Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в механике тканей, такие как, как свойства контактов клеток меняются в пространстве и времени во время морфогенеза тканей. Основным преимуществом этой техники является то, что она слабо инвазивна и совместима с живыми изображениями, такими как микроскопия светового листа. Этот метод не требует инъекции бисера в ткани.
Обычно используется в качестве demiere зондов, на которых, чтобы получить froses, я взволнован. Демонстрация процесса будет Шардес, инженер, и Рафаэль Клемент, научный сотрудник из моего уровня местности. Для начала установите вертикальный микроскоп для микроскопии светового листа в горизонтальной равнине, а затем подготовьте лазер и оптику в качестве оптического пинцета.
Далее, труба из одного микро-литра 500 нанометровых флуоресцентных бусин в стеклянный кювет, и добавить 10 миллилитров дистиллированной воды. Поместите кювет в держатель кюветта под цель, и отрегулируйте фокус цели так, чтобы цель касался поверхности воды. Теперь откройте Интегрированную среду разработки qT Creator, которая используется для управления программным обеспечением для приобретения.
Откройте программное обеспечение для приобретения, открыв microRheo. профиль, и включите режим живого приобретения, выбрав жить. Перед включением лазера на надеть защитные очки, затем отрегулировать мощность лазера до одного ватта и включить лазер.
Прямая лента теперь должна показывать бисер, захваченный в центре внимания лазера. При необходимости отрегулируйте положение второго объектива телескопа, чтобы наблюдать за шариком в фокусе. Возможно, также потребуется настроить угол перископных маневров, чтобы центр бисера на изображении.
Подготовь доску по сбору данных и соединения бордюров, как описано на рисунке 3 сопроводительного текстового протокола. На оптическом интерфейсе затвора отрегулируйте параметр открытой сек времени до 000.000, параметр времени закрытой сек до 000.000, параметр режима до одного и параметр триггера к EXT. После настройки выберите кнопку включения.
В КТ Творца, откройте OT. профиль, чтобы открыть проект. Измените название ввода и вывода в аогенераторе.
cpp файл, чтобы соответствовать MI карты, которые были использованы в вашей настройки. Наконец, компилировать и запускать программное обеспечение оптических пинцетов. В программном обеспечении приобретения, выбрать желаемое время экспозиции, игра, время между двумя изображениями, количество изображений, которые будут приобретены, и мощность лазера.
Затем, в программном обеспечении оптических пинцетов, установите параметр оптического пинцета, показанный здесь, чтобы проследить круг. Затем проверьте коробку параметров ИИ, коробку с перевесом и нажмите кнопку записи, а затем начните получение изображения. Включите оптический пинцет, выберите генерирующей кнопки, и позволить захваченных шарик для завершения по крайней мере два полных круга, а затем остановить оптический пинцет, путем неизбирания генерирующей кнопки.
Наконец, прекратите приобретение изображения. Обратите внимание, что в папке по умолчанию создаются фильм tiff и текстовый файл с гальванометром напряжения. Откройте Matlab, перейдите в папку калибровки и запустите два сценария напряжения Скрипт вычисляет функцию интерполяции, переводя гальванометровые напряжения в положение оптической ловушки.
Затем следуйте сопроводительному текстовому протоколу для настройки фильма калибровки. Проверьте, вычисляется ли карта интерполяции для лазерных позиций X и Y по сценарию. Проверьте наличие белых регионов на карте, которые представляют недостающие значения.
При значительных белых областях повторите операцию с помощью нового фильма калибровки. Показанный здесь фильм калибровки представляет собой фильм с адекватными данными. Используя щуку или влажную щетку, выберите около 10 эмбрионов на нужном этапе и выровняйте их.
Затем используйте бриллиантовую маркировку пера, чтобы вырезать кусок стеклянной горки, до 10 на 20 на один милометр. Добавить клей на одной стороне вырезать кусок, и дайте ему высохнуть в течение 20 секунд, затем поверните разрез кусок более, и поместите его на линии эмбрионов, приклеив его на краю слайда. Затем установите препарат в держатель образца, и поместите держатель в кюветт, затем поместите кювет на пизо-электрическое состояние, и заполнить его водой.
Для начала найдите место интереса и переместите середину узла цели в положение лазерной ловушки, используя этап пизар. Установите параметры ловушки для достижения колебаний перпендикулярно линии соприкосновения. Также установите фазы как нулевые, амплитуды в направлениях X и Y, чтобы иметь движение перпендикулярно линии соприкосновения, и установить амплитуду до 0,1 вольт.
Теперь начните приобретение, используя быструю частоту кадров, например 10 кадров в секунду. Как только изображение началось, включите оптический пинцет, нажав кнопку "Гоу". Когда изображение будет завершено, выключите пинцет и прекратите получение изображения.
В указанной папке будет фильм и текстовый файл, содержащий гальванометровые напряжения во время приобретения. Откройте фильм для наблюдения за собранными кадрами. После анализа видео, измерить жесткость и напряжение в образце ткани, открыв видео в Matlab.
Здесь используйте функцию сюжета, чтобы построить положение интерфейса как функцию положения ловушки. Затем используйте Matlab легко подходят свободный набор инструментов для выполнения линейной подгонки данных. Обратная часть наклона подгонки обеспечивает среднее соотношение положения ловушки над положением интерфейса.
Из этой информации используйте уравнения в сопроводительном текстовом протоколе для определения жесткости и значений напряжения. Лазерная ловушка производит синуситное отклонение образца, то есть перпендикулярно интерфейсу. показано здесь в качестве трех последовательных позиций интерфейса.
Это также может быть записано как фильмы для создания климографа и дополнительно проанализированы, чтобы определить положение интерфейса с суб-пиксельным разрешением. Здесь период составил пять секунд. В режиме малых деформаций положение ловушки и интерфейса пропорционально.
Амплитуда отклонения интерфейса относительно того, что из ловушки дает доступ к интерфейсу напряженности или жесткости. Здесь показаны основы эксперимента по вытягивать и выпускать. Когда оптическая ловушка включена, примерно в одном микрометре от середины интерфейса между двумя ячейками, интерфейс отклоняется к положению ловушки.
Ловушка затем выключается после желаемого количества времени. Полученный график можно сравнить с гипотетизированными реальными логическими моделями, такими как модель Максвелла. DOn't забыть, что работа с инфракрасным лазером может быть чрезвычайно опасным, и меры предосторожности, такие как ношение защитных очков, должны всегда были приняты при выполнении этой процедуры.
Здесь, с наиболее частым пользователем из звона пинцет для тех из эмбриона, метод также может быть использован для других материнских систем, таких как
