Les auteurs tiennent à remercier Brooke Hjelm pour son expertise technique et Andrew Larsen pour son analyse des protéines. Ce travail a été financé en partie par la Fondation Alternatives recherches pour le développement (MMHK) et le NIH Grant NIAID infections sexuellement transmissibles et les microbicides topiques Cooperative Research Centre IU19 AI062150-01 (MMHK). Nous tenons à remercier Biologie de la Reproduction pour la réutilisation des chiffres.

<ol>
	<li>Herbst-Kralovetz, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+and+comparison+of+toll-like+receptor+expression+and+responsiveness+in+primary+and+immortalized+human+female+lower+genital+tract+epithelia.">Quantification and comparison of toll-like receptor expression and responsiveness in primary and immortalized human female lower genital tract epithelia.</a> Am. J. Reprod. Immunol. 59 (3), 212-224 (2008).</li><li>Hjelm, B. E., Berta, A. N., Nickerson, C. A., Arntzen, C. J., Herbst-Kralovetz, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+three-dimensional+organotypic+human+vaginal+epithelial+cell+model.">Development and characterization of a three-dimensional organotypic human vaginal epithelial cell model.</a> Biol. Reprod. 82, 617-627 (2009).</li><li>Khaoustov, V. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+three-dimensional+assembly+of+human+liver+cells+by+simulated+microgravity.">Induction of three-dimensional assembly of human liver cells by simulated microgravity.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. Anim. 35, 501-509 (1999).</li><li>Papadaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+engineering+of+functional+cardiac+muscle:+molecular,+structural,+and+electrophysiological+studies.">Tissue engineering of functional cardiac muscle: molecular, structural, and electrophysiological studies.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 280, 168-178 (2001).</li><li>Ishikawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstitution+of+hepatic+tissue+architectures+from+fetal+liver+cells+obtained+from+a+three-dimensional+culture+with+a+rotating+wall+vessel+bioreactor.">Reconstitution of hepatic tissue architectures from fetal liver cells obtained from a three-dimensional culture with a rotating wall vessel bioreactor.</a> J. Biosci. Bioeng. 111, 711-718 (2011).</li><li>Carvalho, H. M., Teel, L. D., Goping, G., O'Brien, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+three-dimensional+tissue+culture+model+for+the+study+of+attach+and+efface+lesion+formation+by+enteropathogenic+and+enterohaemorrhagic+Escherichia+coli.">A three-dimensional tissue culture model for the study of attach and efface lesion formation by enteropathogenic and enterohaemorrhagic Escherichia coli.</a> Cell Microbiol. 7, 1771-1781 (2005).</li><li>Nickerson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+tissue+assemblies:+novel+models+for+the+study+of+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+pathogenesis.">Three-dimensional tissue assemblies: novel models for the study of Salmonella enterica serovar Typhimurium pathogenesis.</a> Infection and Immunity. 69, 7106-7120 (2001).</li><li>Honer zu Bentrup, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+organotypic+models+of+human+colonic+epithelium+to+study+the+early+stages+of+enteric+salmonellosis.">Three-dimensional organotypic models of human colonic epithelium to study the early stages of enteric salmonellosis.</a> Microbes Infect. 8, 1813-1825 (2006).</li><li>Carterson, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A549+lung+epithelial+cells+grown+as+three-dimensional+aggregates:+alternative+tissue+culture+model+for+Pseudomonas+aeruginosa+pathogenesis.">A549 lung epithelial cells grown as three-dimensional aggregates: alternative tissue culture model for Pseudomonas aeruginosa pathogenesis.</a> Infection and Immunity. 73, 1129-1140 (2005).</li><li>Smith, Y. C., Grande, K. K., Rasmussen, S. B., O'Brien, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+three-dimensional+organoid+model+for+evaluation+of+the+interaction+of+uropathogenic+Escherichia+coli+with+terminally+differentiated+human+urothelial+cells.">Novel three-dimensional organoid model for evaluation of the interaction of uropathogenic Escherichia coli with terminally differentiated human urothelial cells.</a> Infection and Immunity. 74, 750-757 (2006).</li><li>Sainz, B., TenCate, V., Uprichard, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+Huh7+cell+culture+system+for+the+study+of+Hepatitis+C+virus+infection.">Three-dimensional Huh7 cell culture system for the study of Hepatitis C virus infection.</a> Virol J. 6, 103 (2009).</li><li>Duray, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasion+of+human+tissue+ex+vivo+by+Borrelia+burgdorferi.">Invasion of human tissue ex vivo by Borrelia burgdorferi.</a> J. Infect Dis. 191, 1747-1754 (2005).</li><li>Margolis, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocyte+trafficking+and+HIV+infection+of+human+lymphoid+tissue+in+a+rotating+wall+vessel+bioreactor.">Lymphocyte trafficking and HIV infection of human lymphoid tissue in a rotating wall vessel bioreactor.</a> AIDS Res. Hum. Retroviruses. 13, 1411-1420 (1997).</li><li>Reed, L. J., Muench, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+of+estimating+fifty+percent+endpoints.">A simple method of estimating fifty percent endpoints.</a> Am. J. Hyg. 27, 493-497 (1938).</li><li>Beer, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+preclinical+testing+of+nonoxynol-9+as+potential+anti-human+immunodeficiency+virus+microbicide:+a+retrospective+analysis+of+results+from+five+laboratories.">In vitro preclinical testing of nonoxynol-9 as potential anti-human immunodeficiency virus microbicide: a retrospective analysis of results from five laboratories.</a> Antimicrob Agents Chemother. 50, 713-723 (2006).</li><li>Hickey, D. K., Patel, M. V., Fahey, J. V., Wira, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+and+adaptive+immunity+at+mucosal+surfaces+of+the+female+reproductive+tract:+stratification+and+integration+of+immune+protection+against+the+transmission+of+sexually+transmitted+infections.">Innate and adaptive immunity at mucosal surfaces of the female reproductive tract: stratification and integration of immune protection against the transmission of sexually transmitted infections.</a> J. Reprod. Immunol. 88, 185-194 (2011).</li><li>Andersch-Bjorkman, Y., Thomsson, K. A., Holmen Larsson, J. M., Ekerhovd, E., Hansson, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large+scale+identification+of+proteins,+mucins,+and+their+O-glycosylation+in+the+endocervical+mucus+during+the+menstrual+cycle.">Large scale identification of proteins, mucins, and their O-glycosylation in the endocervical mucus during the menstrual cycle.</a> Mol. Cell Proteomics. 6, 708-716 (2007).</li><li>Barrila, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+cell+culture+models:+Innovative+platforms+for+studying+host-pathogen+interactions.">3D cell culture models: Innovative platforms for studying host-pathogen interactions.</a> Nature Reviews Microbiology. 8, 791-801 (2010).</li><li>Vamvakidou, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneous+breast+tumoroids:+An+in+vitro+assay+for+investigating+cellular+heterogeneity+and+drug+delivery.">Heterogeneous breast tumoroids: An in vitro assay for investigating cellular heterogeneity and drug delivery.</a> J. Biomol Screen. 12, 13-20 (2007).</li><li>Jin, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+three-dimensional+tissue-engineered+bone+constructs+under+microgravity-simulated+conditions.">Establishment of three-dimensional tissue-engineered bone constructs under microgravity-simulated conditions.</a> Artif Organs. 34, 118-125 (2010).</li><li>Vertrees, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+three-dimensional+model+of+lung+cancer+using+cultured+transformed+lung+cells.">Development of a three-dimensional model of lung cancer using cultured transformed lung cells.</a> Cancer Biol Ther. 8, 356-365 (2009).</li><li>Hwang, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+murine+embryonic+stem+cells,+alginate+encapsulation,+and+rotary+microgravity+bioreactor+in+bone+tissue+engineering.">The use of murine embryonic stem cells, alginate encapsulation, and rotary microgravity bioreactor in bone tissue engineering.</a> Biomaterials. 30, 499-507 (2009).</li><li>Pei, M., He, F., Kish, V. L., Vunjak-Novakovic, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+of+functional+cartilage+tissue+using+stem+cells+from+synovial+lining:+a+preliminary+study.">Engineering of functional cartilage tissue using stem cells from synovial lining: a preliminary study.</a> Clin. Orthop Relat. Res. 466, 1880-1889 (2008).</li></ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à révéler.

L&#39;utilisation de la technologie du bioréacteur RWV présenté ici peut fournir aux chercheurs la capacité de faire progresser leur système actuel de culture cellulaire à un modèle plus physiologiquement pertinente des cellules organotypique culture. Le bioréacteur RWV système de pile à la culture offre un microenvironnement faible cisaillement qui permet aux cellules de former en 3-D agrégats cellulaires in vivo avec des caractéristiques similaires, y compris les jonctions serrées, la production ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Alexa Fluor 488 </td><td> Invitrogen </td><td> A21131 </td><td> Utilisé à 1:500 de dilution </td></tr><tr><td> FACSDiva </td><td> BD </td><td></td><td> Cytomètre en flux </td></tr><tr><td> β-tublin anticorps </td><td> Calbiochem </td><td> 654162 </td><td> Utilisé à 1:5000 dilution </td></tr><tr><td> Bio-Plex 2000 </td><td> BioRad </td><td> 171-000205 </td><td> V5 </td></tr><tr><td> Bioréacteur et des composants </td><td> Synthecon </td><td> CRCT-4 </td><td></td></tr><tr><td> Tamis cellulaire </td><td> BD Falcon </td><td> 352340 </td><td> 40 um taille de pores </td></tr><tr><td> Tube conique (50 ml) </td><td> Corning </td><td> 5-538-60 </td><td></td></tr><tr><td> Lamelles </td><td> VWR </td><td> 48366067 </td><td></td></tr><tr><td> Kits cytokines tableau de perles </td><td> BioRad </td><td> Personnalisé kit humaine </td><td></td></tr><tr><td> Perles Cytodex </td><td> Sigma </td><td> C3275 </td><td></td></tr><tr><td> DPBS </td><td> Gibco </td><td> 14190 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma </td><td> ED-500G </td><td> L&#39;acide éthylènediaminetétraacétique </td></tr><tr><td> Épithéliale anticorps spécifique (ESA) </td><td> Chemicon </td><td> CBL251 </td><td> Utilisé à dilution 1:50 </td></tr><tr><td> Sérum de veau fœtal (FBS) </td><td> Gibco </td><td> 10438 </td><td> Inactivé par la chaleur </td></tr><tr><td> HARV (jetable) </td><td> Synthecon </td><td> D-405 </td><td></td></tr><tr><td> Acide chlorhydrique </td><td> Sigma </td><td> 258148 </td><td> 37% </td></tr><tr><td> Anticorps involucrine </td&gt; <td> Sigma </td><td> Je 9018 </td><td></td></tr><tr><td> Lames de microscope </td><td> VWR </td><td> 16004-368 </td><td></td></tr><tr><td> Réactif MTT </td><td> MP Biomedicals, LLC </td><td> 194592 </td><td> 3 - (4,5-Dimethylthiazolyl 1-2) -2,5-diphényl tétrazolium bromure de </td></tr><tr><td> MUC1 anticorps (microscopie) </td><td> Santa Cruz </td><td> Sc-7313 </td><td> Utilisé à dilution 1:50 </td></tr><tr><td> MUC1 anticorps (cytométrie de flux) </td><td> BD Pharmingen </td><td> 559774 </td><td> Aussi appelé CD227, utilisez 20 pi par test </td></tr><tr><td> Paraformaldéhyde </td><td> Sciences Electron Microscopy </td><td> 15710 </td><td> Dilué à 4% dans du DPBS </td></tr><tr><td> Une boîte de Pétri (petit) </td><td> BD Falcon </td><td> 353002 </td><td></td></tr><tr><td> Tube en polystyrène avec filtre </td><td> BD Falcon </td><td> 352235 </td><td></td></tr><tr><td&gt; Tube d&#39;écoulement en polystyrène </td><td> BD Falcon </td><td> 352058 </td><td></td></tr><tr><td> PR d&#39;anticorps </td><td> DAKO </td><td> M3569 </td><td> Utilisé à 1:100 de dilution </td></tr><tr><td> Or ProLong </td><td> Invitrogen </td><td> P36931 </td><td> Milieu de montage avec DAPI </td></tr><tr><td> RNeasy Mini Kit </td><td> Qiagen </td><td> 74903 </td><td></td></tr><tr><td> Dodécylsulfate de sodium </td><td> Sigma </td><td> 71725 </td><td></td></tr><tr><td> Sachet de stérilisation </td><td> VWR </td><td> 11213-035 </td><td></td></tr><tr><td> Robinets (unidirectionnel) </td><td> Medex </td><td> MX5061L </td><td></td></tr><tr><td> Seringue (10 ml) </td><td> BD </td><td> 309604 </td><td> Luer-lock pointe </td></tr><tr><td> Seringue (5 ml) </td><td> BD </td><td> 309603 </td><td> Luer-lock pointe </td></tr><tr><td> Bleu de Trypan </td><td> Invitrogen </td><td>T10282 </td><td></td></tr><tr><td> VP5 anticorps </td><td> Santa Cruz </td><td> sc-13525 </td><td> HSV-2 Clone anticorps 6F10; utilisé à 1:5000 dilution </td></tr></tbody></table>

culturing and applications of rotating wall vessel bioreactor derived 3d epithelial cell models

Les cellules et les tissus dans les conditions de l&#39;expérience du corps de l&#39;environnement qui influent sur leur architecture, les communications intercellulaires et les fonctions globales. Pour des modèles in vitro de cultures cellulaires avec précision imiter le tissu d&#39;intérêt, le milieu de croissance de la culture est un aspect essentiel à considérer. Couramment utilisés les systèmes classiques de culture cellulaire de propager des cellules épithéliales sur le plat en deux dimensions (2-D) des surfaces imperméables. Bien que beaucoup ait été tirées de systèmes classiques de culture cellulaire, de nombreuses conclusions ne sont pas reproductibles dans des essais cliniques humains ou des explants de tissus, ce qui pourrait à la suite de l&#39;absence d&#39;un micro-physiologiquement pertinent. Ici, nous décrivons un système de culture qui permet de surmonter bon nombre des limites des conditions de culture de 2-D des cultures de cellules, en utilisant la rotation innovant paroi de la cuve (RWV) la technologie des bioréacteurs. Nous et d&#39;autres ont montré que organotypiques RWV dérivés des modèles peut récapituler structure, la fonction et authentiques réactions humaines à des stimuli externes de même pour les tissus humains explants 1-6. Le bioréacteur RWV est un système de culture en suspension qui permet la croissance des cellules épithéliales dans des conditions de cisaillement faible physiologiques fluide. Les bioréacteurs sont de deux formats différents, un récipient à haute élément rotatif (HARV) ou un navire rotation lente latérale (STLV), dans laquelle ils diffèrent par leur source d&#39;aération. Cellules épithéliales sont ajoutés au bioréacteur de choix en combinaison avec poreux, des billes microsupports revêtus de collagène (figure 1A). Les cellules utilisent les perles comme un échafaudage de croissance au cours de la baisse constante gratuitement dans le bioréacteur (figure 1B). Le microenvironnement fournies par le bioréacteur permet aux cellules de former des agrégats tridimensionnels (3-D) présentant in vivo des caractéristiques similaires souvent pas respectées en vertu de la norme 2-D des conditions de culture (figure 1D). Ces caractéristiques comprennent des jonctions serrées, le MUCnous la production, apicale / basale d&#39;orientation, dans la localisation des protéines in vivo, ainsi que d&#39;autres cellules épithéliales de type des propriétés spécifiques. La progression d&#39;une monocouche de cellules épithéliales à un totalement différenciées en 3-D agrégat varie en fonction de type 1 de cellules, 7-13. Échantillonnage périodique du bioréacteur permet de surveiller la formation d&#39;agrégats épithéliale, marqueurs de différenciation cellulaire et la viabilité (figure 1D). Une fois la différenciation cellulaire et la formation d&#39;agrégats est établi, les cellules sont récoltées à partir du bioréacteur, et des tests similaires réalisés sur 2 D-cellules peuvent être appliqués aux agrégats 3-D avec quelques considérations (figure 1E-G). Dans ce travail, nous décrivons les étapes détaillées de la façon dont la culture en 3-D des agrégats de cellules épithéliales dans le système de bioréacteur RWV et une variété de dosages potentiels et des analyses qui peuvent être exécutées avec les agrégats 3-D. Ces analyses comprennent, mais ne sont pas limités à, structurel / manalyse orphological (confocale, de numérisation et microscopie électronique à transmission), cytokine / chimiokine sécrétion et la signalisation cellulaire (cytométrie tableau talon et à l&#39;analyse Western blot), l&#39;analyse d&#39;expression génique (PCR en temps réel), toxicologiques / analyse des médicaments et interactions hôte-pathogène. L&#39;utilisation de ces tests a jeté les bases pour des études plus approfondies et expansive comme la métabolomique, la transcriptomique, la protéomique et d&#39;autres applications basées sur réseau. Notre objectif est de présenter des moyens non conventionnels de la culture de cellules épithéliales humaines pour produire organotypiques modèles 3-D qui récapitulent l&#39;humain dans des tissus in vivo, dans un système facile et robuste pour être utilisé par les chercheurs avec les divers intérêts scientifiques.

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Culturing and Applications of Rotating Wall Vessel Bioreactor Derived 3D Epithelial Cell Models

Système de pile à rotation culture qui permet aux cellules épithéliales de croître dans des conditions physiologiques résultant en 3-D formation d&#39;agrégats cellulaires est décrite. Les agrégats généré affichage<em&gt; In vivo</em&gt;-Comme des caractéristiques non observées dans les modèles classiques de culture et de servir en tant que système modèle organotypique plus précis pour une multitude d&#39;enquêtes scientifiques.

La culture et les applications de rotation bioréacteur de la paroi vasculaire dérivé de modèles 3D de cellules épithéliales

Cells and tissues in the body experience environmental conditions that influence their architecture, intercellular communications, and overall functions. ...

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26.1K vues.  University of Arizona College of Medicine - Phoenix. Système de pile à rotation culture qui permet aux cellules épithéliales de croître dans des conditions physiologiques résultant en 3-D formation d'agrégats cellulaires est décrite. Les agrégats généré affichage In vivo-Comme des caractéristiques non observées dans les modèles classiques de culture et de servir en tant que système modèle organotypique plus précis pour une multitude d'enquêtes scientifiques.