d&#39;isoler les îlots pour des études fonctionnelles à partir de 25 patients pancréatectomisés partielle entre 2005 et 2008 5. Ces îlots ont été analysés pour le glucose stimulée par la sécrétion d&#39;insuline et de l&#39;expression des protéines spécifiques par Western blot et immunohistochimie. Les îlots isolés partiellement pancreatecomized pancréas peut aussi être utilisé pour comparer les gènes et les profils d&#39;expression de protéines, de l&#39;apparence ultrastructurale et réponses fonctionnelles des îlots non-diabétiques et diabétiques. Parce qu&#39;il ya plus de patients subissant une pancréatectomie partielle qu&#39;il ya de donneurs d&#39;organes, notre protocole pourrait permettre suffisamment d&#39;échantillons et de données à recueillir pour l&#39;analyse statistique robuste.

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Isolation of Human Islets from Partially Pancreatectomized Patients

L&#39;alimentation de type 2 diabétiques îlots pour la recherche est insuffisant. Ici, nous partageons notre protocole pour isoler les îlots de patients subissant une pancréatectomie partielle. Cette approche représente un lieu unique pour obtenir des îlots de diabétiques de type 2 et cliniquement correspondance des sujets non diabétiques, en nombre suffisant pour les études fondamentales et cliniques.

L&#39;isolement des îlots humains à partir des patients partiellement pancréatectomisés

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 ...

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Medicine

15.9K vues.  University Hospital Carl Gustav Carus, University of Technology Dresden. L'alimentation de type 2 diabétiques îlots pour la recherche est insuffisant. Ici, nous partageons notre protocole pour isoler les îlots de patients subissant une pancréatectomie partielle. Cette approche représente un lieu unique pour obtenir des îlots de diabétiques de type 2 et cliniquement correspondance des sujets non diabétiques, en nombre suffisant pour les études fondamentales et cliniques.

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Staining Protocols for Human Pancreatic Islets

Estimates of islet area and numbers and endocrine cell composition in the adult human pancreas vary from several hundred thousand to several million and beta mass ranges from 500 to 1500 mg 1-3. With this known heterogeneity, a standard processing and staining procedure was developed so that pancreatic regions were clearly defined and islets characterized using rigorous histopathology and immunolocalization examinations. 
Standardized procedures for processing human pancreas recovered from organ donors are described in part 1 of this series. The pancreas is processed into 3 main regions (head, body, tail) followed by transverse sections. Transverse sections from the pancreas head are further divided, as indicated based on size, and numbered alphabetically to denote subsections. This standardization allows for a complete cross sectional analysis of the head region including the uncinate region which contains islets composed primarily of pancreatic polypeptide cells to the tail region.
The current report comprises part 2 of this series and describes the procedures used for serial sectioning and histopathological characterization of the pancreatic paraffin sections with an emphasis on islet endocrine cells, replication, and T-cell infiltrates. Pathology of pancreatic sections is intended to characterize both exocrine, ductular, and endocrine components. The exocrine compartment is evaluated for the presence of pancreatitis (active or chronic), atrophy, fibrosis, and fat, as well as the duct system, particularly in relationship to the presence of pancreatic intraductal neoplasia4. Islets are evaluated for morphology, size, and density, endocrine cells, inflammation, fibrosis, amyloid, and the presence of replicating or apoptotic cells using H&amp;E and IHC stains. 
The final component described in part 2 is the provision of the stained slides as digitized whole slide images. The digitized slides are organized by case and pancreas region in an online pathology database creating a virtual biobank. Access to this online collection is currently provided to over 200 clinicians and scientists involved in type 1 diabetes research. The online database provides a means for rapid and complete data sharing and for investigators to select blocks for paraffin or frozen serial sections.

This video demonstrates procedures for characterization of human pancreatic islets using hematoxylin and eosin (H&E) and immunohistochemistry (IHC). Pancreatic sections from head, body, and tail regions are stained by both H&amp;E and IHC to determine islet endocrine composition (insulin, glucagon, and pancreatic polypeptide), cell replication (Ki67), and inflammatory infiltrates (H&E, CD3). The uncinate region is localized using IHC for pancreatic polypeptide.

Protocoles de coloration pour des îlots pancréatiques humains

Estimates of islet area and numbers and endocrine cell composition in the adult human pancreas vary from several hundred thousand to several million and ...

Recherche

Médecine

Improved Protocol For Laser Microdissection Of Human Pancreatic Islets From Surgical Specimens

Laser microdissection (LMD) is a technique that allows the recovery of selected cells and tissues from minute amounts of parenchyma 1,2. The dissected cells can be used for a variety of investigations, such as transcriptomic or proteomic studies, DNA assessment or chromosomal analysis 2,3. An especially challenging application of LMD is transcriptome analysis, which, due to the lability of RNA 4, can be particularly prominent when cells are dissected from tissues that are rich of RNases, such as the pancreas. A microdissection protocol that enables fast identification and collection of target cells is essential in this setting in order to shorten the tissue handling time and, consequently, to ensure RNA preservation. 
Here we describe a protocol for acquiring human pancreatic beta cells from surgical specimens to be used for transcriptomic studies 5. Small pieces of pancreas of about 0.5-1 cm3 were cut from the healthy appearing margins of resected pancreas specimens, embedded in Tissue-Tek O.C.T. Compound, immediately frozen in chilled 2-Methylbutane, and stored at -80 &deg;C until sectioning. Forty serial sections of 10 &mu;m thickness were cut on a cryostat under a -20 &deg;C setting, transferred individually to glass slides, dried inside the cryostat for 1-2 min, and stored at -80 &deg;C. 
Immediately before the laser microdissection procedure, sections were fixed in ice cold, freshly prepared 70% ethanol for 30 sec, washed by 5-6 dips in ice cold DEPC-treated water, and dehydrated by two one-minute incubations in ice cold 100% ethanol followed by xylene (which is used for tissue dehydration) for 4 min; tissue sections were then air-dried afterwards for 3-5 min. Importantly, all steps, except the incubation in xylene, were performed using ice-cold reagents - a modification over a previously described protocol 6. utilization of ice cold reagents resulted in a pronounced increase of the intrinsic autofluorescence of beta cells, and facilitated their recognition. For microdissection, four sections were dehydrated each time: two were placed into a foil-wrapped 50 ml tube, to protect the tissue from moisture and bleaching; the remaining two were immediately microdissected. This procedure was performed using a PALM MicroBeam instrument (Zeiss) employing the Auto Laser Pressure Catapulting (AutoLPC) mode. The completion of beta cell/islet dissection from four cryosections required no longer than 40-60 min. Cells were collected into one AdhesiveCap and lysed with 10 &mu;l lysis buffer. Each single RNA specimen for transcriptomic analysis was obtained by combining 10 cell microdissected samples, followed by RNA extraction using the Pico Pure RNA Isolation Kit (Arcturus). This protocol improves the intrinsic autofluorescence of human beta cells, thus facilitating their rapid and accurate recognition and collection. Further improvement of this procedure could enable the dissection of phenotypically different beta cells, with possible implications for better understanding the changes associated with type 2 diabetes.

Laser microdissection is a technique that allows the recovery of selected cells from minute amounts of parenchyma. Here we describe a protocol for acquiring human pancreatic islets from surgical specimens to be used for transcriptomic studies. Our protocol improves the intrinsic autofluorescence of human beta cells, thus facilitating their collection.

Protocole amélioré pour la microdissection laser d&#39;îlots pancréatiques humains à partir de spécimens chirurgicaux

Laser microdissection (LMD) is a technique that allows the recovery of selected cells and tissues from minute amounts of parenchyma 1,2. The dissected ...

Dynamic Visual Tests to Identify and Quantify Visual Damage and Repair Following Demyelination in Optic Neuritis Patients

In order to follow optic neuritis patients and evaluate the effectiveness of their treatment, a handy, accurate and quantifiable tool is required to assess changes in myelination at the central nervous system (CNS). However, standard measurements, including routine visual tests and MRI scans, are not sensitive enough for this purpose. We present two visual tests addressing dynamic monocular and binocular functions which may closely associate with the extent of myelination along visual pathways. These include Object From Motion (OFM) extraction and Time-constrained stereo protocols. In the OFM test, an array of dots compose an object, by moving the dots within the image rightward while moving the dots outside the image leftward or vice versa. The dot pattern generates a camouflaged object that cannot be detected when the dots are stationary or moving as a whole. Importantly, object recognition is critically dependent on motion perception. In the Time-constrained Stereo protocol, spatially disparate images are presented for a limited length of time, challenging binocular 3-dimensional integration in time. Both tests are appropriate for clinical usage and provide a simple, yet powerful, way to identify and quantify processes of demyelination and remyelination along visual pathways. These protocols may be efficient to diagnose and follow optic neuritis and multiple sclerosis patients.
In the diagnostic process, these protocols may reveal visual deficits that cannot be identified via current standard visual measurements. Moreover, these protocols sensitively identify the basis of the currently unexplained continued visual complaints of patients following recovery of visual acuity. In the longitudinal follow up course, the protocols can be used as a sensitive marker of demyelinating and remyelinating processes along time. These protocols may therefore be used to evaluate the efficacy of current and evolving therapeutic strategies, targeting myelination of the CNS.

Object From Motion (OFM) and Time-constrained stereo protocols are sensitive tools to identify monocular and binocular dynamic visual function deficits, which are uniquely affected in optic neuritis patients. Furthermore, these tests may be used as quantitative noninvasive tools to assess the extent of myelination along visual pathways.

Tests visuels dynamiques pour identifier et quantifier les dommages visuels et de réparation suite de démyélinisation dans la névrite optique patients

In order to follow optic neuritis patients and evaluate the effectiveness of their treatment, a handy, accurate and quantifiable tool is required to ...

Isolation and Functional Characterization of Human Ventricular Cardiomyocytes from Fresh Surgical Samples

Cardiomyocytes from diseased hearts are subjected to complex remodeling processes involving changes in cell structure, excitation contraction coupling and membrane ion currents. Those changes are likely&#160;to be responsible for the increased arrhythmogenic risk and the contractile alterations leading to systolic and diastolic dysfunction in cardiac patients. However, most information on the alterations of myocyte function in cardiac diseases has come from animal models.
Here we describe and validate a protocol to isolate viable myocytes from small surgical samples of ventricular myocardium from patients undergoing cardiac surgery operations. The protocol is described in detail. Electrophysiological and intracellular calcium measurements are reported to demonstrate the feasibility of a number of single cell measurements in human ventricular cardiomyocytes obtained with this method.
The protocol reported here can be useful for future investigations of the cellular and molecular basis of functional alterations of the human heart in the presence of different cardiac diseases. Further, this method can be used to identify novel therapeutic targets at cellular level and to test the effectiveness of new compounds on human cardiomyocytes, with direct translational value.

Current knowledge on the cellular basis of cardiac diseases mostly relies on studies on animal models. Here we describe and validate a novel method to obtain single viable cardiomyocytes from small surgical samples of human ventricular myocardium. Human ventricular myocytes can be used for electrophysiological studies and drug testing.

L&#39;isolement et la caractérisation fonctionnelle de Human ventriculaire cardiomyocytes à partir des échantillons chirurgicaux frais

Cardiomyocytes from diseased hearts are subjected to complex remodeling processes involving changes in cell structure, excitation contraction coupling and ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly isolated from human tissues and serially propagated in immunodeficient mice, typically through antibody labeling of subpopulations of cells and fractionation by flow cytometry. However, the unique clinical features of prostate cancer have considerably limited the study of prostate CSCs from fresh human tumor samples. We recently reported the isolation of prostate CSCs directly from human tissues by virtue of their HLA class I (HLAI)-negative phenotype. Prostate cancer cells are harvested from surgical specimens and mechanically dissociated. A cell suspension is generated and labeled with fluorescently conjugated HLAI and stromal antibodies. Subpopulations of HLAI-negative cells are finally isolated using a flow cytometer. The principal limitation of this protocol is the frequently microscopic and multifocal nature of primary cancer in prostatectomy specimens. Nonetheless, isolated live prostate CSCs are suitable for molecular characterization and functional validation by transplantation in immunodeficient mice.

The isolation of cancer stem cells (CSCs) directly from human tissues is requisite for their biological characterization. This manuscript describes a methodology for the isolation of prostate CSCs from human tissues, while also providing tips on troubleshooting difficult steps.

Isolement de cellules souches du cancer à partir d&#39;échantillons cancer de la prostate humaine

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, the role of beta-cell dysfunction in type 2 diabetes has been clearly established 2. Research progress has required methods for the isolation of pancreatic islets. The protocol of the islet isolation presented here shares many common steps with protocols from other groups, with some modifications to improve the yield and quality of isolated islets from both the wild type and diabetic Leprdb (db/db) mice. A live-cell 2-photon imaging method is then presented that can be used to investigate the control of insulin secretion within islets.

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

We present here a protocol for the isolation of islets from the mouse model of type 2 diabetes, Leprdb and details of a live-cell assay for measurement of insulin secretion from intact islets that utilizes 2 photon microscopy.

Lepr<sup&gt; Db</sup&gt; Modèle de souris de diabète de type 2: pancréatique isolement des îlots et des cellules vivantes 2-Photon Imaging d&#39;îlots intacts

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, ...

Isolation and Profiling of MicroRNA-containing Exosomes from Human Bile

Exosome research in the last three years has greatly extended the scope towards identification and characterization of biomarkers and their therapeutic uses.
Exosomes have recently been shown to contain microRNAs (miRs). MiRs themselves have arisen as valuable biomarkers for diagnostic purposes. As specimen collection in clinics and hospitals is quite variable, miRNA isolation from whole bile varies substantially. To achieve robust, accurate and reproducible miRNA profiles from collected bile samples in a simple manner required the development of a high-quality protocol to isolate and characterize exosomes from bile. The method requires several centrifugations and a filtration step with a final ultracentrifugation step to pellet the isolated exosomes. Electron microscopy, Western blots, flow cytometry and multi-parameter nanoparticle optical analysis, where available, are crucial characterization steps to validate the quality of the exosomes. For the isolation of miRNA from these exosomes, spiking the lysate with a non-specific, synthetic miRNA from a species like Caenorhabditis elegans, i.e., Cel-miR-39, is important for normalization of RNA extraction efficiency. The isolation of exosome from bile fluid following this method allows the successful miRNA profiling from bile samples stored for several years at -80 &#176;C.

Bile fluid is a valuable source of extracellular vesicles/exosomes that contain potentially important biomarkers. This protocol represents a robust method to isolate exosomes from human bile for further analyses including miRNA profiling.

L&#39;isolement et le profilage des exosomes de Bile humain contenant microARN-

Exosome research in the last three years has greatly extended the scope towards identification and characterization of biomarkers and their therapeutic ...

Full-root Aortic Valve Replacement by Stentless Aortic Xenografts in Patients with Small Aortic Roots

In patients with small aortic roots who need an aortic valve replacement with biological valve substitutes, the implantation of the stented pericardial valve might not meet the functional needs. The implantation of a too-small stented pericardial valve, leading to an effective orifice area indexed to a body surface area less than 0.85 cm2/m2, is regarded as prosthesis-patient mismatch (PPM). A PPM negatively affects the regression of left ventricular hypertrophy and thus the normalization of left ventricular function and the alleviation of symptoms. Persistent left ventricular hypertrophy is associated with an increased risk of arrhythmias and sudden cardiac death. In the case of predictable PPM, there are three options: 1) accept the PPM resulting from the implantation of a stented pericardial valve when comorbidities of the patient forbid the more technically demanding operative technique of implanting a larger prosthesis, 2) enlarge the aortic root to accommodate a larger stented valve substitute, or 3) implant a stentless biological valve or a homograft. Compared to classical aortic valve replacement with stented pericardial valves, the full-root implantation of stentless aortic xenografts offers the possibility of implanting a 3-4 mm larger valve in a given patient, thus allowing significant reduction in transvalvular gradients. However, a number of cardiac surgeons are reluctant to transform a classical aortic valve replacement with stented pericardial valves into the more technically challenging full-root implantation of stentless aortic xenografts. Given the potential hemodynamic advantages of stentless aortic xenografts, we have adopted full-root implantation to avoid PPM in patients with small aortic roots necessitating an aortic valve replacement. Here, we describe in detail a technique for the full-root implantation of stentless aortic xenografts, with emphasis on the management of the proximal suture line and coronary anastomoses. Limitations of this technique and alternative options are discussed.

Full-root aortic valve replacement by stentless aortic xenograft is a viable option in patients with small aortic roots. We describe, a technique for the full-root implantation of stentless aortic xenografts, with emphasis on the management of the proximal suture line and coronary anastomoses, and discuss its limitations and alternative options.

Remplacement de la vanne aortique à racines complètes par des xénogreffes d&#39;aorte stentless chez des patients ayant de petites racines aortiques

In patients with small aortic roots who need an aortic valve replacement with biological valve substitutes, the implantation of the stented pericardial ...

Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized stromal cells and immune cells, are responsible for the secretion of hormonal and inflammatory factors which are critical for successful blastocyst implantation, placental development and play a role in the initiation of labor at term and preterm. Many pregnancy complications can arise from perturbations of a fine balance of different cell populations comprising decidua. Alterations in the proportion of specific decidual cell types may disrupt these crucial processes and increase the risk of developing serious complications of pregnancy, such as embryo implantation failure, intrauterine growth restriction, preeclampsia and preterm labor. The protocol outlined here demonstrates a cost and time effective method for the isolation of primary human decidual cells collected from the fetal membranes of term placentae. By combining enzymatic digestion and gentle mechanical disruption of the decidual tissue, a high yield of decidual cells was obtained with virtually no chorion contamination. Importantly, isolated decidual cells were characterized (stromal cells (55-60%), leukocytes (35%), epithelial (1%) or trophoblast (0.01%) cells) and maintained high viability (80%) which was confirmed by multicolor imaging flow cytometry assay. This protocol is specific to the decidua parietalis and can be adapted to first and second trimester placentae. Once isolated, decidual cells can be used for a multitude of experimental applications aiming to understand the role of different decidual cell sub-populations in pregnancy complications.

This protocol demonstrates a method for the isolation of primary human decidual cells collected from the fetal membranes of term placentae which can be used for a variety of applications (i.e. immunocytochemistry, flow cytometry, etc.) aiming to study the role of different cell populations in pregnancy complications.

Isolement de cellules primaires de Decidual humaines des Membranes fœtales des placentas à terme

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized ...

Intraportal Transplantation of Pancreatic Islets in Mouse Model

Pancreatic islet transplantation to reduce hyperglycemia is highly successful in rodents with chemically-induced diabetes. The most common transplantation site in experimental islet transplantation is the kidney capsule. However, as less is known about the interaction of pancreatic islets with blood constituents, it also makes sense to utilize the portal vein approach in experimental islet transplantation.
This protocol demonstrates an intraportal islet transplantation technique in NMRI nude mice. Streptozotocin (180 mg/kg) is injected intraperitoneally to induce hyperglycemia in recipient mice. They are considered as diabetic at a non-fasting blood glucose level greater than 20 mmol/L. One day prior to transplantation, mouse pancreatic islets are isolated from the donor pancreas by collagenase digestion; a minimum of 350 islets are utilized per diabetic recipient. Depending upon the islet isolation yield, two or more donor mice are utilized per recipient. After overnight culture at 37 &#176;C, islets are administered into the recipient liver via the portal vein. After surgery, the mice are protected in red Makrolon houses and observed until are awake. This protocol maintains glycemic control for 120 days in syngeneic mice and 15 days in allogeneic mice.

Pancreatic islet transplantation is a way to achieve normoglycemia in type 1 diabetes. This article focuses on the transplantation technique through the intraportal route to maintain normal glucose levels in diabetic mice.

Intraporte Transplantation d’îlots pancréatiques dans le modèle murin

Pancreatic islet transplantation to reduce hyperglycemia is highly successful in rodents with chemically-induced diabetes. The most common transplantation ...