説明するすべての手順を研究し、すべての動物のプロトコルにおける動物の管理と使用のための健康ガイドラインの国立研究所に準拠して実施されていますがオレゴン健康科学大学動物実験用の委員会によって承認された。 1。外科的準備<ol><li>マウスの重量を量る。説明する手順は、gの20〜25重量C57BL / 6マウスで実行されます麻酔は、イソフルラン3から4パーセントを使用してインダクションボックスに誘導し、その後、空気/酸素混合物中のイソフルラン1.5から2.5パーセントを使用して維持されます。 </li><li>目に潤滑剤を塗布し、加熱パッド上に動物の仰臥位に配置します。テープを使用して4四肢を固定化する。後肢足が中立位置で録音されることがあります、しかし、前肢は胸骨圧迫の間に完全な胸壁の遠足を可能にするために、できるだけ胸壁に近いとして保護する必要があります。 </li><li>直腸温度プローブを注油して置きます。温度は37.0を維持するために設定されている電子温度調節器（Digi - Keyはセンス、コールパーマー、バーノンヒルズIL）、℃に接続された加熱パッドとランプを使用して制御されます。それは動物内の温度勾配は、非流動状態の間に開発できる可能性があるため、それは温度を測定し、関心の器官の近くに制御することが重要です。 </li><li> 2.5センチメートル22 GAテフロンカテーテル（Insyte - W、BD、フランクリンNJ）と直角イントロ（IN Frova紹介者、クックメディカル、ブルーミントン）のカット先端を使用して気管を挿管する。気管挿管の他の方法が許容される、しかし、斜めイントロデューサーの使用は、静脈​​カテーテルの挿入のための外科的露出を最適化する少し延長位置、の首の適切な位置決めが可能。気管内カテーテルのハブは、切歯に縫合糸のループで固定し、胸部圧迫の間に頭部を固定するためにわずかな張力で保持されます。 </li><li>機械的に140μL、150回/分に設定されて齧歯類の人工呼吸器とマウスを換気する。このプロトコルは常に20〜25グラムの動物で行われるため、これは重量の調整はされません。麻酔を過剰深めるしないでください。この損なう蘇生などのエンド呼気圧力を適用するために人工呼吸器を設定しないでください。 </li><li>無菌操作や手術用顕微鏡を使用して、頸静脈に事前にフラッシュされるPE - 10カテーテルを配置。どちらの側も使用できますが、オペレータに最も近い側の使用は、胸骨圧迫や他の操作中にカテーテルdislodgementの可能性が減少することができます。 0.5％bupivicaine、0.1 mLのは、術後疼痛を制御するために、創傷の端にinfitratedています。 </li><li>シアノアクリレート系外科用接着剤で皮膚の閉鎖にPE - 10カテーテルを固定します。 </li><li>皮下心電図の電極を配置し、監視装置に接続します。信号自体の信号経路と最大化に細心の注意を払うことが蘇生の成功に不可欠です。すべてのワイヤーが動作して表面に固定されていることを確認し、信号の交差を最小限に抑え、信号経路内に絶縁体を（中空針または撚り線で空気のような）最小限に抑えることができます。 nonstrandedリード線に接続されている固体針を購入または実験室で行うことができる。接続が完了すると、モニター上にEKG信号を最適化する。 </li></ol> 2。心停止<ol><li> 37.5℃ - 直腸温36.5 ° Cとして定義され、マウスが正常体温になっていることを確認静脈内、室温0.5 M塩化カリウムの40μLを管理し、心電図上のトレース等電点電気泳動を観察。体重の用量調整はレンジ内で20から25 gの必要はありません。逮捕のタイマーを開始します。 </li><li>人工呼吸器を外します。麻酔蒸気を中止してください。加熱パッドと心電図のモニタリングを妨げる可能性のある電子的なノイズを生成する任意の他の機器の電源を切ります。マウスオーバー絶縁毛布を置きます。 </li><li>毎分は、心停止時の温度を記録します。必要に応じて、加熱ランプは、正常体温の範囲にコアの温度を起動するために使用されることがあります。心停止時には、蘇生のために物資や機器（例えば、エピネフリンの注射器）を準備する。チェックリストは、生存に必須である途切れない蘇生を、確保するために役立ちます。 </li><li> 7分、心停止の30秒後に、人工呼吸器を再接続し、事前に逮捕の設定で一回換気量を維持し、180回/分に速度を増加させる。 </li><li> 8分で、300 BPMで胸骨圧迫を開始する。心電図上のモーションアーチファクトは、裁判官CPR率に使用することができます。胸骨圧迫は、人差し指と正中線の左に剣状突起とわずかに上に5 mmを納入してください。胸は、前後の距離の1/3-1/2を圧縮する必要があり、完全なリコイルは胸骨圧迫の間で許可されている必要があります。指の位置と最適な圧縮圧力は絶対に重要です。このモデルの生存率を達成するために失敗は、ほとんど常に次善のCPRによるものです。 </li><li> CPRの最初の30秒で、15μg/ mLのに希釈エピネフリンの0.5 mLを、煎じる。合計エピネフリンの投与量は8-12μgのです。慎重に自発的な循環（ROSC）のリターンのために心電図を観察。狭い複雑なQRS群は、圧縮アーチファクトとの間で見られている。 ROSCは通常、CPRを開始した後90秒と2分の間で発生します。 ROSCは3分で発生しない場合蘇生は放棄されます。頻繁に心室性期外収縮とEKG軸の変化は、ROSC後の最初の2分で観察され、ほとんどの場合2分で安定した洞性頻脈に解決されています。 </li><li>蘇生とエピネフリンの投与量の合計時間を記録します。毎分の心拍再開後の10分間温度を記録します。 </li><li> EKGのリードは通常、ROSC後の12〜15分以内に、自発呼吸の開始時に削除することができます。 </li><li>自発呼吸数が&gt; 60/minである気管を抜管する。 </li><li>食べ物と水への容易なアクセスを確保する、℃で最初の2時間の処置後、37に設定されて温度制御された表面上回復ケージにマウスを置きます。マウスが完全に麻酔から回復し、アクティブになっているときにケージは、標準的な術後の住宅の条件に移動させることができる。 </li></ol> 3。瀉血/灌流-固定と腎臓の収穫<ol><li> CA / CPR後24時間は、イソフルラン3から4パーセントで麻酔を誘導し、ホルマリンでの使用に適しているヒュームフード内の外科表面上に仰臥位での動物を確保する.. </li><li>徐々に5％に麻酔薬の蒸気濃度を増加させることにより麻酔を深め、自発呼吸の停止によって証明されるようにマウスが深く麻酔であることを確認してください。 </li><li>クラムシェルの開胸を行い、標準的な技術に応じて心臓の左心室の心尖部穿刺によりマウスを放血させる。 </li><li>同じ針を介して、ゆっくりと注入して0.9％生理食塩水を投与する。ニックネームはさみで右心耳、灌流/瀉血をacclerateする。開腹を行い、腎臓を観察。彼らはブランチングされている場合、生理食塩水は固定用ホルマリン4％に変更される場合があります。腎臓は、尿細管上皮壊死の定量化のためのフッ素ヒスイのBとパラフィンとステンドグラスに埋め込まれています。 </li></ol> 4。代表的な結果： CAが誘導されると、動脈圧（MAP）とゼロに近いの地域の腎血流量（RRBCF）ドロップを意味し、蘇生を開始するまで（ 図1）安定している。 CA / CPR後24時間、腎機能の血清指標（血中尿素窒素、BUNおよびクレアチニン）が有意に偽手術動物と比較して上昇している。 AST / ALTは、深遠な全身の虚血（ 図2）の証拠を提供し、また上昇です。好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（NGAL）、腎血性傷害の感度の高い指標は、CA / CPR（ 図3）の後に大規模な上方制御24時間です。最後に、顕微鏡写真は、ヘマトキシリンおよびエオシン染色（ 図4、パネルA）とフッ素ヒスイのBで染色した髄質尿細管上皮の広範な細胞死に充填尿細管上皮および管腔の菲薄化と虚血性腎傷害の典型的な斑状、髄質壊死を示す（ 図4、パネルB）。 <img src="/files/ftp_upload/3116/3116fig1.jpg" alt="図1" /> 図1心停止は心停止の期間を通じて、地域腎皮質血流量のほぼ完全な停止（RRCBF）で、その結果大腿動脈で測定された動脈圧（MAP）は、（影付きの平均としてここに示して、灌流圧のインスタント損失を誘発する面積）。胸骨圧迫とエピネフリンを返しますMAP正常にし、RRCBFと蘇生は着実にポスト蘇生期間に上昇する。14から許可を得て転載 。 <img src="/files/ftp_upload/3116/3116fig2.jpg" alt="図2" /> 図2 24時間処置後、血中尿素窒素（BUN）、血清クレアチニン、および尿細管細胞死の程度は、すべてのような偽の手順で処理した動物と比較してCA / CPRを受けた有する動物で有意に上昇です。偽処置動物と比較して、CA / CPRは、ここでCA / CPRマウスに肝機能酵素の大規模な上昇（ALT）アラニンアミノトランスフェラーゼとアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（AST）によって証明される汎organismal虚血性傷害を、引き起こす。 <img src="/files/ftp_upload/3116/3116fig3.jpg" alt="図3" /> 図3。ウエスタンブロットでは、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（NGAL）、腎血性傷害の敏感な指標にポリクローナル抗体を使用して実行。尿サンプルは、（上記のA、B、C、およびDというラベルが付いています）すぐに前に（&quot;プレ&quot;）と4匹のCA / CPR（&quot;24&quot;）の後に24時間を得られた。 NGALは、大規模マウスにおいてアップレギュレートされCA / CPR後の尿は14から許可を得て転載 。 <img src="/files/ftp_upload/3116/3116fig4.jpg" alt="図4" /> 図4。）ヘマ ​​トキシリンとエオシンでは、CA / CPR後の腎組織の24の短軸の肺門部の汚れ。管状プラグと延髄とcorticomedullary細管への斑状が明確なダメージがあります。矢印はcorticomedullary接合部の腫れ、濃縮した核と、破損した細管を指す。 B）Flouro -ヒスイBは、CA / CPRの後に、同じ動物で同じ地域の24を染色。フッ素ヒスイBの染色壊死細胞明るい緑、斑状corticomedullary尿細管壊死を示す。矢印はcorticomedullary接合部で明るくステンド損傷した細管を指す。これらの知見は、アキを開発し、AKIの他の動物モデルで生成されるものとは違って、人間から腎生検所見と実質的に類似しています。

<ol>
	<li>Chertow, G. M., Lazarus, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictors+of+mortality+and+the+provision+of+dialysis+in+patients+with+acute+tubular+necrosis.+the+auriculin+anaritide+acute+renal+failure+study+group.">Predictors of mortality and the provision of dialysis in patients with acute tubular necrosis. the auriculin anaritide acute renal failure study group.</a> J Am Soc Nephrol. 9, 692-698 (1998).</li><li>Lassnigg, A., Schmidlin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+changes+of+serum+creatinine+predict+prognosis+in+patients+after+cardiothoracic+surgery:+A+prospective+cohort+study.">Minimal changes of serum creatinine predict prognosis in patients after cardiothoracic surgery: A prospective cohort study.</a> J Am Soc Nephrol. 15, 1597-1605 (2004).</li><li>Lassnigg, A., Donner, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+renoprotective+effects+of+dopamine+and+furosemide+during+cardiac+surgery.">Lack of renoprotective effects of dopamine and furosemide during cardiac surgery.</a> J Am Soc Nephrol. 11, 97-104 (2000).</li><li>Metnitz, P. G., Krenn, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+acute+renal+failure+requiring+renal+replacement+therapy+on+outcome+in+critically+ill+patients.">Effect of acute renal failure requiring renal replacement therapy on outcome in critically ill patients.</a> Crit Care Med. 30, 2051-2058 (2002).</li><li>Uchino, S., Kellum, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+renal+failure+in+critically+ill+patients:+A+multinational,+multicenter+study.">Acute renal failure in critically ill patients: A multinational, multicenter study.</a> JAMA. 294, 813-818 (2005).</li><li>Mehta, R. L., Pascual, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectrum+of+acute+renal+failure+in+the+intensive+care+unit:+The+PICARD+experience.">Spectrum of acute renal failure in the intensive care unit: The PICARD experience.</a> Kidney Int. 66, 1613-1621 (2004).</li><li>Zager, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial,+aortic+ligation:+A+hypoperfusion+model+of+ischemic+acute+renal+failure+and+a+comparison+with+renal+artery+occlusion.">Partial, aortic ligation: A hypoperfusion model of ischemic acute renal failure and a comparison with renal artery occlusion.</a> J Lab Clin Med. 110, 396-405 (1987).</li><li>Zager, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenine,+nucleotide+changes+in+kidney,+liver,+and+small+intestine+during+different+forms+of+ischemic+injury.">Adenine, nucleotide changes in kidney, liver, and small intestine during different forms of ischemic injury.</a> Circ Res. 68, 185-196 (1991).</li><li>Oliver, J., MacDowell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathogenesis+of+acute+renal+failure+associated+with+traumatic+and+toxic+injury;+renal+ischemia,+nephrotoxic+damage+and+the+ischemic+episode.">The pathogenesis of acute renal failure associated with traumatic and toxic injury; renal ischemia, nephrotoxic damage and the ischemic episode.</a> J Clin Invest. 30, 1307-1439 (1951).</li><li>Phillips, R. A., Dole, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+acute+hemorrhage+and+traumatic+shock+on+renal+function+in+dogs.">Effects of acute hemorrhage and traumatic shock on renal function in dogs.</a> Am J Physiol. 145, 314-336 (1945).</li><li>Klocke, R., Tian, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+animal+models+of+heart+failure+related+to+coronary+heart+disease.">Surgical animal models of heart failure related to coronary heart disease.</a> Cardiovasc Res. 74, 29-38 (2007).</li><li>Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+focal+and+global+cerebral+ischemia.">Animal models of focal and global cerebral ischemia.</a> ILAR J. 44, 85-95 (2003).</li><li>Burne-Taney, M. J., Kofler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+renal+failure+after+whole+body+ischemia+is+characterized+by+inflammation+and+T+cell-mediated+injury.">Acute renal failure after whole body ischemia is characterized by inflammation and T cell-mediated injury.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 285, 87-94 (2003).</li><li>Hutchens, M. P., Nakano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+is+renoprotective+via+a+non-receptor+dependent+mechanism+after+cardiac+arrest+in+vivo.">Estrogen is renoprotective via a non-receptor dependent mechanism after cardiac arrest in vivo.</a> Anesthesiology. 112, 395-405 (2010).</li><li>Hutchens, M. P., Nakano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+epoxide+hydrolase+gene+deletion+reduces+survival+after+cardiac+arrest+and+cardiopulmonary+resuscitation.">Soluble epoxide hydrolase gene deletion reduces survival after cardiac arrest and cardiopulmonary resuscitation.</a> Resuscitation. 76, 89-94 (2007).</li><li>Planta, I. v. o. n., Weil, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiopulmonary+resuscitation+in+the+rat.">Cardiopulmonary resuscitation in the rat.</a> J Appl Physiol. 65, 2641-2647 (1988).</li><li>Cobb, L. A., Fahrenbruch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+cardiopulmonary+resuscitation+prior+to+defibrillation+in+patients+with+out-of-hospital+ventricular+fibrillation.">Influence of cardiopulmonary resuscitation prior to defibrillation in patients with out-of-hospital ventricular fibrillation.</a> JAMA. 281, 1182-1188 (1999).</li><li>Aufderheide, T. P., Lurie, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Death+by+hyperventilation:+A+common+and+life-threatening+problem+during+cardiopulmonary+resuscitation.">Death by hyperventilation: A common and life-threatening problem during cardiopulmonary resuscitation.</a> Crit Care Med. 32, 345-351 (2004).</li><li>Aufderheide, T. P., Sigurdsson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperventilation-induced+hypotension+during+cardiopulmonary+resuscitation.">Hyperventilation-induced hypotension during cardiopulmonary resuscitation.</a> Circulation. 109, 1960-1965 (2004).</li></ol>

利害の衝突は宣言されません。

マウスでの心停止と心肺蘇生の正常体温モデルはAKI、全身の血流の低下の最も一般的な臨床的な原因の病態生理および形態を複製するモデルでの評価の複数の手段を提供します。仮説検定は、遺伝子操作技術と実験用マウスのよく理解され特徴づけ解剖学や生理学の盛装へのアクセスによって促進されることがあります。 ここで説明したように、経験豊富な手の中に生?...

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td>アボットメディカル</td><td> 06653〜5 </td></tr><tr><td>イソフルレン</td><td>アボットメディカル</td><td> 05260〜05（およびその他） </td></tr><tr><td>エピネフリン塩酸</td><td>複数の</td><td>複数の</td></tr><tr><td> Digi - Keyはセンスの温度コントローラ</td><td>コー​​ル - パーマー</td><td> EW - 89000〜00 </td></tr><tr><td> Angiocath IVキャス</td><td> VWR </td><td> 381134 </td></tr><tr><td> Frova角度気道イントロデューサー</td><td>クック</td><td> G27282 </td></tr><tr><td>マウス用MicroVentベンチレータ</td><td>ハーバード装置</td><td> 733591 </td></tr></tbody></table>

normothermic cardiac arrest and cardiopulmonary resuscitation: a mouse model of ischemia-reperfusion injury

急性腎障害（AKI）は、高い死亡率1-4および最も頻繁に全身の血流の低下によって引き起こされている重大な病気の一般的な、非常に致死、合併症です。齧歯類モデルにおける全身の血流低下の5,6成功再現は、 7-9,9,10局所的虚血を用いるモデルを繰り返し臨床設定に変換されない結果を実証した、と遺伝子操作の完全なツールセットに全身の血流低下の欠如のアクセスを可能にする大規模な動物モデルを困難に満ちている事を。持っていますマウスで可能。11,12しかし、近年では心停止と心肺蘇生のマウスモデルは、モデルAKIに適応することができる浮上している。13はこのモデルは、臨床AKIに見られるように、生理的機能、解剖学的、および組織学的成果を確実に再現、急速に反復可能であり、そして遺伝子操作的手法、大動物への低コストの相対的な、そして使いやすさへのアクセスを含むマウス外科モデルの大きな利点のすべてを、提供しています。当社グループは、AKIの臓器特異的な結果の数を評価するために、このモデルの使用と豊富な経験を積んできました。14,15

Watch this Scientific Journal Video about Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury at JoVE.com

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

周術期およびクリティカルケア関連の急性腎障害のための強力なモデルが提示される。それはほとんど臨床AKIの組織学的および機能的な変更を複製することが可能である心停止により誘発される全身の血流低下を使用する。

正常体温心停止と心肺蘇生法：虚血再灌流障害のマウスモデル

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

normothermic-cardiac-arrest-cardiopulmonary-resuscitation-mouse-model

Research

JoVE Journal

Medicine

17.9K ビュー.  Oregon Health & Sciences University. 周術期およびクリティカルケア関連の急性腎障害のための強力なモデルが提示される。それはほとんど臨床AKIの組織学的および機能的な変更を複製することが可能である心停止により誘発される全身の血流低下を使用する。