Punção de veia subclávia como método alternativo de coleta de amostras de sangue em ratos. Após anestesia geral, coloque os ratos em posição supina e esterilize o espaço infraclavicular com 75% de etanol. Identifique a fossa sternal superior antes da punção.
Local de perfuração, caudal para a região externa de um terço da clavícula no mesmo lado. A direção da agulha foi posicionada em direção à fossa sternal superior e deve quase paralelo à clavícula, apenas posterior a ela. Após a coleta de sangue, pressione o local da punção por um a dois minutos, para parar de sangrar.
Coleta de sangue com volume suficiente é sempre necessária em experimentos em animais. A coleta de sangue da veia da cauda dos ratos é popular e menos estressante do que alguns métodos agressivos, como a coleta de amostras de plexo orbital retrô. No entanto, este método é limitado pela taxa de sucesso.
Aqui, introduzimos nosso método de coleta de sangue com o volume sanguíneo desejado da veia subclávia. Nossos resultados mostram que este método é seguro e prático, e pode ser considerado no caso de a amostragem de sangue da veia da cauda falhar. Para começar, prepare fita adesiva, agente de depilação, 75% de etanol, tubo de coleta de sangue, dois ponto cinco mililitros de seringe, barbeador de cabelo, balança eletrônica, heparina e soro fisiológico.
Ratos domésticos em condições padrão, com livre acesso a alimentos e água potável, mantidos em gaiolas de 530 centímetros quadrados com roupa de cama de barbear de madeira. Induzir anestesia geral em todos os animais através de injeção intraperitoneal antes da punção. Coloque o rato em posição supina, fixe os membros traseiros em uma posição confortável e fixe os membros superiores paralelos ao corpo, ao lado do tronco.
Limpe ambos os lados do espaço infraclavicular para remover a pele e qualquer sujeira visível. Limpe o pescoço e a pele torácica com 75% de etanol, e mantenha a área limpa e seca com gaze. Ambos os lados da veia subclávia são adequados para perfuração, e aqui, escolhemos o lado direito para perfuração.
Identifique a localização e a direção da clavícula direita com o polegar esquerdo do operador, e localize a fossa sternal superior suavemente com o dedo indicador. Enxágüe nossa seringa com 10 unidades por mililitro solução de heparina. Local de perfuração, aponte cinco milímetros caudal para a região externa de um terço da clavícula direita.
Mova a seringa suavemente para a pele do local da punção. Uma vez que a agulha entre na pele infraclavicular, aplique uma pressão ativa através da mão direita do operador. A direção da agulha está posicionada em direção à fossa sternal superior, e deve quase paralelo à clavícula, apenas posterior a ela.
Normalmente, a veia subclávia poderia ser alcançada inserindo a agulha por cerca de dois milímetros nesta direção. Uma vez que a agulha entra na veia, o sangue entrará na seringa sob uma pressão ativa. Em seguida, a pressão ativa deve ser mantida até que o volume adequado de sangue seja extraído.
Após a coleta de sangue, remova a agulha de perfuração, e pressione o local da punção por um a dois minutos para parar o sangramento. Preste atenção:a pressão deve ser muito suave para evitar o estrangulamento. Transfira a amostra de sangue para um tubo de vácuo antiagulado com EDTA e centrífuga a 1600G por 10 minutos para coletar plasma.
Aspire o supernatent para remasco do tubo e armazene a menos 18 graus Celsius. Para comparar a taxa de sucesso entre os operadores qualificados e os iniciantes, 20 ratos SD foram divididos em dois grupos aleatoriamente. Os resultados mostram que, através da veia subclávia direita, nove ratos do grupo qualificado e oito ratos do grupo iniciante conseguiram, respectivamente.
Então a coleta de sangue dos três ratos restantes conseguiu através do lado esquerdo. A taxa de sucesso não teve diferença significativa entre esses dois grupos. O curso de tempo foi ligeiramente diferente nesses dois grupos.
Não houve complicações graves, como pneumotórax, hemopneumothorax e hemorragia durante ou após a operação. Todos os animais sobreviveram após a amostragem de sangue. Para demonstrar as dificuldades de aprender o procedimento de punção, comparamos ainda mais o número de saques entre os grupos qualificados e iniciantes.
Como mostrado na Tabela Dois, o número médio de saques em grupo qualificado é ligeiramente menor do que os iniciantes, mas não há significância estatística. Em conclusão, nossos resultados mostram que a estratégia de punção venosa subclávia para coleta de sangue é segura e viável em ratos. Este método é valioso, especialmente em ocasiões em que grande quantidade de sangue é necessária.
Este método pode ser uma alternativa ideal se a amostragem de sangue convencional falhar.
