Este método puede ayudar a responder preguntas clave en la mecánica de tejido, como cómo las propiedades de los contactos celulares cambian en el espacio y el tiempo durante la morfogénesis tisular. La principal ventaja de esta técnica es que es débilmente invasiva y es compatible con imágenes en vivo como la microscopía de láminas de luz. Esta técnica no requiere la inyección de perlas en el tejido.
Usualmente se utilizan como sondas demiere en las que conseguir asos, estoy emocionado. Demostrando el proceso estarán Chardes, un ingeniero, y Raphael Clement, científico de investigación de mi nivel de terreno. Para comenzar, configure un microscopio vertical para la microscopía de lámina de luz en la llanura horizontal, luego prepare el láser y la óptica para que actúen como pinzas ópticas.
A continuación, canaliza un micro litro de cuentas fluorescentes de 500 nanómetros en una cubeta de vidrio, y agrega 10 mililitros de agua destilada. Coloque la cubeta en el soporte de la cubeta bajo el objetivo, y ajuste el enfoque del objetivo para que el objetivo toque la superficie del agua. Ahora, abra el entorno de desarrollo integrado QT Creator que se utiliza para controlar el software de adquisición.
Abra el software de adquisición abriendo el microRheo. perfil, y activar el modo de adquisición en vivo, seleccionando en vivo. Antes de encender el láser, encienda las gafas de seguridad, luego, ajuste la potencia del láser a un vatio y encienda el láser.
La transmisión en vivo ahora debe mostrar una perla atrapada en el foco del láser. Si es necesario, ajuste la posición de la segunda lente del telescopio para observar el cordón en el foco. También es posible que deba ajustar el ángulo de las maniobras del periscopio para centrar el cordón en la imagen.
Prepare la placa de adquisición de datos y las conexiones de bordillo, como se describe en la figura tres del protocolo de texto adjunto. En la interfaz del obturador óptico, ajuste el parámetro de seg de apertura de tiempo a 000.000, el parámetro de segundo de tiempo cerrado a 000.000, el parámetro de modo a solo y el parámetro de disparador a EXT. Una vez configurado, seleccione el botón de activación.
En QT Creator, abra el ot. perfil para abrir el proyecto. Cambie el nombre de la entrada y la salida en el generador.
cpp para hacer juego las tarjetas MI que fueron utilizadas en su configuración. Por último, compile y ejecute el software de pinzas ópticas. En el software de adquisición, seleccione el tiempo de exposición deseado, el juego, el tiempo entre dos imágenes, el número de imágenes a adquirir y la potencia del láser.
A continuación, en el software de pinzas ópticas, configure el parámetro de pinzas ópticas, que se muestra aquí, para trazar un círculo. A continuación, marque la casilla Parámetros de IA, la casilla de peso hacia delante, presione el botón de registro y, a continuación, inicie la adquisición de la imagen. Encienda las pinzas ópticas, seleccione el botón de generación y permita que el cordón atrapado complete al menos dos círculos completos, luego detenga las pinzas ópticas, anulando la selección del botón de generación.
Por último, detenga la adquisición de imágenes. Tenga en cuenta que en la carpeta predeterminada se crean una película tiff y un archivo de texto con voltajes galvanómetros. Abra Matlab, vaya a la carpeta de calibración y ejecute el script de posición dos tensional El script calcula la función de interpolación, traduciendo voltajes galvanómetros a la posición de trampa óptica.
A continuación, siga el protocolo de texto adjunto para configurar la película de calibración. Compruebe si el script calcula y muestra correctamente el mapa de interpolación para las posiciones del láser X e Y. Compruebe si hay regiones blancas en el mapa, que representan valores que faltan.
Si hay áreas blancas significativas, repita la operación con una nueva película de calibración. La película de calibración que se muestra aquí representa una película con datos adecuados. Usando un lucio, o un cepillo húmedo, seleccione unos 10 embriones en la etapa deseada y alinee.
A continuación, utilice una pluma de marcado de diamante para cortar una pieza de la diapositiva de vidrio, a 10 por 20 por un milómetro. Agregue pegamento en un lado de la pieza cortada, y déjela secar durante 20 segundos, luego gire la pieza cortada y colóquela en la línea de embriones, pegándola en el borde de la diapositiva. A continuación, instale la preparación en el portacuchillas y coloque el soporte en la cubeta, luego coloque la cubeta en el estado eléctrico y llénelo con agua.
Para comenzar, busque la ubicación de interés y mueva el punto medio de la unión objetivo a la posición de la trampa láser, utilizando la etapa pisar. Establezca los parámetros del reventado para lograr oscilaciones perpendiculares a la línea de contacto. Establezca también las fases como cero, las amplitudes en las direcciones X e Y para tener un movimiento perpendicular a la línea de contacto y establezca la amplitud en 0,1 voltios.
Ahora, comience la adquisición, utilizando una velocidad de fotogramas rápida, como 10 fotogramas por segundo. Una vez que la imagen haya comenzado, encienda las pinzas ópticas pulsando el botón ir. Cuando la imagen esté completa, apague las pinzas y detenga la adquisición de imágenes.
En la carpeta especificada, habrá una película y un archivo de texto que contiene los voltajes del galvanómetro durante la adquisición. Abra la película para observar los fotogramas recopilados. Tras el análisis del vídeo, mida la rigidez y la tensión en la muestra de tejido, abriendo el vídeo en Matlab.
Aquí, utilice la función de trazado para trazar la posición de la interfaz en función de la posición del reventado. A continuación, utilice la caja de herramientas libre de ajuste fácil de Matlab para realizar un ajuste lineal de los datos. El inverso de la pendiente del ajuste, proporciona la relación media de la posición del reventado sobre la posición de la interfaz.
A partir de esta información, utilice las ecuaciones del protocolo de texto adjunto para determinar la rigidez y los valores de tensión. La trampa láser produce una desviación sinusoidal de la muestra, que es perpendicular a la interfaz. se muestra aquí como tres posiciones de interfaz sucesivas.
Esto también se puede grabar como películas para generar un climograma y se analizan más a fondo para determinar la posición de la interfaz con resolución de subpíxeles. Aquí, el período fue de cinco segundos. En el régimen de pequeñas deformaciones, las posiciones de trampa e interfaz son proporcionales.
La amplitud de la desviación de la interfaz en relación con la de la trampa da acceso a la tensión o rigidez de la interfaz. Aquí se muestran los conceptos básicos de un experimento de extracción y liberación. Cuando se enciende la trampa óptica, aproximadamente un micrómetro lejos del punto medio de la interfaz entre dos células, la interfaz se desvía hacia la posición del desvío.
La trampa se apaga después de la cantidad de tiempo deseada. El gráfico resultante se puede comparar con modelos lógicos reales hipotéticos, como un modelo similar a Maxwell. DOn't forget that working with infrared laser can be extremely hazardous, and precautions such as wearing protective goggles, should have always taken taken al realizar este procedimiento.
Aquí, con el usuario más frecuente de pinzas de tintineo para las del embrión, el método también se puede utilizar para otros sistemas
