L’objectif global de ce paradigme est d’évaluer l’efficacité d’une drogue anti-alcool potentielle en utilisant des modèles de rongeurs de trouble de consommation d’alcool. Le trouble de consommation d’alcool représente une crise majeure de santé publique. Les traitements actuels sont inefficaces et des recherches précliniques continues sont nécessaires.
Notre protocole nous permet d’évaluer l’innocuité et l’utilité d’un traitement potentiel ainsi que de jeter un oeil à la neurobiologie sous-jacente du trouble lui-même. Commencez la procédure en chauffant un couteau utilitaire sur le brûleur Bunsen. À l’aide de ce couteau, couper environ un pouce des extrémités supérieure et inférieure d’une pipette sérologique en plastique de 18 millilitres.
Ensuite, réchauffez la pipette sous un pistolet à chaleur. Insérez le tube de sipper de roulement de boule dans l’extrémité inférieure de la pipette. Ensuite, à l’aide d’un pistolet à envelopper rétractant disponible dans le commerce, sceller le tube de sipper en place avec un enveloppement de rétrécissement.
Cap sur l’autre ouverture avec un bouchon en silicone. Pour l’accoutumabilité animale, à l’arrivée, maison unique chaque souris dans la cage polysulfone en polycarbonate standard avec literie, nourriture et eau et un dessus de cage de grille métallique. À partir du quatrième jour d’une semaine d’acclimation, mesurez et enregistrez le poids quotidien du corps et des aliments de la souris.
Mesurez la prise d’eau à l’aide des eaux-fortes à côté de la bouteille inversée, pour enregistrer le point le plus élevé du ménisque. Une fois que la consommation d’eau s’est stabilisée à plus ou moins 10 % de variabilité par rapport à la moyenne des trois derniers jours, commencez l’accès à l’éthanol avec le TBC ou le DID. Pour conduire le SCT, préparez une solution d’éthanol à 10 % en 1 000 millilitres en ajoutant 105,3 millilitres d’éthanol à grains 190 à 894,7 millilitres d’eau, puis secouez-le complètement.
Étant donné que l’éthanol s’évapore rapidement, remplacez la solution deux fois par semaine. Le premier jour de TBC, dans chaque cage, videz l’une des deux bouteilles d’eau et remplissez-la à ras bord de la solution d’éthanol fraîchement préparée. Étant donné que l’éthanol et l’eau sont difficiles à distinguer visuellement, étiquetez clairement les bouteilles avec leur contenu correspondant.
Ajouter plus de solution à la bouteille d’eau au besoin. Placez ensuite la bouteille dans la cage, en vous assurant que le bouchon est fermé solidement et dépourvu de toute bulle d’air ou fuites du bec. Retirez les bulles d’air en tapant simplement sur la bouteille afin que l’air puisse échapper à la bouteille.
Alternez la position de la bouteille tous les deux jours pour corriger les influences liées à la préférence de lieu conditionné dans l’activité de consommation d’alcool. Enregistrez le niveau d’apport en éthanol et analysez le ratio d’apport et de préférence de 10 % d’éthanol. Dès que l’apport en éthanol est devenu stable, administrer une injection intraperitoneal contrôle unique à chaque souris au cours de la routine de mesure quotidienne, pour habituer la souris à l’injection.
Une fois qu’une base d’éthanol avec une faible variabilité s’est rétablie, divisez les souris en groupes témoins et expérimentaux en utilisant les valeurs d’apport en éthanol de sorte que tous les groupes aient des valeurs moyennes d’apport en éthanol à peu près similaires. Commencez le dosage quotidien des médicaments, que ce soit pour une durée aiguë ou de plusieurs jours. Pour effectuer DID, chaque jour d’accès régulier à l’éthanol, enregistrez les mesures du volume d’eau, de l’apport alimentaire et du poids corporel et effectuez le dosage des médicaments.
Effectuez-le pendant une période présélectionnée pendant le cycle de lumière qui est choisi en fonction de la pharmacocinétique du médicament de sorte que le composé se approche de la concentration maximale du cerveau pendant la période de consommation. Ensuite, préparez une solution à 20 % d’éthanol en 1 000 millilitres en ajoutant 210,5 millilitres d’éthanol céréalier 190 à 789,5 millilitres d’eau. Ensuite, secouez-le à fond.
Remplissez la bouteille d’éthanol avant le début de la séance de consommation afin que dès que did commence, la bouteille d’eau peut simplement être remplacé par la bouteille d’alcool. Pendant toute la session DID, utilisez une lampe frontale rouge pour ne pas déranger l’animal. Au début de la séance de boire DID, qui devrait commencer trois heures dans le cycle sombre avant le cycle de lumière, enregistrer le volume d’eau pour chaque souris.
Remplacez ensuite chaque bouteille d’eau par une bouteille de solution à 20 % d’éthanol et enregistrez le volume d’éthanol de départ. Lisez et enregistrez le volume final d’éthanol deux heures plus tard à la fin de la séance de consommation d’alcool les jours un à trois et quatre heures plus tard, le quatrième jour. Ensuite, analyser l’apport de 20% d’éthanol.
Par la suite, remplacez la bouteille d’éthanol par une bouteille d’eau et enregistrez le volume d’eau. Ce chiffre montre l’évaluation des effets d’une dose aiguë de moxidectine à cinq milligrammes par kilogramme sur l’apport et la préférence en éthanol. Une dose unique de moxidectine a considérablement réduit la consommation d’alcool de plus de 45 % par rapport aux injections de pré-moxidectine et la préférence supérieure à 30 %10 % de la consommation et de la préférence d’éthanol demeurent significativement inférieures à la solution saline le lendemain du traitement au MOX.
Ici, la consommation excessive d’alcool a été modélisée en utilisant la procédure DID. Des souris ont été administrées la solution saline les jours un à quatre avec la ligne de base 20% éthanol établi le quatrième jour. Les jours un à trois du deuxième cycle hebdomadaire, toutes les souris ont reçu encore une autre injection saline quotidienne.
Les valeurs de prise d’éthanol du troisième jour ont ensuite été employées pour diviser les souris en deux groupes qui ont plus tard reçu une injection de moxidectin à cinq milligrammes par kilogramme ou saline le quatrième jour. La semaine suivante, toutes les souris ont reçu des injections salines quotidiennes les jours un à quatre et la prise d’éthanol a été mesurée encore une fois le quatrième jour. L’administration aiguë de MOX a été analysée et s’est trouvée pour réduire sensiblement la prise d’alcool au-delà de 54% comparée aux injections pré-drogue.
Gardez à l’esprit que de futures expériences utilisant ce protocole doivent être faites pour évaluer le mécanisme, le dosage et la toxicité d’un médicament potentiel ainsi que pour évaluer son efficacité par rapport aux options de traitement actuelles.
