Perforation subclavienne de veine comme méthode alternative de collecte d’échantillon de sang chez les rats. Après anesthésie générale, placer les rats en position supinienne et stériliser l’espace infraclavicular avec 75% d’éthanol. Identifiez les fossa sternal supérieurs avant la ponction.
Localiser le site de perforation, caudal à la région externe d’un tiers de la clavicule dans le même côté. La direction de l’aiguille a été positionnée vers le fossa sternal supérieur et devrait presque parallèle à la clavicule, juste postérieure à elle. Après la collecte de sang, appuyez sur le site de perforation pendant une à deux minutes, pour arrêter de saigner.
La collecte de sang avec un volume suffisant est toujours nécessaire dans les expériences sur les animaux. La collecte de sang dans la veine de la queue des rats est populaire et moins stressante que certaines méthodes agressives telles que la collecte d’échantillons de plexus orbitaux rétro. Toutefois, cette méthode est limitée par le taux de réussite.
Ici, nous introduisons notre méthode de collecte de sang avec le volume sanguin désiré de la veine subclavienne. Nos résultats montrent que cette méthode est sûre et pratique, et pourrait être considérée dans le cas où l’échantillonnage de sang de la veine de queue est échoué. Pour commencer, préparez du ruban adhésif, de l’agent épilateur, 75 % d’éthanol, un tube de collecte de sang, une seringue de cinq millilitres à deux points, un rasoir à cheveux, une écaille électronique, de l’héparine et une solution physiologique saline.
Abritez des rats dans des conditions standard, avec un accès gratuit à la nourriture et à l’eau potable, conservés dans des cages de 530 centimètres carrés avec literie à raser en bois. Induire une anesthésie générale chez tous les animaux par injection intraperitoneal avant la ponction. Placez le rat en position supine, fixez les membres postérieurs dans une position confortable et fixez les membres supérieurs parallèles au corps, juste à côté du tronc.
Nettoyez les deux côtés de l’espace infraclavicular pour enlever la fourrure et toute saleté visible. Essuyez le cou et la peau thoracique avec 75% d’éthanol, et gardez la zone propre et sèche avec de la gaze. Les deux côtés de la veine subclavienne conviennent à la perforation, et ici, nous choisissons le bon côté pour la perforation.
Identifiez l’emplacement et la direction de la clavicule droite avec le pouce gauche de l’opérateur, et localisez doucement le fossa sternal supérieur avec l’index. Rincez notre seringue avec une solution d’héparine de 10 unités par millilitre. Localiser le site de perforation, pointer cinq millimètres caudal à l’extérieur d’un tiers de la clavicule droite.
Déplacez doucement la seringue dans la peau du site de perforation. Une fois que l’aiguille pénètre dans la peau infraclavicular, appliquez une pression active par la main droite de l’opérateur. La direction de l’aiguille est positionnée vers le fossa sternal supérieur, et devrait presque parallèle à la clavicule, juste postérieure à elle.
Habituellement, la veine subclavienne pourrait être atteinte en insérant l’aiguille pendant environ deux millimètres dans cette direction. Une fois que l’aiguille entre dans la veine, le sang entre dans la seringue sous une pression active. Ensuite, la pression active doit être maintenue jusqu’à ce qu’un volume approprié de sang soit prélevé.
Après la collecte de sang, retirer l’aiguille de perforation et presser le site de perforation pendant une à deux minutes pour arrêter le saignement. Faites attention: la pression doit être très douce pour éviter l’étranglement. Transférer l’échantillon de sang dans un tube à vide anticoagulé avec EDTA et centrifugeuse à 1600G pendant 10 minutes pour recueillir le plasma.
Aspirez le supernatent à nettoyer le tube et à le conserver à moins 18 degrés Celsius. Pour comparer le taux de réussite entre les opérateurs qualifiés et les débutants, 20 rats SD ont été divisés en deux groupes au hasard. Les résultats montrent que par la veine subclavian droite, neuf rats dans le groupe habile et huit rats dans le groupe de débutant ont réussi, respectivement.
Puis la collecte de sang des trois rats restants a réussi par le côté gauche. Le taux de réussite n’avait pas de différence significative entre ces deux groupes. Le cours du temps était légèrement différent dans ces deux groupes.
Aucune complication grave, comme le pneumothorax, l’hémopneumothorax et l’hémorragie, ne s’est produite pendant ou après l’opération. Tous les animaux ont survécu après l’échantillonnage sanguin. Pour démontrer les difficultés d’apprentissage de la procédure de ponction, nous avons en outre comparé le nombre de retraits entre les groupes qualifiés et débutants.
Comme le montre le tableau deux, le nombre moyen de retraits en groupe qualifié est légèrement inférieur à celui des débutants, mais il n’y a pas de signification statistique. En conclusion, nos résultats montrent que la stratégie subclavian de perforation de veine pour la collecte de sang est sûre et faisable chez les rats. Cette méthode est précieuse, surtout dans les occasions où une grande quantité de sang est nécessaire.
Cette méthode pourrait être une alternative optimale si l’échantillonnage du sang conventionnel échoue.
