Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave na mecânica tecidual, como como as propriedades dos contatos celulares mudam no espaço e no tempo durante a morfogênese tecidual. A principal vantagem dessa técnica é que ela é fracamente invasiva e é compatível com imagens vivas, como microscopia de folha de luz. Esta técnica não requer injeção de contas no tecido.
Normalmente usado como sondas demiere em que para obter froses, eu estou animado. Demonstrando o processo estarão Chardes, um engenheiro, e Raphael Clement, cientista de pesquisa do meu nível de terreno. Para começar, configure um microscópio vertical para microscopia de folha de luz na planície horizontal, em seguida, prepare o laser e a óptica para agir como a pinça óptica.
Em seguida, despoque um microcompógico de 500 contas fluorescentes de 500 nanômetros em uma cuvette de vidro, e adicione 10 mililitros de água destilada. Coloque a cuvette no suporte cuvette sob o objetivo, e ajuste o foco do objetivo para que o objetivo toque a superfície da água. Agora, abra o QT Creator ambiente de desenvolvimento integrado que é usado para controlar o software de aquisição.
Abra o software de aquisição, abrindo o microRheo. perfil, e ativar o modo de aquisição ao vivo, selecionando ao vivo. Antes de ligar o laser, coloque os óculos de segurança, então, ajuste a potência do laser para um watt, e ligue o laser.
A transmissão ao vivo deve agora mostrar uma conta presa no foco do laser. Se necessário, ajuste a posição da segunda lente do telescópio, para observar a conta em foco. Também é preciso ajustar o ângulo das manobras do periscópio para centralizar a conta na imagem.
Prepare a placa de aquisição de dados e as conexões de meio-fio, conforme descrito na figura três do protocolo de texto que acompanha. Na interface do obturador óptico, ajuste o parâmetro de tempo aberto para 000.000, o parâmetro de tempo fechado para 000.000, o parâmetro do modo para único e o parâmetro de gatilho para EXT. Uma vez configurado, selecione o botão ativar.
Em QT Creator, abra o ot. perfil para abrir o projeto. Altere o nome da entrada e saída em aogenerator.
arquivo cpp para combinar com os cartões MI que foram usados em sua configuração. Por fim, compile e execute o software de pinça óptica. No software de aquisição, selecione o tempo de exposição desejado, o jogo, o tempo entre duas imagens, o número de imagens a serem adquiridas e o poder do laser.
Em seguida, no software pinça óptica, defina o parâmetro pinça óptica, mostrado aqui, para traçar um círculo. Em seguida, verifique a caixa de parâmetros de IA, a caixa de peso para a frente e pressione o botão de pressionar o registro e, em seguida, inicie a aquisição da imagem. Ligue as pinças ópticas, selecione o botão gerador e permita que a conta presa complete pelo menos dois círculos completos, em seguida, pare a pinça óptica, deselecionando o botão gerador.
Finalmente, pare a aquisição da imagem. Observe que um filme de tiff e um arquivo de texto com tensões galvanômetros são criados na pasta padrão. Abra o Matlab, vá para a pasta de calibração e execute a posição dois script de tensão O script calcula a função de interpolação, traduzindo tensões galvanômetros para posição de armadilha óptica.
Em seguida, acompanhe o protocolo de texto que acompanha a configuração do filme de calibração. Verifique se o mapa de interpolação para as posições a laser X e Y são computados e exibidos corretamente pelo script. Verifique se há regiões brancas no mapa, que representam valores perdidos.
Se houver áreas brancas significativas, repita a operação com um novo filme de calibração. O filme de calibração mostrado aqui representa um filme com dados adequados. Usando um pique, ou um pincel úmido, selecione cerca de 10 embriões no estágio desejado e alinhe-os.
Em seguida, use uma caneta de marcação de diamante para cortar um pedaço do escorregador de vidro, para 10 por 20 por um milômetro. Adicione cola em um lado da peça de corte, e deixe secar por 20 segundos, depois vire a peça de corte e coloque-a na linha de embriões, colocando-a na borda do slide. Em seguida, instale a preparação no suporte da amostra e coloque o suporte no cuvette, em seguida, coloque a cuvette no estado piso-elétrico e encha-a com água.
Para começar, encontre a localização do interesse e mova o ponto médio da junção do alvo para a posição da armadilha laser, usando o estágio do pisar. Coloque os parâmetros da armadilha para alcançar oscilações perpendiculares à linha de contato. Também definir as fases como zero, as amplitudes nas direções X e Y para ter um movimento perpendicular à linha de contato, e definir a amplitude para 0,1 volt.
Agora, inicie a aquisição, usando uma taxa de quadros rápida, como 10 quadros por segundo. Uma vez iniciada a imagem, ligue as pinças ópticas pressionando o botão de pressão de go. Quando a imagem estiver completa, desligue a pinça e pare a aquisição de imagens.
Na pasta especificada, haverá um filme e um arquivo de texto contendo as tensões galvanômetros durante a aquisição. Abra o filme para observar os quadros coletados. Após a análise do vídeo, meça a rigidez e tensão na amostra de tecido, abrindo o vídeo no Matlab.
Aqui, use a função plot, para traçar a posição da interface em função da posição da armadilha. Em seguida, use a caixa de ferramentas sem ajuste fácil do Matlab para realizar um ajuste linear dos dados. O inverso da inclinação do ajuste fornece a razão média da posição da armadilha sobre a posição da interface.
A partir dessas informações, use as equações no protocolo de texto que acompanha para determinar a rigidez e os valores de tensão. A armadilha laser produz um desvio sinusoidal da amostra, que é perpendicular à interface. mostrado aqui como três posições de interface sucessivas.
Isso também pode ser gravado como filmes para gerar um climógrafo e são ainda analisados para determinar a posição da interface com resolução de sub-pixels. Aqui, o período foi de cinco segundos. No regime de pequenas deformações, as posições de armadilha e interface são proporcionais.
A amplitude da deflexão da interface em relação à da armadilha dá acesso à tensão ou rigidez da interface. Mostrado aqui estão os fundamentos de um experimento de tração e liberação. Quando a armadilha óptica é ligada, aproximadamente a um micrômetro de distância do ponto médio da interface entre duas células, a interface desvia em direção à posição da armadilha.
A armadilha é então desligada após o tempo desejado. O gráfico resultante pode ser comparado a modelos lógicos reais, como um modelo maxwell like. Não se esqueça que trabalhar com laser infravermelho pode ser extremamente perigoso, e precauções como o uso de óculos de proteção, sempre devem ter sido tomadas ao realizar este procedimento.
Aqui, com o usuário mais frequente de pinças de tilintar para as do embrião, o método também pode ser usado para outros sistemas maternos, como o
