Le financement de cette recherche a été assuré en partie par le Comité des cultures de matériel génétique USDA programme et associé de recherche de l&#39;USDA-ARS.

Une. Détermination de la pomme de terre amylose Tuber amidon <ol><li> Peler et couper les tubercules frais en petits cubes. </li><li> Placez les cubes de pommes de terre dans de petits sacs bruns et stocker pendant une nuit à -80 ° C. </li><li> Transfert cubes de pommes de terre dans des sacs de nylon et de lyophilisation. </li><li> Après lyophilisé, broyer l&#39;échantillon de pommes de terre en poudre en utilisant un mortier et un pilon ou un broyeur Wiley. </li><li> Dans un tube de 50 ml, ajouter 20 à 30 mg de l&#39;échantillon de sol tubercule lyophilisée. </li><li> Préparer une solution de 45% (p / v) d&#39;acide perchlorique (mélange 24,4 ml d&#39;acide perchlorique à 60% et 25,6 ml d&#39;eau ultra-pure. </li><li> Ajouter 500 ul de 45% (p / v) d&#39;acide perchlorique et secouer ou agiter pour disperser les granules d&#39;amidon. </li><li> Après une période d&#39;incubation de quatre minutes à la température ambiante, ajouter 16 ml d&#39;eau ultra-pure à la solution et mélanger au vortex. </li><li> Après matériau non soluble a déposé au fond du tube (7-10 min plus tard), transférer 40 pi de la solution sur une plaque de microtitration (éviter le pipetage de toutes les particules). </li><li> Ajouter 50 ul de solution d&#39;iode (KI à 2 g + 1 g d&#39;I2 dans 900 ml d&#39;eau ultra-pure) et mélanger l&#39;échantillon par pipettage. </li><li> Lire l&#39;absorbance à 550 nm et 620 nm immédiatement. </li><li> Déterminer le pourcentage d&#39;amylose après comparaison du rapport amylose / amylopectine de chaque échantillon (620 nm/550 nm l&#39;absorbance) avec une courbe standard générée à partir de solutions d&#39;amylose et d&#39;amylopectine dans une gamme de concentrations. Cette procédure sera maintenant décrit. Lire l&#39;ébauche (solution d&#39;iode et de l&#39;acide perchlorique) en même temps que les échantillons d&#39;essai. Utilisation blanchi données pour les analyses. </li></ol> 2. Amylose / amylopectine Curve <ol><li> Dans des tubes séparés pèsent 12,5 mg de l&#39;amylose et de l&#39;amylopectine 12,5 mg. </li><li> Ajouter à chaque tube 5 ml de 45% (p / v) d&#39;acide perchlorique et se dissoudre complètement. </li><li> Pour chacune des solutions (amylose et amylopectine), amener à un volume final de 50 ml avec de l&#39;eau ultra-pure. </li><li> Mélanger 6,25ml de stock amylose de l&#39;étape précédente avec 18,75 ml d&#39;eau ultra-pure. Cela fera une solution d&#39;amylose 6,25 mg / ml. </li><li> Répétez la procédure pour la solution de l&#39;amylopectine. </li><li> Utilisation de l&#39;amylose et des solutions standard de l&#39;amylopectine à partir des étapes 2,4 et 2,5, préparer des normes de teneur en amylose de 0 à 100 pour cent qui sont des% d&#39;amylose (100-0% d&#39;amylopectine) à un volume final de 5 ml pour créer la courbe d&#39;étalonnage à des intervalles de 10%. Par exemple, pour préparer: L&#39;amylose / 100% d&#39;amylopectine-type de 0%, une pipette 5 ml de solution d&#39;amylopectine. L&#39;amylose / 90% d&#39;amylopectine norme de 10%, mélanger 0,5 ml 4,5 ml d&#39;amylose et d&#39;amylopectine solutions. L&#39;amylose / 80% d&#39;amylopectine norme de 20%, mélanger 1,0 ml 4,0 ml d&#39;amylose et d&#39;amylopectine solutions. L&#39;amylose / 70% de la norme de 30% d&#39;amylopectine, de l&#39;amylose combiner 1,5 ml et 3,5 ml des solutions d&#39;amylopectine. L&#39;amylose / 60% de la norme de 40% d&#39;amylopectine, de l&#39;amylose combiner 2,0 ml et 2,0 ml des solutions d&#39;amylopectine. Le 50% d&#39;amylose/ 50% d&#39;amylopectine norme, mélanger 2,5 ml 2,5 ml d&#39;amylose et d&#39;amylopectine solutions. L&#39;amylose / 40% de la norme de 60% d&#39;amylopectine, de l&#39;amylose combiner 3,0 ml et 2,0 ml d&#39;amylopectine, et ainsi de suite). </li><li> Transférer 40 pl de chaque mélange standard à une plaque de microtitration. Inclure un puits avec 40 ul de 45% (p / v) d&#39;acide perchlorique le vide. </li><li> Ajouter 50 ul de solution d&#39;iode (KI à 2 g + 1 g d&#39;I2 dans 900 ml d&#39;eau ultra-pure) et mélanger chacun des échantillons (y compris le blanc) par pipetage. </li><li> Lire les absorbances à 550 nm et 620 nm immédiatement et calculer le rapport amylose / amylopectine pour chaque concentration. </li></ol>

<ol>
	<li>Composition Hoover, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=molecular+structure,+and+physicochemical+properties+of+tuber+and+root+starches:+a+review.">molecular structure, and physicochemical properties of tuber and root starches: a review.</a> Carbohydr. 45 (3), 253-267 (2001).</li><li>Bertoft, E., Blennow, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+Potato+Starch.">Structure of Potato Starch.</a> Advances in Potato Chemistry and Technology. , 83-98 (2009).</li><li>Campbell, M. R., Yeager, H., Abdubek, N., Pollak, L., Glover, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+methods+for+amylose+screening+in+maize+starches+from+exotic+backgrounds.">Comparison of methods for amylose screening in maize starches from exotic backgrounds.</a> Cereal Chem. 79, 317-321 (2002).</li><li>Zhu, T., Jackson, D. S., Wehling, R. L., Geera, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+amylose+determination+methods+and+the+development+of+a+dual+wavelength+iodine+binding+technique.">Comparison of amylose determination methods and the development of a dual wavelength iodine binding technique.</a> Cereal Chem. 85, 51-58 (2008).</li><li>Hovenkamp-Hermelink, J., Devries, J., Adamse, P., Jacobsen, E., Witholt, B., Feenstra, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+estimation+of+the+amylose+amylopectin+ratio+in+small+amounts+of+tuber+and+leaf+tissue+of+the+potato.">Rapid estimation of the amylose amylopectin ratio in small amounts of tuber and leaf tissue of the potato.</a> Potato Res. 31, 241-246 (1988).</li><li>Shannon, J. C., Garwood, D. L., Boyer, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+and+Physiology+of+Starch+Development.">Genetics and Physiology of Starch Development.</a> Starch. , 23-82 (2009).</li><li>Haase, N. U., Plate, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+potato+starch+in+relation+to+varieties+and+environmental+factors.">Properties of potato starch in relation to varieties and environmental factors.</a> St&#228;rke. 48 (5), 167-171 (1996).</li><li>Johnston, F. B., Urbas, B., Khanzada, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+storage+on+the+size+distribution+and+amylose/amylopectin+ratio+in+potato+starch+granules.">Effect of storage on the size distribution and amylose/amylopectin ratio in potato starch granules.</a> Am. Pot. J. 45, 315-321 (1968).</li><li>Gibson, T. S., Solah, V. A., McCleary, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+procedure+to+measure+amylose+in+cereal+starches+and+flours+with+concanavalin+A.">A procedure to measure amylose in cereal starches and flours with concanavalin A.</a> J. Cereal Sci. 25 (2), 111-119 (1997).</li><li>Sun, S., Matheson, N., Yun, S. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+amylose+content+of+starches+after+precipitation+of+amylopectin+by+concanavalin+A.">Estimation of amylose content of starches after precipitation of amylopectin by concanavalin A.</a> Starch. 42, 302-305 (1990).</li></ol>

Nous n&#39;avons rien à communiquer.

La teneur en amylose dans les tubercules de pomme de terre est généralement comprise entre 20-35% 7,8. Si la plupart des valeurs sont en dehors de cette gamme, tenir compte de ces erreurs possibles: 1) les données brutes ont été utilisés à la place des données masquées pour la construction de la courbe standard amylose / amylopectine; 2) les données brutes ont été utilisés à la place des données masquées pour la détermination de la teneur en amylose ratios / amylopectine à partir des échant...

Environ 80% du poids frais d&#39;un tubercule de pomme de terre est de l&#39;eau; la quasi-totalité de la matière sèche restante est l&#39;amidon 1. La plupart de l&#39;amidon (70%) est composé d&#39;amylopectine, tandis que le reste est de l&#39;amylose. Le rapport entre l&#39;amylose et l&#39;amylopectine est la propriété la plus importante influence sur les propriétés physiques de l&#39;amidon. L&#39;amylose est un alpha 1-4 chaîne linéaire de glucose, tandis que l&#39;amylopectine est un linéaire alpha 1-4 chaîne alpha 1-6 branches 2. Des méthodes telles que la liaison de l&#39;iode, calorimétrie différentielle à balayage (DSC), la Chromatographie d&#39;exclusion stérique haute performance (HPSEC) et les interactions de la concanavaline A a été développée pour la détermination de l&#39;amidon de différentes espèces de plantes cultivées 3,4. Chaque protocole exige des compétences et des équipements spéciaux, ce qui rend difficile à l&#39;échelle à quantifier de nombreux échantillons à la fois. La méthode que nous présentons ici est un protocole modifié à partir de Hovenkamp-Hermelink et al. 5, qui est une longueur d&#39;onde double liaison de l&#39;iodeméthode basée sur les granules d&#39;amidon colorés. Les avantages de ce procédé par rapport à d&#39;autres comprennent la détermination de la teneur en amylose de l&#39;amidon brut sans le purifier et l&#39;utilisation du système à double longueur d&#39;onde pour augmenter la précision de la méthode 4,6.

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td> Reagents</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Amylose </td>
 <td>Sigma</td>
 <td>859656</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Amylopectin </td>
 <td>Sigma</td>
 <td>A8515</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Perchloric Acid 60%</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>311413</td>
 <td>Very hazardous to skin and eyes</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Iodine</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>23214TD</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Potassium iodide</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>08625JE</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Equipment</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Plate Reader</td>
 <td>Bio Tek</td>
 <td>ELx800</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

rapid high throughput amylose determination in freeze dried potato tuber samples

Ce protocole décrit un procédé colorimétrique haut à travers mettre qui repose sur la formation d&#39;un complexe entre l&#39;iode et les chaînes de molécules de glucose de l&#39;amidon. Iode forme des complexes avec les deux amylose et l&#39;amylopectine dans de longues chaînes. Après l&#39;addition d&#39;iode à un échantillon d&#39;amidon, l&#39;absorption maximale de l&#39;amylose et de l&#39;amylopectine se produit à 620 et 550 nm, respectivement. Le ratio amylose / amylopectine peut être estimé à partir du rapport des valeurs d&#39;absorbance 620 nm et 550 et en les comparant à une courbe standard dans laquelle les concentrations connues spécifiques sont tracées en fonction des valeurs d&#39;absorption. Ce débit élevé, méthode peu coûteuse est fiable et reproductible, permettant l&#39;évaluation des grandes populations de clones de pommes de terre.

La courbe d&#39;étalonnage construite à partir des données masquées de différentes solutions de concentration amylose / amylopectine montre ratios d&#39;absorbance approximatif allant de 0,7 à 1,6 (Tableau 1). Une ligne de tendance de régression linéaire à partir de ces données sont ensuite utilisées pour déduire la teneur en amylose dans lyophilisés échantillons de pommes de terre (figure 1). L&#39;environnement de production de l&#39;usine a ...

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Rapid High Throughput Amylose Determination in Freeze Dried Potato Tuber Samples

Rapides à haut débit amylose Détermination dans lyophilisé échantillons de pommes de terre de tubercules

This protocol describes a high through put colorimetric method that relies on the formation of a complex between iodine and chains of glucose molecules in ...

rapid-high-throughput-amylose-determination-freeze-dried-potato-tuber

Research

JoVE Journal

Chemistry

13.8K vues.  University of Wisconsin - Madison.  Ce protocole décrit un procédé colorimétrique haut à travers mettre qui repose sur la formation d'un complexe entre l'iode et les chaînes de molécules de glucose de l'amidon. Iode forme des complexes avec les deux amylose et l'amylopectine dans de longues chaînes. Après l'addition d'iode à un échantillon d'amidon, l'absorption maximale de l'amylose et de l'amylopectine se produit à 620 et 550 nm, respectivement. Le rati...