Punción de vena subclavia como método alternativo de recolección de muestras de sangre en ratas. Después de la anestesia general, coloque las ratas en posición supina y esterilizar el espacio infraclavicular con 75%etanol. Identifique la fosa esternal superior antes de la punción.
Localice el sitio de punción, caudal a la región externa de un tercio de la clavícula en el mismo lado. La dirección de la aguja se posicionó hacia la fosa esternal superior y debe casi paralela a la clavícula, sólo posterior a ella. Después de la recolección de sangre, presione el lugar de la punción durante uno o dos minutos, para detener el sangrado.
Siempre se necesita una recolección de sangre con suficiente volumen en experimentos con animales. La recolección de sangre de la vena de cola de ratas es popular y menos estresante que algunos métodos agresivos como la recolección de muestras de plexo orbital retro. Sin embargo, este método está limitado por la tasa de éxito.
Aquí, presentamos nuestro método para la recolección de sangre con el volumen de sangre deseado de la vena subclavia. Nuestros resultados muestran que este método es seguro y práctico, y podría considerarse en caso de que el muestreo de sangre de la vena de cola falle. Para empezar, prepare cinta adhesiva, agente depilador, 75%etanol, tubo de extracción de sangre, jeringa de dos mililitros de cinco puntos, afeitadora para el cabello, escala electrónica, heparina y solución salina fisiológica.
Ratas de casa en condiciones estándar, con acceso gratuito a alimentos y agua potable, mantenido en jaulas de 530 centímetros cuadrados con ropa de cama de afeitar de madera. Inducir anestesia general en todos los animales a través de la inyección intraperitoneal antes de la punción. Colocar la rata en posición supina, fijar las extremidades posteriores en una posición cómoda, y fijar las extremidades superiores paralelas al cuerpo, justo al lado del tronco.
Limpie ambos lados del espacio infraclavicular para eliminar el pelaje y cualquier suciedad visible. Limpie el cuello y la piel torácica con 75%etanol, y mantenga el área limpia y seca con gasa. Ambos lados de la vena subclavia son adecuados para la punción, y aquí, elegimos el lado derecho para la punción.
Identifique la ubicación y la dirección de la clavícula derecha con el pulgar izquierdo del operador, y localice suavemente la fosa esternal superior con el dedo índice. Enjuague nuestra jeringa con una solución de heparina de 10 unidades por mililitro. Localice el sitio de punción, apunte cinco milímetros caudal a la región externa de un tercio de la clavícula derecha.
Mueva la jeringa suavemente a la piel del sitio de la punción. Una vez que la aguja entre en la piel infraclavicular, aplique una presión activa a través de la mano derecha del operador. La dirección de la aguja se coloca hacia la fosa esternal superior, y debe casi paralela a la clavícula, sólo posterior a ella.
Por lo general, se podía alcanzar la vena subclavia insertando la aguja durante unos dos milímetros en esta dirección. Una vez que la aguja entra en la vena, la sangre entrará en la jeringa bajo una presión activa. A continuación, se debe mantener la presión activa hasta que se extraiga el volumen adecuado de sangre.
Después de la recolección de sangre, retire la aguja punzante y presione el lugar de la punción durante uno o dos minutos para detener el sangrado. Preste atención: la presión debe ser muy suave para evitar el estrangulamiento. Transfiera la muestra de sangre a un tubo de vacío anticoagulante con EDTA y centrífuga a 1600G durante 10 minutos para recoger plasma.
Aspirar el sobreniente para re-limpiar el tubo y almacenar en menos 18 grados Celsius. Para comparar la tasa de éxito entre los operadores expertos y los principiantes, 20 ratas SD se dividieron en dos grupos al azar. Los resultados muestran que a través de la vena subclavia derecha, nueve ratas en el grupo experto y ocho ratas en el grupo de principiantes tuvieron éxito, respectivamente.
Luego la recolección de sangre de las tres ratas restantes tuvo éxito a través del lado izquierdo. La tasa de éxito no tuvo ninguna diferencia significativa entre estos dos grupos. El curso del tiempo fue ligeramente diferente en estos dos grupos.
No se produjeron complicaciones graves, como neumotórax, hemoneumotórax y hemorragia durante o después de la operación. Todos los animales sobrevivieron después del muestreo de sangre. Para demostrar las dificultades de aprender el procedimiento de punción, comparamos aún más el número de retiros entre los grupos expertos y los grupos principiantes.
Como se muestra en la Tabla Dos, el número promedio de retiros en grupos calificados es ligeramente menor que los principiantes, pero no hay significación estadística. En conclusión, nuestros resultados muestran que la estrategia de punción de vena subclavia para la recolección de sangre es segura y factible en ratas. Este método es valioso, especialmente en ocasiones en las que se necesita una gran cantidad de sangre.
Este método podría ser una alternativa óptima si el muestreo de sangre convencional falla.
