Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans la mécanique des tissus tels que la façon dont les propriétés des contacts cellulaires changent dans l’espace et le temps pendant la morphogenèse tissulaire. Le principal avantage de cette technique est qu’elle est faiblement invasive et qu’elle est compatible avec l’imagerie vivante comme la microscopie des feuilles lumineuses. Cette technique ne nécessite pas l’injection de perles dans le tissu.
Habituellement utilisé comme sondes demiere sur lequel obtenir des frondes, je suis excité. Chardes, ingénieur, et Raphaël Clement, chercheur de mon niveau de terrain, démontreront le processus. Pour commencer, installez un microscope droit pour la microscopie de feuille de lumière dans la plaine horizontale, puis préparez le laser et l’optique pour agir comme les pinces optiques.
Ensuite, pipe sur un micro-litre de perles fluorescentes de 500 nanomètres dans une cuvette en verre, et ajouter 10 millilitres d’eau distillée. Placez la cuvette dans le support de la cuvette sous l’objectif, et ajustez l’objectif de sorte que l’objectif touche la surface de l’eau. Maintenant, ouvrez le créateur QT environnement de développement intégré qui est utilisé pour contrôler le logiciel d’acquisition.
Ouvrez le logiciel d’acquisition, en ouvrant le microRheo. profil, et activer le mode d’acquisition en direct, en sélectionnant en direct. Avant d’allumer le laser, mettez des lunettes de sécurité, puis réglez la puissance laser à un watt, et allumez le laser.
L’alimentation en direct doit maintenant montrer une perle piégée au point du laser. Si nécessaire, ajustez la position de la deuxième lentille du télescope, pour observer la perle au point. Il peut également être nécessaire d’ajuster l’angle des manœuvres périscope pour centrer la perle dans l’image.
Préparer le tableau d’acquisition des données et les connexions de bordure, tel que décrit dans la figure trois du protocole texte qui l’accompagne. Sur l’interface d’obturateur optique, réglez le paramètre de sec ouvert dans le temps, à 000.000, le paramètre sec fermé à 000.000, le paramètre de mode à un seul, et le paramètre de déclenchement d’EXT. Une fois défini, sélectionnez le bouton activer.
Dans QT Creator, ouvrez l’ot. profil pour ouvrir le projet. Modifiez le nom de l’entrée et de la sortie dans l’aogenérateur.
fichier cpp pour correspondre aux cartes MI qui ont été utilisées dans votre set up. Enfin, compilez et exécutez le logiciel de pinces optiques. Dans le logiciel d’acquisition, sélectionnez le temps d’exposition désiré, le jeu, le temps entre deux images, le nombre d’images à acquérir et la puissance du laser.
Puis, dans le logiciel de pince à épiler optique, réglez le paramètre de pince optique, montré ici, pour tracer un cercle. Ensuite, cochez la boîte de paramètres iA, la boîte avant de poids, et appuyez sur le bouton poussoir d’enregistrement, puis commencez l’acquisition d’image. Allumez les pinces optiques, sélectionnez le bouton générateur et laissez la perle piégée compléter au moins deux cercles complets, puis arrêtez la pince optique, en désélectionnant le bouton générateur.
Enfin, arrêtez l’acquisition d’images. Notez qu’un film tiff, et un fichier texte avec des tensions galvanomètre sont créés dans le dossier par défaut. Ouvrez Matlab, allez dans le dossier d’étalonnage et exécutez la position deux script de tension Le script calcule la fonction d’interpolation, traduisant les tensions du galvanomètre en position de piège optique.
Ensuite, suivez le protocole texte qui l’accompagne pour configurer le film d’étalonnage. Vérifiez si la carte d’interpolation des positions laser X et Y est calculée et affichée correctement par le script. Vérifiez les régions blanches de la carte, qui représentent les valeurs manquantes.
S’il y a d’importantes zones blanches, répétez l’opération avec un nouveau film d’étalonnage. Le film d’étalonnage montré ici représente un film avec des données adéquates. À l’aide d’un brochet ou d’une brosse humide, sélectionnez environ 10 embryons au stade désiré et alignez-les.
Ensuite, utilisez un stylo de marquage au diamant pour couper un morceau de la glissière de verre, à 10 par 20 par un milomètre. Ajouter de la colle sur un côté de la pièce coupée, et la laisser sécher pendant 20 secondes, puis retourner le morceau coupé, et le placer sur la ligne des embryons, le coller au bord de la lame. Ensuite, installez la préparation dans le porte-échantillon, et placez le support dans la cuvette, puis placez la cuvette sur l’état piso-électrique, et remplissez-la d’eau.
Pour commencer, trouvez l’emplacement d’intérêt et déplacez le point médian de la jonction cible vers la position du piège laser, à l’aide de l’étape pisar. Définissez les paramètres du piège pour obtenir des oscillations perpendiculaires à la ligne de contact. Réglez également les phases comme zéro, les amplitudes aux directions X et Y pour avoir un mouvement perpendiculaire à la ligne de contact, et réglez l’amplitude à 0,1 volt.
Maintenant, commencez l’acquisition, en utilisant un taux d’image rapide, comme 10 images par seconde. Une fois que l’imagerie a commencé, allumez la pince optique en appuyant sur le bouton poussoir aller. Lorsque l’imagerie est terminée, éteignez la pince à épiler et arrêtez l’acquisition d’images.
Dans le dossier spécifié, il y aura un film et un fichier texte contenant les tensions du galvanomètre pendant l’acquisition. Ouvrez le film pour observer les images collectées. Après analyse de la vidéo, mesurer la rigidité et la tension dans l’échantillon de tissu, en ouvrant la vidéo dans Matlab.
Ici, utilisez la fonction d’intrigue, pour tracer la position de l’interface en fonction de la position du piège. Ensuite, utilisez la boîte à outils sans ajustement matlab facile pour effectuer un ajustement linéaire des données. L’inverse de la pente de l’ajustement, fournit le rapport moyen de la position de piégeage sur la position de l’interface.
À partir de ces informations, utilisez les équations du protocole texte qui l’accompagne pour déterminer la rigidité et les valeurs de tension. Le piège laser produit une déviation sinusoïde de l’échantillon, qui est perpendiculaire à l’interface. présentées ici comme trois positions d’interface successives.
Cela peut également être enregistré comme des films pour générer un climographe et sont analysés plus en détail pour déterminer la position de l’interface avec la résolution des sous-pixels. Ici, la période était de cinq secondes. Dans le régime des petites déformations, les positions de piège et d’interface sont proportionnelles.
L’amplitude de la déflexion de l’interface par rapport à celle du piège donne accès à la tension ou à la rigidité de l’interface. Voici les bases d’une expérience de traction et de libération. Lorsque le piège optique est allumé, à environ un micromètre du point médian de l’interface entre deux cellules, l’interface dévie vers la position du piège.
Le piège est ensuite éteint après le temps désiré. Le graphique qui en résulte peut être comparé à des modèles logiques réels supposés, tels qu’un modèle maxwell. N’oubliez pas que travailler avec le laser infrarouge peut être extrêmement dangereux, et des précautions telles que le port de lunettes de protection, auraient toujours dû être prises lors de l’exécution de cette procédure.
Ici, avec l’utilisateur le plus fréquent de pinces à épiler pour ceux de l’embryon, la méthode peut également être utilisée pour d’autres systèmes mères tels que le
