Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés dans le domaine de l’administration de médicaments, telles que la livraison ciblée de thérapeutiques aux cancers humains et le cystoblaste placentaire. Le principal avantage de cette technique est qu’il s’agit d’une méthode simple et reproductible pour synthétiser les peptides conjugués dans d’autres particules. Pour commencer, ajouter trois millimètres d’éthanol à quatre pour cent à un tube stérile centrifugeuse de 10 millilitres.
Ajoutez ensuite 90 microgrammes de solution de stock de lécithine de soja, 210 microgrammes de solution de stock d’acide d’acide DSPE-PEG-carboxylic et 750 microgrammes de solution dox stock. Utilisez une seringue d’un millilitre pour pipette deux milligrammes de solution de stock PLGA. Placer le tube de centrifugeuse dans un bain de glace sur un processeur ultrasonique et sonicate pendant deux minutes.
Ensuite, ajoutez la solution de stock PLGA drop-wise dans le tube de centrifugeuse. Pour purifier les PND, utilisez un filtre centrifugeuse pour laver la solution dans un tampon MES molaire de 0,1 molaire. Ensuite, centrifugez la solution à 1000 G pendant trois minutes à quatre degrés Celsius.
Pour commencer l’activation de l’ester, ajoutez 0,4 milligramme d’EDC à un millilitre de PND. Ensuite, ajoutez 0,24 milligramme de NHS à la réaction. Ensuite, laissez la réaction se produire jusqu’à une heure à température ambiante dans l’obscurité.
Après cela, mélanger les composants de réaction à fond et placer la réaction sur un shaker. Pour commencer la réaction à l’amine, utilisez PBS pour augmenter le pH tampon de 7,2 à 7,5. Ensuite, ajoutez 0,5 milligramme de peptide de ciblage pICSA à la solution de réaction.
Bien mélanger la solution et la placer sur un shaker. Ensuite, laissez la réaction se poursuivre à quatre degrés Celsius pendant la nuit dans l’obscurité. Le lendemain, remplissez les sacs de dialyse avec la solution conjuguée.
Purifiez les PNSP pICSA avec tampon PBS à température ambiante pendant 24 heures dans l’obscurité. Après avoir culture des cellules selon le protocole de texte, retirez les médias et ajoutez un millilitre de médias frais et froids avec cinq pour cent de PBS et pICSA DNPs ou DNPs. Ensuite, incuber le mélange de cellules et de nanoparticules pendant une heure à quatre degrés Celsius.
Après cela, retirez le média et lavez les cellules trois fois avec PBS. Ensuite, ajouter un millilitre de médias frais et incuber les cellules pendant 30 minutes à 37 degrés Celsius. Après cela, retirez le média et lavez les cellules trois fois avec PBS.
Ensuite, ajouter deux millilitres de froid, quatre pour cent de PFA et incuber le mélange à température ambiante pendant 10 minutes. Retirez le PFA et lavez les cellules avec deux millilitres de PBS. Ensuite, ajoutez un millilitre de PBS avec DAPI pour la coloration des noyaux.
Laisser incuber le mélange à température ambiante pendant 10 minutes. Enfin, ajoutez le milieu de montage et l’image de la fluorescence avec un microscope à fluorescence. En utilisant ce protocole, les PND ont été préparés et conjugués avec succès à pICSA BP. Après conjugaison, le diamètre des PND primaires est passé à environ 109 nanomètres.
Les images TEM des PNN et des PNN PICSA ont montré que les particules étaient bien dispersées et ont généralement démontré une morphologie sphérique. Le potentiel zeta des nanoparticules était négatif de 20,1 et 29,9 millivolts, ce qui indique que les nanoparticules étaient très stables. L’analyse d’absorption cellulaire jeg3 a indiqué que les PCISA se sont attachés aux cellules JEG3 dans les 30 minutes.
Par conséquent, le BP pICSA a été efficacement conjugué à la surface. Tout en essayant cette procédure, il est important de se rappeler de sonifier le mélange pendant une à deux minutes avant d’ajouter PLGA. Suite à cette procédure, nos méthodes comme l’analyse HPLC peuvent être effectuées afin de déterminer l’efficacité de conjugaison avec plus de précision.
Après son développement, cette technique a ouvert la voie à des chercheurs dans le domaine de la biologie de la reproduction pour explorer la possibilité d’un traitement ciblé par le placenta dans les complications de la grossesse.
