Création in situ de la perfusion en circuit fermé des organes abdominaux inférieurs et des membres postérieurs chez les souris

Ce protocole peut être utilisé pour répondre à des questions sur l’administration de médicaments et les interactions immunitaires au sein des organes inclus dans notre circuit. Cette technique permet la perfusion d’organes qui ne sont pas possibles de perfuser par les méthodes traditionnelles ex vivo, tout en évitant les organes de dégagement principaux. Avant de commencer l’opération, placez un bain d’eau en circulation et tous les composants en veste d’eau, à 37 degrés Celsius.

Confirmez que le tube est nettoyé et utilisez un piège à bulles dans une chambre humide comme réservoir de perfusate pour limiter le volume de perfusate. Pour effectuer la procédure de cathétérisme, confirmer un manque de réponse au réflexe de la pédale, dans une ampoule anesthésiée mâle de huit à dix semaines voir la souris. Et placez la souris en position supine sur une planche en polystyrène, avec la tête à six heures.

Immobiliser les membres des animaux avec du ruban adhésif et essuyer l’abdomen avec de l’alcool isopropylique. Faire une incision en forme de T dans l’abdomen, en utilisant la coagulation électro pour arrêter tout saignement autour du bord de l’incision. Poussez l’estomac, le jejunum et le côlon sur le côté droit de l’abdomen, pour révéler l’aorte abdominale, le cava de vena et les artères et veines iliaques et iliolumbar communes.

Sous un microscope à dissection, localiser et ligate les artères ovariennes et iliolumbar et les veines avec des sutures de soie 4-O. Boucle deux sutures de soie 4-O sous l’aorte abdominale et vena cava inférieur d’environ un centimètre au-dessus de l’artère iliaque et de la veine, un millimètre de distance. Puis faire un œd lâche dans la suture la plus proche des vaisseaux iliaques.

Utilisez un porte-aiguille pour aligner horizontalement et étirer à la fois le cava vena inférieur et l’aorte abdominale. Et, en gardant les vaisseaux tendus, utilisez un cathéter de bouclier ailé IV de calibre 24 pour percer l’aorte abdominale. Dès que l’aiguille pénètre environ un millimètre dans le récipient, a appuyer sur le bouton pour retirer le noyau de l’aiguille et insérer le cathéter environ cinq millimètres dans le récipient.

Insérez un cathéter de cinq millimètres dans le cava vena inférieur, de la même manière. Et attacher les deux sutures autour des vaisseaux cathétérisés. Ensuite, appliquez de la colle instantanée pour immobiliser les cathéters sur l’erector spin a, et remplacer les organes abdominaux.

Pour installer le système de perfusion, placez la souris sur un tampon de silicium dans la chambre humide en veste d’eau et immobilisez les ailes du cathéter jusqu’au coussin avec des aiguilles de calibre 19. Remplissez l’entrée du cathéter arté conditionné avec un tampon de perfusion préchauffé. Utilisez des forceps hémostatiques et un connecteur vissé pour fixer l’entrée du cathéter au tube et immobiliser le tube de perfusion d’entrée avec du ruban adhésif.

Réglez le débit périssaltique à 0,6 millilitres par minute, et gardez l’écoulement de perfusion ouvert pendant cinq à dix minutes, pour laver le sang à travers le cathéter veineux. Certains caillots seront présents dans le cathéter de sortie, chasseront les caillots avec tampon de perfusate et utiliseront une vis sur le connecteur pour fixer à l’extrémité du cathéter veineux au tube de sortie pour fermer le circuit. Couvrez ensuite la chambre humide d’un couvercle préchauffé jusqu’à deux heures de perfusion, en vérifiant périodiquement le niveau de perfusate.

Ici, des images confoccales après perfusion avec solution de sonnerie contenant Hoechst 33342 et DyLight-649 lectin, sont montrées. Le muscle, la moelle osseuse, les testicules, la vessie, la prostate et la peau des pieds démontrent généralement une coloration nucléaire et vasculaire efficace. L’hématoxyline et la coloration d’éosine de ces tissus après trois heures de perfusion thermic normale, indique une chasse d’eau réussie des organes, sans dommages apparents de tissu.

Ce modèle peut être utilisé pour comprendre les voies d’absorption des médicaments, dans l’environnement physiologique non pertinent. Par exemple, comprendre le rôle des composants sériques dans l’accumulation de médicaments. Nous utilisons le système, pour comprendre le mécanisme de l’accumulation de liposome dans la peau.