Les auteurs remercient Nina Bispham pour son aide technique. Ce travail a été soutenu par l&#39;American Heart Association (12POST11920023), et le NIH (K23DK088833, K23DK087859).

Ce protocole est conforme aux directives de la Multiple Institutional Review Board Colorado (COMIRB). 1. Préparation pour la vérification session <ol><li> Les participants doivent suivre ces restrictions pour des mesures plus précises: 12 h rapide de la nourriture et de la caféine, 12 h retenue de l&#39;exercice, 12 h retenue de fumer, le cas échéant,&gt; 4 demi-vie retenue de médicaments si possible (peut ne pas être réalisable dans un population tels que les patients CKD), et les femmes en pré-ménopause doivent être testés en jours 1-7 du cycle menstruel afin de minimiser les influences hormonales. </li><li> Préparer 500 ml du tampon de dissociation par addition de 2 ml de 0,5 M d&#39;acide éthylènediaminetétra-acétique (EDTA), 0,05 g d&#39;héparine (180 unités USP / mg), et de 2,5 g d&#39;albumine de sérum bovin à 476,8 ml de tampon phosphate salin (PBS) à pH de 7,4. Ceci peut être stocké à 4 ° C pendant plusieurs mois. </li><li> Tourner à l&#39;échographie, l&#39;ordinateur et l&#39;hémodynamique non invasiveWorkstation (NIHem; équipement de la rigidité artérielle). Branchez les câbles délivrant des ultrasons à la boîte de déclenchement de l&#39;onde R ordinateur. </li></ol> 2. Collecte et traitement des cellules endothéliales vasculaires <ol><li> Une infirmière ou un médecin qualifié effectue la collecte (étapes 2.2 à 2.5, 2.7) et un chercheur recueille et traite les fils (étapes 2.6, 2.8 à 2.19) </li><li> Prep le site du coude avec un antiseptique topique, appliquer un garrot, localiser veine, et Cathétériser avec un 18 G cathéter. Placer un adaptateur heplock sur l&#39;extrémité de la IV. </li><li> Mettez des gants stériles et de mettre des rideaux fenêtrées stériles sur le site. </li><li> Placez 2 J-fils sur les rideaux. Tirez l&#39;arc du &quot;J&quot; pour dérouler la forme de &quot;J&quot; de deux fils. </li><li> Déboucher le heplock et nourrir J-fil dans la veine d&#39;environ 8 cm. Repoussez-et-vient à plusieurs reprises avant de retirer le fil. Évitez sang brut sur le fil. </li><li> Utilisez un coupe-fil pour couper les fils pour qu&#39;ils s&#39;insèrent dans unTube conique de 50 ml contenant ~ 30 ml de tampon de dissociation </li><li> Répétez l&#39;étape 2.5 pour deuxième fil. </li><li> Répétez l&#39;étape 2.6 pour la deuxième fil. Tube de revenir à laboratoire humide. </li><li> Serrer les fils d&#39;une paire de pinces et de maintenir les fils à l&#39;intérieur du tube, mais au-dessus de la solution. Pour 10 min, utiliser un pipetage motorisé de recueillir plusieurs reprises le tampon de dissociation de la 50 ml tube conique et le relâcher pour qu&#39;il fonctionne sur toute la longueur des fils de rincer et faire vibrer les fils, puis secouer l&#39;excès de liquide de fils dans le tube. </li><li> Centrifuger pendant 7 min à 400 g et 4 ° C. </li><li> Préparer la solution de formaldéhyde dans le tube de feuille couverte en combinant 100 ml de solution de formaldéhyde + 900 ml PBS. </li><li> Retirer lentement le tube de la centrifugeuse, tourner sur la pompe à vide, placez un embout de pipette sur la fin de tuyau d&#39;aspiration et de laisser ~ 400 ml dans le tube, passer l&#39;aspirateur hors le reste sans perturber le culot. </li><li> Couvrir de papier aluminium et pipette solution de formaldéhyde de 1 ml dansle tube pour fixer l&#39;échantillon. Ne pas remettre en suspension. Incuber pendant 10 min à température ambiante. </li><li> Préparez 8 diapositives par un marquage avec l&#39;objet et de l&#39;information de la visite d&#39;étude et l&#39;élaboration d&#39;un ovale sur chaque diapositive avec un stylo pap. </li><li> Ajouter 15 ml de PBS, remettre les, et centrifuger pendant 5 min à 400 g et 4 ° C. </li><li> Répétez l&#39;étape 2.15, ajouter 12 ml de PBS, remettre les, et centrifuger pendant 6 min à 400 g et 4 ° C. </li><li> Retirer lentement le tube de la centrifugeuse, tourner sur la pompe à vide, placez un embout de pipette sur la fin de tuyau d&#39;aspiration et de laisser ~ 2 ml dans le tube, passer l&#39;aspirateur hors le reste sans perturber le culot. </li><li> Remettre en suspension et pipette de manière uniforme sur les 8 lames dans les zones ovales. </li><li> Place dans un incubateur à 37 ° C pendant 5 heures puis conserver à -80 ° C jusqu&#39;au moment de l&#39;analyse (échantillons seront bien depuis de nombreuses années). </li></ol> 3. Évaluation de la fièvre aphteuse BA et aPWV <ol><li> Avoir un sujet de recherche changement en short jetables et ont him / son mensonge couchée dans une pièce calme, sombre climat contrôlé. </li><li> Placer le nombre approprié de l&#39;ECG pour l&#39;échographie spécifique et le dispositif de la rigidité artérielle (cette procédure utilise l&#39;hémodynamique non invasive Workstation [NIHem] pour mesurer la rigidité artérielle, ce qui nécessite 4 électrodes), et le brassard de pression artérielle sur le sujet. </li><li> Après 20 min, commencer des lectures de pression artérielle. Effectuer au moins 3, et répéter jusqu&#39;à ce que les mesures sont à moins de 5 mmHg, au repos 2 min entre chaque lecture. </li><li> Commencer la tonométrie par la palpation de l&#39;impulsion de l&#39;artère brachiale et de placer le tonomètre d&#39;enregistrer les formes d&#39;onde brachial utilisant le programme de logiciel. </li><li> Répétez l&#39;opération pour les artères radiales, fémorales et carotides. </li><li> Mesurer la distance de chacun de ces sites de l&#39;encoche supersternal l&#39;aide d&#39;un ruban à mesurer (brachiale, radiale et la carotide) et de la règle de mesure / étrier (fémorale). </li><li> Calculer carotide-brachiale, radiale-carotidienne et la carotide-fémorale (aPWV) en utilisant le programme logiciel. </li><li> Lieusang de l&#39;avant-bras la pression du brassard juste en aval de l&#39;olécrâne et enregistrer au moins 10 cycles cardiaques de base artère brachiale images échographiques et des mesures de vitesse d&#39;écoulement du sang, avec un logiciel vasculaire mis en mode déclencher. Un bras mécanique peut être utilisé pour stabiliser la sonde à ultrasons, si désiré. </li><li> Gonflez avant-bras brassard de pression artérielle à 250 mmHg et commencer minuterie. Demandez participant à rester immobile. </li><li> Commencez vitesses d&#39;enregistrement avec un ensemble de logiciels vasculaire en mode déclencher lorsque la minuterie lit 04h45. Trigger libérer le brassard à 05h00 et de changer l&#39;échographie pour enregistrer en mode B (diamètre) des images lorsque l&#39;horloge indique 05h10. </li><li> L&#39;enregistrement jusqu&#39;à l&#39;horloge indique 07h00. </li><li> Marquer au moins 10 cycles cardiaques de base brachial images échographiques de l&#39;artère avec un logiciel vasculaire mis en mode déclencher. </li><li> Prendre la tension artérielle du sujet. Si la pression artérielle systolique&gt; 100 mmHg, placer 0,4 mg de nitroglycérine sublinguale sous le thème &amp;# 39; langue et commencer minuterie, sauf si le patient a une autre contre-indication. </li><li> Commencez l&#39;enregistrement en mode B (images de diamètre) lorsque l&#39;horloge indique 3h00 avec le logiciel vasculaire mis en mode déclencher. </li><li> Arrêter l&#39;enregistrement lorsque l&#39;horloge indique 08h00. </li><li> Surveillance de la pression artérielle jusqu&#39;à ce qu&#39;elle retourne à la ligne de base </li></ol> 4. Préparation de veine ombilicale humaine des cellules endothéliales (HUVEC) lames de contrôle <ol><li> Cultivez HUVECs au passage 5-6 et ~ 80% de confluence. </li><li> Trypsiniser avec 3 ml de trypsine ou tout ce qui est nécessaire pour le plat / flacon. </li><li> Neutraliser la trypsine en utilisant un volume égal de solution de neutralisation de la trypsine. </li><li> Centrifuger à 200 g pendant 5 min ~ et enlever la trypsine et la solution de neutralisation par le vide. </li><li> Reprendre dans ~ 10 ml de PBS à laver. </li><li> Centrifuger à 200 xg ~ 5 min. Retirer du PBS. </li><li> Retirer du PBS et fixer en 1800 pl de PBS + 200 pi formaldéhyde. </li><li> Remettre en suspension dans du PBS (~ 10 ml). </li><li> Centrifuger à 200 xg ~5 min. Retirer du PBS, remettre en suspension dans un volume approprié d&#39;ajouter ~ 200 pi par diapositive. </li><li> Stocker les lames à -80 ° C jusqu&#39;au moment de l&#39;analyse (échantillons seront bien depuis de nombreuses années). </li></ol> 5. Coloration des cellules endothéliales vasculaires <ol><li> Prenez diapositives de -80 ° C congélateur et attendre 5 min à température ambiante (cette procédure est pour un lot de 10 échantillons, dont un tiroir de commande HUVEC). </li><li> Essuyez l&#39;excès d&#39;eau avec une tâche délicate essuyer (ne pas toucher le centre de la lame). </li><li> Réhydrater les lames en ajoutant modifié PBS à chaque diapositive et les laisser pendant 10 min. </li><li> Alors que les diapositives sont debout, préparer 5% de sérum d&#39;âne et d&#39;autres solutions. <ol><li> Préparer un sérum d&#39;âne de 5% par addition de 300 pi de sérum d&#39;âne de 5700 pi de PBS modifié (à un pH de 7,4) pour un maximum de 10 diapositives (augmenter ce montant pour plus). </li><li> Diluer l&#39;anticorps primaire d&#39;intérêt en 1000 ul de 5% de sérum. Par exemple, la nitrotyrosine et NADPHoxydase (1:300 et 1:1500) pourraient être utilisés comme marqueurs de stress oxydatif. </li><li> Préparer AF568 secondaire en diluant 5 ul de AF568 1500 μll de 5% de sérum. </li><li> Préparer VE cadhérine en diluant 2 pi de VE cadhérine à 1000 pi de 5% de sérum. </li><li> Préparer AF488 en diluant 5 ul de VE cadhérine à 1000 pi de 5% de sérum. </li><li> Gardez AF568, VE cadhérine et AF488 sous plastique à travers tout le processus, puis placer sur bascule en 4 ° C réfrigérateur pendant la préparation de diapositives. </li></ol></li><li> Après 10 minutes de réhydratation, des diapositives secs avec une tâche délicate essuyer. </li><li> Ajouter sérum d&#39;âne de 5% pendant 60 min et placer un morceau de film de paraffine en plastique sur la zone encerclée à assurer une couverture complète de la substance chimique. </li><li> Jeter le film de paraffine plastique et sécher les lames avec une tâche délicate essuyer. Ne pas laver. Ajouter anticorps primaire pendant 60 min et placer un morceau de film de paraffine en plastique sur la zone encerclée à assurerune couverture complète de la substance chimique. </li><li> Jeter le film de paraffine plastique, rincer à l&#39;altération de PBS de gicler bouteille et laisser tremper dans les colonnes de diapositives pendant 5 min. Alors que les diapositives sont trempage, les déplacer dans une pièce sombre. Travailler dans l&#39;obscurité pour toutes les étapes restantes. </li><li> Diapositives sec avec Kimwipes, ajouter AF568 (anticorps anti secondaire) pendant 45 min et placer un morceau de film plastique de paraffine sur la zone encerclée pour assurer une couverture complète de la substance chimique. Couvrir de la lumière. </li><li> Jeter le film de paraffine plastique dans le conteneur pour déchets biologiques dangereux. Rincer à l&#39;altération de PBS de gicler bouteille, puis tremper dans les colonnes pendant 5 min. </li><li> Diapositives sec avec Kimwipes, puis ajouter VE cadhérine pendant 60 min et placer un morceau de film plastique de paraffine sur la zone encerclée pour assurer une couverture complète de la substance chimique. Couvrir de la lumière. </li><li> Jeter le film de paraffine plastique dans le conteneur pour déchets biologiques dangereux. Rincer à l&#39;altération de PBS de gicler bouteille, puis tremper dans les colonnes pendant 5 min. </li><li> Diapositives sec avecune tâche délicate essuyer, ajouter AF488 pendant 30 min et placer un morceau de film plastique de paraffine sur la zone encerclée pour assurer une couverture complète de la substance chimique. Couvrir de la lumière. </li><li> Jeter le film de paraffine plastique dans le conteneur pour déchets biologiques dangereux. Rincer à l&#39;altération de PBS de gicler bouteille, puis tremper dans les colonnes pendant 5 min. </li><li> Diapositives sec avec une tâche délicate et essuyez permettent lames sécher pendant 20 min. Couvrir de la lumière. </li><li> Ajouter une goutte seulement fluoroshield milieu de montage avec 4 &#39;, le chlorhydrate de 6-diamidino-2-phénylindole (DAPI) à chaque diapositive et couvrir chacune avec une lamelle. </li><li> Placez les diapositives dans le 4 ° C réfrigérateur recouvert d&#39;une feuille. Imagerie doit être complété dans les 48 heures. </li></ol> 6. D&#39;imagerie et d&#39;analyse de cellules endothéliales vasculaires <ol><li> Préparer microscope pour l&#39;imagerie des cellules endothéliales colorées selon les spécifications du microscope spécifique. Un technicien simple aveugle doit analyser toute protéine particulière pour une chauve-sourisch des cellules. </li><li> Numériser des diapositives systématiquement. Identifier les cellules endothéliales par coloration positive pour VE cadhérine et confirmer l&#39;intégrité nucléaire par coloration positive pour DAPI. </li><li> Image 30 cellules par lame pour une analyse ultérieure. Répétez l&#39;opération pour chaque diapositive dans le lot souillé, y compris la HUVEC. </li><li> Analyser l&#39;intensité de la coloration de l&#39;anticorps primaire d&#39;intérêt en utilisant un logiciel qualitative. </li><li> Pour réduire au minimum possible l&#39;effet de confusion des différences de coloration d&#39;intensité entre les différentes sessions de coloration, des valeurs de rapport comme le rapport de l&#39;expression des protéines dans les cellules endotheliales collectées à la même expression de la protéine dans l&#39;HUVEC. </li></ol>

Les auteurs déclarent qu&#39;ils n&#39;ont aucun intérêt financier concurrents.

L&#39;obtention de résultats précis pour la fièvre aphteuse BA et aPWV nécessite l&#39;acquisition d&#39;images ultrasonores de haute qualité et des formes d&#39;ondes de pression, respectivement. Au centre de cette formation est et l&#39;utilisation appropriée et continue de chaque technique par l&#39;opérateur 44. En outre, il est essentiel de contrôler autant de variables externes qui peuvent influer sur les résultats que possible par la standardisation de la session de test (par ex...

La maladie rénale chronique (IRC) est un problème majeur de santé publique qui a atteint des proportions épidémiques, touchant ~ 11,5% de la population aux États-Unis seulement 1. Le risque de décès d&#39;origine cardiovasculaire ou un événement cardiovasculaire chez les patients atteints de néphropathie chronique est significativement augmentée par rapport à la population générale 2-4. Bien que les patients atteints de néphropathie chronique présentent une prévalence élevée de facteurs de risque cardiovasculaire traditionnels, ce que explique en partie l&#39;incidence accrue de maladies cardiovasculaires (MCV) 5. Dysfonction vasculaire est importante non traditionnel facteur de risque cardiovasculaire obtenir une reconnaissance accrue dans le domaine de la néphrologie 6-9. Alors que de nombreux changements susceptibles de contribuer au développement d&#39;un dysfonctionnement artériel, parmi ceux les plus préoccupants sont le développement de la dysfonction endothéliale vasculaire, le plus souvent évaluée comme douteux dilatation endothélium-dépendante (EDD), et la rigidification de l&#39;rge artères élastiques 10. Différentes techniques existent pour évaluer EDD et grande rigidité de l&#39;artère élastique, mais les plus couramment utilisés sont la dilatation médiée par le flux l&#39;artère brachiale fièvre aphteuse BA et de la vitesse des ondes de pulsation aortique (aPWV), respectivement. Une autre technique couramment utilisée pour évaluer EDD est la mesure de la réponse du flux sanguin de l&#39;avant-bras à des agents pharmacologiques tels que l&#39;acétylcholine utilisant occlusion veineuse pléthysmographie 11,12. Cependant, cette méthode nécessite un cathétérisme de l&#39;artère brachiale, qui est plus invasive que la fièvre aphteuse BA et peut être contre-indiqué chez les patients atteints de néphropathie chronique. Une autre technique pour évaluer la rigidité artérielle est de mesurer la compliance artérielle locale (l&#39;inverse de la raideur) de l&#39;artère carotide, même si ce n&#39;est pas aussi largement utilisé ou validée par des critères cliniques que aPWV 13. Les patients atteints de néphropathie chronique démontrent à la fois une altération de la fièvre aphteuse BA 14-16 et augmentation de la vitesse des ondes de pulsation aortique aPWV 13,17,18, avant même besoin de dialyse. Il est important d&#39;un point de vue clinique, ces deux mesures non invasives de la dysfonction vasculaire sont des facteurs prédictifs indépendants de futurs événements cardiovasculaires et de mortalité tant chez les patients atteints d&#39;IRC 19-21, ainsi que dans d&#39;autres populations 22-26. Ces techniques peuvent être appliquées à l&#39;étude de différentes populations à risque de maladies cardiovasculaires, y compris les patients atteints de néphropathie chronique. Les mécanismes exacts par lesquels la dysfonction artérielle se développe en CKD sont encore mal compris; Toutefois, la réduction de l&#39;oxyde nitrique (NO) biodisponibilité est un facteur critique 27-30 et un mécanisme commun de deux EDD facultés affaiblies et l&#39;augmentation de la rigidité artérielle 10,31. Dans CKD, le stress oxydatif est augmenté et contribue à la réduction de la biodisponibilité du NO de 32 à 34. Le stress oxydatif est défini comme la biodisponibilité excessive d&#39;espèces réactives de l&#39;oxygène (ROS) par rapport aux défenses antioxydantes. Stimuli physiologiques, including signalisation inflammatoire, de promouvoir des systèmes d&#39;enzymes antioxydantes pour produire des ROS, y compris l&#39;anion superoxyde (O 2 ● -) (par exemple, l&#39;oxydant enzyme NADPH oxydase.) 35. La production de superoxyde conduit finalement à réduire la biodisponibilité de l&#39;oxyde nitrique (NO). Avec facultés affaiblies biodisponibilité du NO peut à son tour contribuer au développement de la MRC, comme la dysfonction endothéliale est un facteur prédictif indépendant de l&#39;incident CKD 36. Ceci est cohérent avec les données de l&#39;animal indiquant que l&#39;inhibition de la eNOS induit une hypertension (systémique et glomérulaire), l&#39;ischémie glomérulaire, une glomérulosclérose, et tubulo-interstitielle blessure 37. En effet, réduit la biodisponibilité du NO apparaît nécessaire pour le développement et la progression de la maladie rénale expérimentale qui imite la maladie humaine, suggérant un rôle clé pour la dysfonction endothéliale en CKD humain 38,39. Marqueurs de stress oxydatif vasculaire peuvent être évalués en vascular cellules endothéliales recueillies auprès de sujets humains de la recherche, en utilisant une technique développée à l&#39;origine par Colombo et al. 40 et modifié Sceaux et al 41-43. Utilisation 2 J-fils stériles, les cellules sont prélevés dans la veine du pli du coude, récupéré, fixe, et, plus tard identifié comme étant des cellules endothéliales et analysés pour l&#39;expression de protéines d&#39;intérêt par immunofluorescence. Nous fournissons ici une discussion de cette méthode qui peut être utilisée pour une) mesure la fièvre aphteuse BA; b) mesurer aPWV; c) mesurer l&#39;endothélium vasculaire expression de la protéine de la cellule de marqueurs de stress oxydatif. L&#39;accent est mis sur les patients atteints de néphropathie chronique, ne nécessitant pas de dialyse chronique.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:736px;" width="736">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:109px;">Company</td>
			<td style="width:244px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">J-wire</td>
			<td style="width:109px;">St. Jude</td>
			<td style="width:244px;">404584</td>
			<td>2 per collection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Disposable shorts (MediShorts)</td>
			<td>Quick Medical&#160;</td>
			<td>4507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Non-invasive hemodynamic workstation (NIHem)</td>
			<td style="width:109px;">Cardiovascualr Engineering</td>
			<td style="width:244px;">N/A</td>
			<td>Includes custom ruler.&#160; An alternate system is the Sphygmocor</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Ultrasound</td>
			<td style="width:109px;">G.E.</td>
			<td>Model: Vivid7 Dimension</td>
			<td>We use a G.E., but there are many companies and models</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Vascular software (Vascular Imager)&#160;</td>
			<td style="width:109px;">Medical Imaging Applications</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">R-wave trigger box</td>
			<td style="width:109px;">Medical Imaging Applications</td>
			<td>N/A</td>
			<td>custom made</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Rapid Cuff Inflation System</td>
			<td style="width:109px;">Hokanson</td>
			<td style="width:244px;">Model: Hokanson E20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Forearm blood pressure cuff</td>
			<td style="width:109px;">Hokanson</td>
			<td style="width:244px;">N/A</td>
			<td>custom cuff with 6.5 x 34 cm bladder&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">HUVECs</td>
			<td style="width:109px;">Invitrogren&#160;</td>
			<td>C-015-5C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Donkey serum</td>
			<td style="width:109px;">Jackson&#160;</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:216px;">Pap pen</td>
			<td style="width:109px;">Research Products International</td>
			<td>195505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">VE Cadherin</td>
			<td style="width:109px;">Abcam</td>
			<td style="width:244px;">ab33168</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">AF568</td>
			<td style="width:109px;">Life Technologies</td>
			<td>A11011</td>
			<td>depends on specifications of microscpe&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">AF488</td>
			<td style="width:109px;">Life Technologies</td>
			<td>A11034</td>
			<td>depends on specifications of microscpe&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Nitrotyrosine antibody&#160;</td>
			<td style="width:109px;">Abcam</td>
			<td>ab7048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">NADPH oxidase antibody</td>
			<td>Upstate</td>
			<td>07-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">DAPI&#160;</td>
			<td style="width:109px;">Vector</td>
			<td style="width:244px;">H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Delicate task wipe (Kimwipe)&#160;</td>
			<td style="width:109px;">Fisher Scientific</td>
			<td>06-666-A&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Plastic paraffin film (parafilm)&#160;</td>
			<td style="width:109px;">Fisher Scientific</td>
			<td>13-374-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Confocal microscope&#160;</td>
			<td style="width:109px;">Olympus&#160;</td>
			<td>Model: FV1000 FCS/RICS</td>
			<td>many options exist&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of vascular function in patients with chronic kidney disease

Les patients atteints de maladie rénale chronique (IRC) ont augmenté de façon significative le risque de maladies cardiovasculaires (MCV) par rapport à la population générale, et ce n&#39;est que partiellement expliqué par des facteurs de risque traditionnels de MCV. Dysfonction vasculaire est un important facteur de risque de non-traditionnelle, caractérisée par un dysfonctionnement de l&#39;endothélium vasculaire (le plus souvent évaluée comme douteux endothélium-dépendante dilatation [EDD]) et le raidissement des grandes artères élastiques. Bien que diverses techniques existent pour évaluer EDD et grande rigidité de l&#39;artère élastique, les plus couramment utilisés sont la dilatation de l&#39;artère brachiale médiée par le flux (FMD BA) et de la vitesse des ondes de pulsation aortique (aPWV), respectivement. Ces deux mesures non invasives de la dysfonction vasculaire sont des facteurs prédictifs indépendants de futurs événements cardiovasculaires chez les patients avec et sans maladie rénale. Les patients atteints de néphropathie chronique démontrent à la fois une altération de la fièvre aphteuse BA, et augmenté aPWV. Bien que les mécanismes exacts par lesquels le dysfonctionnement vasculaire dévePI était en CKD sont encore mal compris, augmentation du stress oxydatif et une réduction subséquente de l&#39;oxyde nitrique (NO) de biodisponibilité sont des contributeurs importants. Modifications cellulaires dans le stress oxydatif peuvent être évaluées par la collecte de cellules endotheliales vasculaires dans la veine du pli du coude et la mesure de l&#39;expression des protéines de marqueurs de stress oxydatif par immunofluorescence. Nous fournissons ici une discussion de ces méthodes pour mesurer la fièvre aphteuse BA, aPWV, et l&#39;endothélium vasculaire expression de la protéine de la cellule.

FA BA est quantifiée comme la variation maximale de diamètre de l&#39;artère brachiale suivante hyperémie réactive. Ainsi, le diamètre au repos est inférieur au diamètre de la suite de la fin d&#39;une période de 5 min brassard de pression artérielle d&#39;occlusion (figure 1). Le panneau A montre une image échographique représentant de l&#39;artère brachiale, et Groupe B affiche un graphique de l&#39;onde R changement fermée de diamètre de presse brassard à 2 min après, obte...

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Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

Le degré de dysfonction vasculaire et contribuer mécanismes physiologiques peut être évaluée chez les patients atteints de maladie rénale chronique par la mesure de la dilatation de l&#39;artère brachiale médiée par le flux, la vitesse des ondes de pulsation aortique et vasculaire endothéliale expression de la protéine de la cellule.

L&#39;évaluation de la fonction vasculaire chez les patients atteints de maladie rénale chronique

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

16.1K vues.  University of Colorado, Denver.  Le degré de dysfonction vasculaire et contribuer mécanismes physiologiques peut être évaluée chez les patients atteints de maladie rénale chronique par la mesure de la dilatation de l'artère brachiale médiée par le flux, la vitesse des ondes de pulsation aortique et vasculaire endothéliale expression de la protéine de la cellule. 

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Examining the Characteristics of Episodic Memory using Event-related Potentials in Patients with Alzheimer's Disease

Our laboratory uses event-related EEG potentials (ERPs) to understand and support behavioral investigations of episodic memory in patients with amnestic mild cognitive impairment (aMCI) and Alzheimer's disease (AD). Whereas behavioral data inform us about the patients' performance, ERPs allow us to record discrete changes in brain activity. Further, ERPs can give us insight into the onset, duration, and interaction of independent cognitive processes associated with memory retrieval. In patient populations, these types of studies are used to examine which aspects of memory are impaired and which remain relatively intact compared to a control population. The methodology for collecting ERP data from a vulnerable patient population while these participants perform a recognition memory task is reviewed. This protocol includes participant preparation, quality assurance, data acquisition, and data analysis. In addition to basic setup and acquisition, we will also demonstrate localization techniques to obtain greater spatial resolution and source localization using high-density (128 channel) electrode arrays.

Examining the Characteristics of Episodic Memory using Event-related Potentials in Patients with Alzheimer&#039;s Disease

The methodology for collecting high-density event-related potential data while patients with Alzheimer's disease perform a recognition memory task is reviewed. This protocol will include subject preparation, quality assurance, data acquisition, and data analysis.

Examinant les caractéristiques de la mémoire épisodique à l&#39;aide d&#39;événements liés à des potentiels chez les patients atteints de la maladie d&#39;Alzheimer

Our laboratory uses event-related EEG potentials (ERPs) to understand and support behavioral investigations of episodic memory in patients with amnestic ...

Recherche

Médecine

Spectral Karyotyping to Study Chromosome Abnormalities in Humans and Mice with Polycystic Kidney Disease

Conventional method to identify and classify individual chromosomes depends on the unique banding pattern of each chromosome in a specific species being analyzed 1, 2. This classical banding technique, however, is not reliable in identifying complex chromosomal aberrations such as those associated with cancer. To overcome the limitations of the banding technique, Spectral Karyotyping (SKY) is introduced to provide much reliable information on chromosome abnormalities.
SKY is a multicolor fluorescence in-situ hybridization (FISH) technique to detect metaphase chromosomes with spectral microscope 3, 4. SKY has been proven to be a valuable tool for the cytogenetic analysis of a broad range of chromosome abnormalities associated with a large number of genetic diseases and malignancies 5, 6. SKY involves the use of multicolor fluorescently-labelled DNA probes prepared from the degenerate oligonucleotide primers by PCR. Thus, every chromosome has a unique spectral color after in-situ hybridization with probes, which are differentially labelled with a mixture of fluorescent dyes (Rhodamine, Texas Red, Cy5, FITC and Cy5.5). The probes used for SKY consist of up to 55 chromosome specific probes 7-10.
The procedure for SKY involves several steps (Figure 1). SKY requires the availability of cells with high mitotic index from normal or diseased tissue or blood. The chromosomes of a single cell from either a freshly isolated primary cell or a cell line are spread on a glass slide. This chromosome spread is labeled with a different combination of fluorescent dyes specific for each chromosome. For probe detection and image acquisition,the spectral imaging system consists of sagnac interferometer and a CCD camera. This allows measurement of the visible light spectrum emitted from the sample and to acquire a spectral image from individual chromosomes. HiSKY, the software used to analyze the results of the captured images, provides an easy identification of chromosome anomalies. The end result is a metaphase and a karyotype classification image, in which each pair of chromosomes has a distinct color (Figure 2). This allows easy identification of chromosome identities and translocations. For more details, please visit Applied Spectral Imaging website (<a href="http://www.spectral-imaging.com/" target="_blank">http://www.spectral-imaging.com/</a>).
SKY was recently used for an identification of chromosome segregation defects and chromosome abnormalities in humans and mice with Autosomal Dominant Polycystic Kidney Disease (ADPKD), a genetic disease characterized by dysfunction in primary cilia 11-13. Using this technique, we demonstrated the presence of abnormal chromosome segregation and chromosomal defects in ADPKD patients and mouse models 14. Further analyses using SKY not only allowed us to identify chromosomal number and identity, but also to accurately detect very complex chromosomal aberrations such as chromosome deletions and translocations (Figure 2).

Spectral Karyotyping (SKY) is an advanced cytogenetics technique to identify genomic and chromosomal aberrations. This technique takes advantage of chromosome painting probes, which allow classification of all chromosomes. SKY can also identify complex chromosome aberrations and segregation defects in mice and humans with various diseases, including polycystic kidney disease.

Caryotype spectral pour l&#39;étude d&#39;anomalies chromosomiques dans les humains et les souris de la maladie polykystique des reins

Conventional method to identify and classify individual chromosomes depends on the unique banding pattern of each chromosome in a specific species being ...

Utilizing Repetitive Transcranial Magnetic Stimulation to Improve Language Function in Stroke Patients with Chronic Non-fluent Aphasia

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been shown to significantly improve language function in patients with non-fluent aphasia1. In this experiment, we demonstrate the administration of low-frequency repetitive TMS (rTMS) to an optimal stimulation site in the right hemisphere in patients with chronic non-fluent aphasia. A battery of standardized language measures is administered in order to assess baseline performance. Patients are subsequently randomized to either receive real rTMS or initial sham stimulation. Patients in the real stimulation undergo a site-finding phase, comprised of a series of six rTMS sessions administered over five days; stimulation is delivered to a different site in the right frontal lobe during each of these sessions. Each site-finding session consists of 600 pulses of 1 Hz rTMS, preceded and followed by a picture-naming task. By comparing the degree of transient change in naming ability elicited by stimulation of candidate sites, we are able to locate the area of optimal response for each individual patient. We then administer rTMS to this site during the treatment phase. During treatment, patients undergo a total of ten days of stimulation over the span of two weeks; each session is comprised of 20 min of 1 Hz rTMS delivered at 90% resting motor threshold. Stimulation is paired with an fMRI-naming task on the first and last days of treatment. After the treatment phase is complete, the language battery obtained at baseline is repeated two and six months following stimulation in order to identify rTMS-induced changes in performance. The fMRI-naming task is also repeated two and six months following treatment. Patients who are randomized to the sham arm of the study undergo sham site-finding, sham treatment, fMRI-naming studies, and repeat language testing two months after completing sham treatment. Sham patients then cross over into the real stimulation arm, completing real site-finding, real treatment, fMRI, and two- and six-month post-stimulation language testing.

We explore the use of repetitive transcranial magnetic stimulation (rTMS) to improve language abilities in patients with chronic stroke and non-fluent aphasia. After identifying a site in the right frontal gyrus for each patient that responds optimally to stimulation, we target this site during ten days of rTMS treatment.

Utilisant Stimulation magnétique transcrânienne répétitive pour améliorer la fonction de la langue chez les patients avec un AVC chronique aphasie non fluente

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been shown to significantly improve language function in patients with non-fluent aphasia1. In this ...

5/6th Nephrectomy in Combination with High Salt Diet and Nitric Oxide Synthase Inhibition to Induce Chronic Kidney Disease in the Lewis Rat

Chronic kidney disease (CKD) is a global problem. Slowing CKD progression is a major health priority. Since CKD is characterized by complex derangements of homeostasis, integrative animal models are necessary to study development and progression of CKD. To study development of CKD and novel therapeutic interventions in CKD, we use the 5/6th nephrectomy ablation model, a well known experimental model of progressive renal disease, resembling several aspects of human CKD. The gross reduction in renal mass causes progressive glomerular and tubulo-interstitial injury, loss of remnant nephrons and development of systemic and glomerular hypertension. It is also associated with progressive intrarenal capillary loss, inflammation and glomerulosclerosis. Risk factors for CKD invariably impact on endothelial function. To mimic this, we combine removal of 5/6th of renal mass with nitric oxide (NO) depletion and a high salt diet. After arrival and acclimatization, animals receive a NO synthase inhibitor (NG-nitro-L-Arginine) (L-NNA) supplemented to drinking water (20 mg/L) for a period of 4 weeks, followed by right sided uninephrectomy. One week later, a subtotal nephrectomy (SNX) is performed on the left side. After SNX, animals are allowed to recover for two days followed by LNNA in drinking water (20 mg/L) for a further period of 4 weeks. A high salt diet (6%), supplemented in ground chow (see time line Figure 1), is continued throughout the experiment. Progression of renal failure is followed over time by measuring plasma urea, systolic blood pressure and proteinuria. By six weeks after SNX, renal failure has developed. Renal function is measured using 'gold standard' inulin and para-amino hippuric acid (PAH) clearance technology. This model of CKD is characterized by a reduction in glomerular filtration rate (GFR) and effective renal plasma flow (ERPF), hypertension (systolic blood pressure&gt;150 mmHg), proteinuria (&gt; 50 mg/24 hr) and mild uremia (&gt;10 mM). Histological features include tubulo-interstitial damage reflected by inflammation, tubular atrophy and fibrosis and focal glomerulosclerosis leading to massive reduction of healthy glomeruli within the remnant population (&lt;10%). Follow-up until 12 weeks after SNX shows further progression of CKD.

A two-stage method to establish chronic kidney disease (CKD) in the Lewis rat by surgically removing 5/6th of renal mass is described. Combination of the surgical procedure, NOS-inhibition and a high-salt diet leads to a model resembling human CKD, allowing study of causal mechanisms and development of novel therapeutic interventions.

5/6e néphrectomie en association avec High Salt Diet Nitric Oxide Synthase et inhibition pour provoquer la maladie rénale chronique chez le rat Lewis

Chronic kidney disease (CKD) is a global problem. Slowing CKD progression is a major health priority. Since CKD is characterized by complex derangements ...

Computerized Dynamic Posturography for Postural Control Assessment in Patients with Intermittent Claudication

Computerized dynamic posturography with the EquiTest is an objective technique for measuring postural strategies under challenging static and dynamic conditions. As part of a diagnostic assessment, the early detection of postural deficits is important so that appropriate and targeted interventions can be prescribed. The Sensory Organization Test (SOT) on the EquiTest determines an individual&#39;s use of the sensory systems (somatosensory, visual, and vestibular) that are responsible for postural control. Somatosensory and visual input are altered by the calibrated sway-referenced support surface and visual surround, which move in the anterior-posterior direction in response to the individual&#39;s postural sway. This creates a conflicting sensory experience. The Motor Control Test (MCT) challenges postural control by creating unexpected postural disturbances in the form of backwards and forwards translations. The translations are graded in magnitude and the time to recover from the perturbation is computed.
Intermittent claudication, the most common symptom of peripheral arterial disease, is characterized by a cramping pain in the lower limbs and caused by muscle ischemia secondary to reduced blood flow to working muscles during physical exertion. Claudicants often display poor balance, making them susceptible to falls and activity avoidance. The Ankle Brachial Pressure Index (ABPI) is a noninvasive method for indicating the presence of peripheral arterial disease and intermittent claudication, a common symptom in the lower extremities. ABPI is measured as the highest systolic pressure from either the dorsalis pedis or posterior tibial artery divided by the highest brachial artery systolic pressure from either arm. This paper will focus on the use of computerized dynamic posturography in the assessment of balance in claudicants.

Individuals with intermittent claudication exhibit poor balance compared to healthy controls. Computerized dynamic posturography is an objective method for measuring an individual's postural responses to balance disturbances. This provides an objective reflection of the person&#x2019;s ability to respond to situations under which sensory stimuli are altered and unexpected perturbations occur.

Computerized dynamic posturography with the EquiTest is an objective technique for measuring postural strategies under challenging static and dynamic ...

Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension and Assessment of Right Ventricular Function in the Piglet

An original piglet model of Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension (CTEPH) associated with chronic Right Ventricular (RV) dysfunction is described. Pulmonary Hypertension (PH) was induced in 3-week-old piglets by a progressive obstruction of the pulmonary vascular bed. A ligation of the left Pulmonary Artery (PA) was performed first through a mini-thoracotomy. Second, weekly embolizations of the right lower pulmonary lobe were done under fluoroscopic guidance with n-butyl-2-cyanoacrylate during 5 weeks. Mean Pulmonary Arterial Pressure (mPAP) measured by ritght heart catheterism, increased progressively, as well as Right Atrial pressure and Pulmonary Vascular Resistances (PVR) after 5 weeks compared to sham animals. Right Ventricular (RV) structural and functional remodeling were assessed by transthoracic echocardiography (RV diameters, RV wall thickness, RV systolic function). RV elastance and RV-pulmonary coupling were assessed by Pressure-Volume Loops (PVL) analysis with conductance method. Histologic study of the lung and the right ventricle were also performed. Molecular analyses on RV fresh tissues could be performed through repeated transcutaneous endomyocardial biopsies. Pulmonary microvascular disease in obstructed and unobstructed territories was studied from lung biopsies using molecular analyses and pathology. Furthermore, the reliability and the reproducibility was associated with a range of PH severity in animals. Most aspects of the human CTEPH disease were reproduced in this model, which allows new perspectives for the understanding of the underlying mechanisms (mitochondria, inflammation) and new therapeutic approaches (targeted, cellular or gene therapies) of the overloaded right ventricle but also pulmonary microvascular disease.

Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension (CTEPH) and Right Ventricular (RV) dysfunction were induced in piglets by progressive obstruction of the pulmonary arteries. Consequences were remarkably similar to those observed in CTEPH patients. This animal model would be a very useful tool for pathophysiology and therapeutic experiments on CTEPH and RV failure.

Chronique thromboembolique l&#39;hypertension artérielle pulmonaire et de l&#39;évaluation de la fonction ventriculaire droite dans la Porcinet

An original piglet model of Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension (CTEPH) associated with chronic Right Ventricular (RV) dysfunction is described. ...

Assessment of Kidney Function in Mouse Models of Glomerular Disease

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function in diabetic nephropathy and podocyte-specific VEGF-A knock-out mice; therefore, this protocol describes the full kidney work-up used in our lab to assess these mouse models of glomerular disease, enabling a vast amount of information regarding kidney and glomerular function to be obtained from a single mouse. In comparison to alternative methods presented in the literature to assess glomerular function, the use of the method outlined in this paper enables the glomerular phenotype to be fully evaluated from multiple aspects. By using this method, the researcher can determine the kidney phenotype of the model and assess the mechanism as to why the phenotype develops. This vital information on the mechanism of disease is required when examining potential therapeutic avenues in these models. The methods allow for detailed functional assessment of the glomerular filtration barrier through measurement of the urinary albumin creatinine ratio and individual glomerular water permeability, as well as both structural and ultra-structural examination using the Periodic Acid Schiff stain and electron microscopy. Furthermore, analysis of the genes dysregulated at the mRNA and protein level enables mechanistic analysis of glomerular function. This protocol outlines the generic but adaptable methods that can be applied to all mouse models of glomerular disease.

This protocol describes a full kidney work-up that should be carried out in mouse models of glomerular disease. The methods allow for detailed functional, structural, and mechanistic analysis of glomerular function, which can be applied to all mouse models of glomerular disease.

Évaluation de la fonction rénale chez les modèles murins de la maladie glomérulaire

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function ...

Interventional Diagnostic Procedure: A Practical Guide for the Assessment of Coronary Vascular Function

Approximately 40% of patients undergoing invasive coronary angiography for investigation of angina are found to have no obstructive coronary artery disease (ANOCA). Abnormal coronary function underlies coronary vasomotion syndromes including coronary endothelial dysfunction, microvascular angina, vasospastic angina, post-PCI angina and myocardial infarction with no obstructive coronary arteries (MINOCA). Each of these endotypes are distinct subgroups, characterized by specific disease mechanisms. Diagnostic criteria and linked therapy for these conditions are now established by expert consensus and clinical guidelines.
Coronary function tests are performed as an adjunctive interventional diagnostic procedure (IDP) in appropriately selected patients during coronary angiography. This aids differentiation of patients according to endotype. The IDP includes two distinct components: a diagnostic guidewire test and a pharmacological coronary reactivity test. The tests last approximately 5 minutes for the former and 10-15 minutes for the latter. Patient safety and staff education are key.
The diagnostic guidewire test measures parameters of coronary flow limitation (fractional flow reserve [FFR], coronary flow reserve [CFR], microvascular resistance [index of microvascular resistance (IMR)], basal resistance index, and vasodilator function [CFR, resistive reserve ratio (RRR)]).
The pharmacological coronary reactivity test measures the vasodilator potential and propensity to vasospasm of both the main coronary arteries and the micro-vessels. It involves intra-coronary infusion of acetylcholine and glyceryl trinitrate (GTN). Acetylcholine is not licensed for parenteral use and is therefore prescribed on a named-patient basis. Vasodilatation is the normal, expected response to infusion of physiological concentrations of acetylcholine. Vascular spasm represents an abnormal response, which supports the diagnosis of vasospastic angina.
The purpose of this practical guide is to provide information on the preparation and administration of the IDP in clinical practice. It discusses some key preparation and safety considerations, as well as tips for procedural success. The IDP supports stratified medicine for a personalized approach to health and wellbeing.

The purpose of this practical guide is to provide information on the preparation and administration of an interventional diagnostic procedure in clinical practice. It discusses some key preparation and safety considerations, as well as tips for procedural success.

Procédure de diagnostic interventionnel : Guide pratique pour l’évaluation de la fonction vasculaire coronarienne

Approximately 40% of patients undergoing invasive coronary angiography for investigation of angina are found to have no obstructive coronary artery ...

Muscle Function Obtained with Motion Mode Ultrasound and Surface Electromyography during Core Endurance Exercise

Motion mode (M-mode) ultrasound allows researchers and clinicians to measure the change of muscle thickness across time. Muscle thickness can be measured between fascial borders at a given time point during an exercise. This selected time point produces a one-dimensional image resulting in real-time, live observation of anatomy. Ultrasound used during functional movement can be referred to as dynamic ultrasound; this is feasible and reliable with the use of a linear transducer, elastic belt, and foam block to secure consistent transducer placement. The lateral abdominal wall is commonly investigated using ultrasound due to the overlapping nature of the muscles. Surface electromyography (sEMG) can complement M-mode ultrasound imaging because it measures the electrical representation of muscle activation. There is minimal evidence using M-mode ultrasound and sEMG simultaneously during core exercise. Exercises that challenge the core musculature involve both isometric holds (e.g., side plank), as well as oscillatory extremity movements (e.g., dead bug). In this study, both instruments will be used simultaneously to measure core muscle function during exercise. Ultrasound measurements will be obtained using a linear transducer and ultrasound unit, and sEMG measurements will be acquired from a wireless sEMG system. To make comparisons between participants and exercises, normalization methods using static, exercise starting positions for both instruments will be used. An activation ratio will be used for ultrasound and calculated by dividing the contracted thickness (thickness during a time point of exercise) by the rested (starting position) thickness. Muscle thickness will be measured in centimeters from the superior inferior fascial border to inferior superior fascial border. These methods aim to offer an innovative and practical measurement of muscle function with M-mode ultrasound and sEMG during core endurance exercises.

This protocol uses motion mode ultrasound and surface electromyography simultaneously to measure muscle function of the core. Muscle thickness and activation of the local stabilizers (e.g., transverse abdominis, internal oblique) and global movers (e.g., external oblique) is achievable during specific time points of the side plank and dead bug exercises.

Fonction musculaire obtenue avec l’échographie en mode mouvement et l’électromyographie de surface pendant l’exercice d’endurance de base

Motion mode (M-mode) ultrasound allows researchers and clinicians to measure the change of muscle thickness across time. Muscle thickness can be measured ...

Acupoint Application Combined with Acupoint Massage for Treating Constipation in a Patient with Chronic Obstructive Pulmonary Disease

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is a common and frequent disease in elderly patients, with a tendency for progressive exacerbation. Constipation that reduces the quality of life and triggers the risk of diseases is a common concomitant symptom in patients with COPD. Currently, western medical treatment does not achieve the desired results for patients. A high recurrence rate accompanies it, whereas traditional Chinese medicine (TCM) has a long history and rich experience in treating chronic diseases. Both acupoint application and acupoint massage are characteristic therapies of TCM, with minor side effects, high safety, simple operation, and outstanding advantages. They are effective in treating constipation for patients with COPD and are considered an ideal alternative therapy for patients with chronic constipation. The purpose of this article is to introduce the method of acupoint application combined with acupoint massage for the treatment of constipation in patients with COPD, including the selection of points, items, treatment time, and operation procedure.

Here we demonstrate acupoint application combined with acupoint massage for treating constipation in a patient with chronic obstructive pulmonary disease (COPD).

Application de points d’acupuncture combinée avec le massage des points d’acupuncture pour le traitement de la constipation chez un patient atteint de bronchopneumopathie chronique obstructive