이 방법은 세포 세포 접촉의 속성이 조직 형태 발생 도중 공간과 시간에 있는 어떻게 변경되는지와 같은 조직 역학에 있는 중요한 질문에 대답하는 것을 도울 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 약하게 침습적이며 광시트 현미경 검사법과 같은 라이브 이미징과 호환된다는 것입니다. 이 기술은 조직에 구슬의 주입을 필요로하지 않습니다.
일반적으로 혜성을 얻을 수있는 데미에르 프로브로 사용, 나는 흥분. 이 과정을 시연하는 것은 제 지형 수준에서 연구 과학자인 샤르드(Chardes)와 라파엘 클레멘트(Raphael Clement)가 될 것입니다. 시작하려면, 수평 평야에서 광 시트 현미경 검사대에 대한 직립 현미경을 설정한 다음 광학 핀셋역할을 레이저와 광학을 준비합니다.
다음으로 500나노미터형형구슬 1개를 유리 큐벳에 넣고 증류수 10밀리리터를 넣습니다. 큐벳 홀더를 목표 아래에 배치하고 목표가 수면에 닿을 수 있도록 목표의 초점을 조정합니다. 이제 인수 소프트웨어를 제어하는 데 사용되는 통합 개발 환경 QT 크리에이터를 엽니다.
마이크로Rheo를 열어 획득 소프트웨어를 엽니다. 라이브를 선택하여 라이브 획득 모드를 켭니다. 레이저를 전환하기 전에 안전 고글을 착용한 다음 레이저 전력을 1와트로 조정하고 레이저를 켭니다.
라이브 피드는 이제 레이저의 초점에 갇혀 구슬을 표시해야합니다. 필요한 경우 두 번째 망원경 렌즈의 위치를 조정하여 비드를 집중시다. 또한 이미지의 비드를 중심으로 잠망경 기동의 각도를 조정해야 할 수도 있습니다.
첨부된 텍스트 프로토콜 의 그림 3에 설명된 대로 데이터 수집 보드 및 연석 연결을 준비합니다. 광학 셔터 인터페이스에서 시간 개방 초 매개변수를 000.000으로 조정하고, 시간 폐쇄 된 sec 매개 변수를 000.000으로, 모드 매개 변수를 단일으로 조정하고, 트리거 매개 변수를 EXT로 조정합니다. 설정이 완료되면 사용 설정 단추를 선택합니다.
QT 크리에이터에서 ot를 엽니다. 프로젝트를 엽니다. aogenerator의 입력 및 출력 이름을 변경합니다.
설정에 사용된 MI 카드와 일치하는 cpp 파일입니다. 마지막으로 광학 핀셋 소프트웨어를 컴파일하고 실행합니다. 획득 소프트웨어에서 원하는 노출 시간, 게임, 두 이미지 사이의 시간, 획득할 이미지 수 및 레이저의 전원을 선택합니다.
그런 다음 광학 핀셋 소프트웨어에서 여기에 표시된 광학 핀셋 매개 변수를 설정하여 원을 추적합니다. 그런 다음 AI 매개 변수 상자, 무게 전달 상자를 확인하고 레코드 푸시 버튼을 누릅니다. 광학 핀셋을 켜고 생성 버튼을 선택하고, 갇힌 비드가 적어도 두 개의 전체 원을 완료한 다음 생성 버튼을 선택 해제하여 광학 핀셋을 중지할 수 있습니다.
마지막으로 이미지 수집을 중지합니다. 티프 동영상과 갈바노미터 전압이 있는 텍스트 파일이 기본 폴더에 생성됩니다. Matlab을 열고 교정 폴더로 이동하여 위치 두 장력 스크립트를 실행스크립트는 보간 기능을 계산하여 갈바노미터 전압을 광학 트랩 위치로 변환합니다.
다음으로, 캘리브레이션 동영상을 설정하기 위해 함께 제공되는 텍스트 프로토콜을 따라다. X 및 Y 레이저 위치에 대한 보간 맵을 계산하고 스크립트에 의해 제대로 표시되는지 확인합니다. 누락된 값을 나타내는 맵의 흰색 영역을 확인합니다.
흰색 영역이 중요한 경우 새 교정 동영상으로 작업을 반복합니다. 여기에 표시된 교정 동영상은 적절한 데이터가 있는 영화를 나타냅니다. 파이크 또는 습한 브러시를 사용하여 원하는 단계에서 약 10개의 배아를 선택하고 정렬합니다.
그런 다음 다이아몬드 마킹 펜을 사용하여 유리 슬라이드 조각을 10~20마일로 자른다. 절단 된 조각의 한쪽에 접착제를 추가하고 20 초 동안 건조 한 다음 절단 된 조각을 뒤집어 배아 라인에 놓고 슬라이드 가장자리에 붙입니다. 다음으로, 샘플 홀더에 준비를 설치하고 홀더를 큐벳에 넣고 피소 전기 상태에 큐벳을 놓고 물로 채웁니다.
시작하려면 관심 위치를 찾아 피사 스테이지를 사용하여 대상 접합의 중간점을 레이저 트랩의 위치로 이동합니다. 접촉선에 수직으로 진동을 달성하기 위해 트랩의 매개 변수를 설정합니다. 또한 위상을 0으로 설정하고 X 및 Y 방향의 진폭은 접촉선에 수직으로 이동하도록 하고 진폭을 0.1 볼트로 설정합니다.
이제 초당 10프레임과 같은 빠른 프레임 속도를 사용하여 인수를 시작합니다. 이미징이 시작되면 이동 푸시 버튼을 눌러 광학 핀셋을 켭갑니다. 이미징이 완료되면 핀셋을 끄고 이미지 수집을 중지합니다.
지정된 폴더에 수집 중에 갈바노미터 전압이 포함된 동영상과 텍스트 파일이 있습니다. 수집된 프레임을 관찰하기 위해 동영상을 엽니다. 비디오의 분석에 따라 Matlab에서 비디오를 열어 조직 샘플의 강성과 장력을 측정합니다.
여기서, 플롯 함수를 사용하여 인터페이스 위치를 트랩 위치의 함수로 플롯한다. 그런 다음 Matlab을 사용하기 쉬운 무료 도구 상자를 사용하여 데이터의 선형 맞춤을 수행합니다. 핏의 경사면의 역은 인터페이스 위치에 대한 트랩 위치의 평균 비율을 제공합니다.
이 정보에서 함께 제공되는 텍스트 프로토콜의 방정식을 사용하여 강성 및 장력 값을 결정합니다. 레이저 트랩은 시료의 부비동성 편향을 생성하며, 이는 인터페이스에 수직입니다. 여기에 세 개의 연속 인터페이스 위치로 표시됩니다.
또한 클리모그래프를 생성하는 영화로 기록할 수 있으며, 서브 픽셀 해상도를 가진 인터페이스의 위치를 결정하기 위해 추가로 분석될 수 있다. 여기서 기간은 5초였습니다. 작은 변형 정권에서 트랩과 인터페이스 위치는 비례합니다.
트랩에 비해 인터페이스 편향의 진폭은 인터페이스 장력 또는 강성에 대한 액세스를 제공합니다. 여기에 풀 및 릴리스 실험의 기본이 표시됩니다. 광학 트랩이 켜지면 두 셀 사이의 인터페이스 중간점에서 약 1마이크로미터 떨어진 곳에 인터페이스가 트랩의 위치를 향해 편향됩니다.
그런 다음 원하는 시간 이후에 트랩이 꺼져 있습니다. 결과 그래프는 모델과 같은 맥스웰과 같은 가설된 실제 논리 모델과 비교할 수 있습니다. DOn't 잊지 마세요 적외선 레이저와 함께 작업 하는 것은 매우 위험 할 수 있습니다., 그리고 보호 고글을 착용 등 예방 조치, 항상이 절차를 수행 하는 경우 촬영 해야.
여기서, 배아의 팅클 핀셋에서 가장 빈번한 사용자와 함께, 방법은 또한 같은 다른 어머니 시스템에 사용될 수있다.
