L’analyse Flypub mesure les comportements désinhibés sous l’influence de l’alcool. Facilitant ainsi l’étude mécaniste du trouble de consommation d’alcool. L’alcool est l’une des drogues les plus facilement disponibles et les plus consommées au monde.
Le mécanisme neurobiologique sous-jacent au désordre de consommation d’alcool, cependant, est incomplètement compris. La mouche des fruits, Drosophila melanogaster, a été largement utilisée pour étudier les effets de l’éthanol sur l’euphorie, la locomotion, la désinhibition et la sedation. Il est également utilisé pour étudier ses changements durables et durables dans le comportement pertinent à la dépendance tels que la tolérance, la sensibilisation et la recherche d’éthanol.
De nombreuses études menées à Drosophila et sur d’autres modèles animaux se concentrent sur les effets d’activation locomotrice de l’éthanol. L’effet distinct de l’éthanol est la désinhibition comportementale. Cependant, son étude est plutôt sous-représentée.
Pour résoudre ce problème clé, nous avons mis au point l’essai Flypub pour mesurer les comportements désinhibés sous l’influence de l’éthanol. Pour assembler la chambre Flypub, prenez une bouteille ronde et coupez sa partie inférieure d’une marque de 25 millilitres à l’aide d’une lame de rasoir. Créer un trou à la marque de 50 millilitres à l’aide d’un fer à souier chaud.
C’est le point d’accès où les mouches seront introduites. Placez un maillage rond de 54 millimètres de diamètre à la marque de 75 millilitres et fixez-le à l’aide de colle chaude. Placez une feuille de plastique transparent de 70 millimètres de diamètre à l’extrémité du fond ouvert et fixez-la à l’aide de colle chaude.
Pour s’assurer que le rond en plastique est fermement fixé au fond, ad pression vers le bas à l’aide de poids. Recueillir les mouches mâles dans un groupe de 33. Placez-les sur le côté d’un flacon de nourriture.
Placez-les dans un incubateur de 25 degrés Celsius avec au moins 50% d’humidité relative et une lumière de 12 heures, 12 heures de cycle sombre pendant 2 jours avant l’exposition à l’éthanol. Préparez la station d’analyse Flypub en étetant les lumières, un ordinateur et une caméra pour l’enregistrement vidéo. Préparez six pubs pour une série d’expériences.
Étiquetez-les avec un nombre un à six. Introduire délicatement les mouches dans le pub à l’aide d’un petit entonnoir. Fermez le pub à l’aide d’une bande.
Acclimater les mouches pendant 10 minutes. Pendant l’acclimation, réglez la mise au point de la caméra et enregistrez les cinq dernières minutes d’acclimation. Pendant l’aclimation préparer des tampons de coton pour la livraison d’éthanol.
Couper un tampon de coton en quatre quadrants égaux, puis couper les coins pour le faire entrer dans une boîte de Pétri. Ajouter un tampon de coton dans une boîte de Pétri. Ajouter un millilitre de 95 % d’éthanol à la garniture de coton.
Assurez-vous que la solution d’éthanol soit répartie uniformément sur toute la zone de la garniture. Couvrir rapidement la boîte de Petri de lingettes de laboratoire. Placer délicatement un éthanol contenant de la boîte de Pétri sous chaque pub.
Alignez les pubs sur la scène. Commencez l’enregistrement et démarrez simultanément une insurrateur. Enregistrez jusqu’à ce que les mouches cessent de courter ou de bouger.
Retirez l’éthanol contenant de la boîte de Pétri lorsque plus de 90 % des mouches sont sous sedated. Transférer délicatement les mouches sous sedated dans les flacons de nourriture. Remettre-les dans l’incubateur.
Répétez les étapes précédentes toutes les 24 heures pendant six jours consécutifs. Ouvrez la vidéo à l’aide d’un lecteur multimédia. Ensuite, marquez le nombre d’hommes engagés dans des activités de cour toutes les 10 secondes.
Les activités de cour à marquer incluent suivant : extension unilatérale d’aile, chaîne de cour, cercle de cour, flexion abdominale et montage. Sont montrés des enregistrements représentatifs du comportement des mouches. Pendant l’acclimation où les mâles ne montrent pas beaucoup d’activité.
Lors de la première exposition où les mâles présentent une cour sporadique. Et lors de la sixième exposition où les hommes affichent la cour d’activité. Entrez le nombre d’hommes affichant la cour dans un bloc de dix secondes.
Utilisez le nombre maximal d’hommes courtisation en trois blocs de temps consécutifs de 10 secondes comme point de données représentatif. La moyenne de 10 points de données consécutifs ayant la valeur la plus élevée représentent le pourcentage de cour intermale par pub. Le type sauvage Canton-S montre progressivement augmenté les activités de la cour désinhibée sur l’exposition répétée à l’éthanol.
Cela représente la sensibilisation comportementale à l’effet de désinhibition de l’éthanol. Nous avons examiné le rôle de l’octopamine dans la sensibilisation en testant les mouches qui manquent de tyramine bêta-hydroxylase, T bêta H, donc déficiente en octopamine. Comme Canton-S, les mutants T bêta H ont montré des réponses intensifiées à l’exposition répétée à l’éthanol, mais à un niveau réduit.
Lorsque nous avons comparé T bêta H et Canton-S, nous avons observé que les mâles mutants T bêta H affichaient une cour moins désinhibée que les mâles canton-S à chaque exposition, ce qui indique que l’octopamine peut être importante pour la sensibilisation. Maintenant, vous pouvez configurer, conduire et analyser les comportements induits par l’éthanol à l’aide de l’analyse Flypub. Les points clés à garder à l’esprit comprennent, un, l’assemblage approprié du pub.
Deux, livraison cohérente d’éthanol, et trois, score comportemental précis et impartial. L’essai Flypub présente de nombreux avantages. Il est simple, peu coûteux à mettre en place, et facile à apprendre.
En outre, plusieurs groupes de mouches peuvent être apaisé simultanément, facilitant cette étude pour identifier les effets des manipulations génétiques ou expérimentales. L’essai Flypub est très accessible aux expérimentateurs à tous les niveaux, y compris les étudiants du primaire au secondaire, les étudiants de premier cycle et de cycles supérieurs, les post-doctorants et les professeurs. En résumé, l’analyse Flypub vous permettra d’identifier les joueurs moléculaires, les voies cellulaires, les circuits cérébraux et les facteurs de risque qui contribuent au trouble de consommation d’alcool.
