Au cours des dernières décennies, la durée de vie humaine est prolongée, en raison de l’amélioration du niveau de vie et des progrès de la science médicale. L’âge est le plus grand facteur de risque pour de nombreuses maladies potentiellement mortelles, y compris les troubles neurodégénératifs, tels que la maladie d’Alzheimer, la maladie de Parkinson et la maladie de Huntington. Ici, nous démontrons des méthodologies utilisant quelques nouveaux modèles polyvalents de méthode, y compris la nécrose induite par le canal ionique hyper-actif et les agrégats de protéine induit la neurotoxicité, pour surveiller et disséquer le mécanisme moléculaire cellulaire de la dégénérescence neurale.
Pic larves en bonne santé de faire quatre et faire trois nématodes Newton sur la plaque de croissance des nématodes des médias, tamisage avec E.Coli à l’aide de disséquer microscope stéréo. Placez dix et quatre nématodes, plaque d’enzymes parasites et cultivez-les à la température standard, de 20 degrés Celsius. Cinq jours plus tard, laver la plaque avec 1 mL et 9 tampon et recueillir les animaux dans un tube de 1,5 mL.
Centrifugeuse à 30 000 g pendant 30 secondes et enlever le supernatant. Ajouter 0,5 mL de solution de placage. La solution de placage est stockée à température ambiante.
Vortex et surveiller périodiquement jusqu’à ce qu’ils aient tous dissous. Évitez le placage pendant des périodes de plus de cinq minutes. Centrifugeuse à 10 000 g pendant 30 secondes et enlever le supernatant.
Laver deux fois la palette avec 1 mL et neuf tampons. Centrifugeuse à 10000 g pendant 30 secondes et enlever le supernatant. Après le lavage, resuspendre les œufs dans 200 microlitres M9 tampon et les incuber pendant 25 minutes, à 34 degrés Celsius dans un bain d’eau.
Maintenir un groupe distinct d’œufs à 20 degrés Celsius. Pipette 100 microlitres contenant des œufs traités au contrôle ou au choc thermique et les placer sur une plaque 10 GN non enseillée. Chaque assiette contient au moins 100 à 200 œufs.
Incuber les œufs à 20 degrés Celsius jusqu’à l’éclosion. Utiliser et tampon M9 pour laver les plaques et recueillir la vie L1 et les nématodes dans un tube de 1,5 ml. Centrifugeuse à 10 000 g pendant 30 secondes.
Retirer le surnatant et garder la palette. Ajouter 100 microlitres de tampon levangial M9 de 20 millimillons pour anesthésier les nématodes. Pipette 10 microlitres de tampon levangial M9, contenant la montre L1 et les monter dans 2%agar-ls spot placer doucement un coverslip sur le dessus de l’échantillon.
Observez la montre à l’aide de la microscopie DIC. Dégénérescence de balayage des 630 neurones récepteurs en comptant des cellules avec une apparence assistée virtuelle caractéristique de ce nématode. Synchroniser les nématodes en sélectionnant et en transférant 15 à 20 larves de L4 de chacune sous pression sur d’abord les plaques C puis GM.
Incuber et laisser les nématodes se développer à la température standard de 20 degrés Celsius. Effectuez le préconditionnement quotidien pendant 30 minutes en transférant les plaques dans un incubateur fixé à 34 degrés Celsius. Retournez ensuite les nématodes conditionnés à la température standard de 20 degrés Celsius.
Ajouter 10 microlitres de 20 millimaux M9 goutte tampon levangial au centre de l’agar-ls spot. Choisissez les nématodes transgéniques respectifs et transférez-les dans la goutte levangiale M9. Placer 20 à 30 nématodes par goutte.
Déposer délicatement le slip sur le dessus de l’échantillon. Sceller le bordereau de couverture avec du vernis à ongles pour préserver l’humidité tout au long du processus d’imagerie. À l’aide d’un microscope à fluorescence combiné à une caméra, détectez et capturez vos images d’étude de la région de la tête à 20 x grossissement.
Surveillez sept jours de nématodes transgéniques pour la mort des cellules neuronales dopaminergiques. Mesurer les agrégats neuronaux policul dans la région de la tête des animaux transgéniques de quatre jours exprimant 240 fusion avec des personnes vivantes. La mort des cellules nécrotiques induite par un canal iion hyperactif est le plus important dans les nématodes qui a d’anciens oeufs de précondition de choc thermique.
Préconditionnement de choc thermique, favorisant une prévision contre la mort cellulaire induite par l’alpha-synucléine dans l’hermaphrodite adulte de sept jours et diminue les agrégats de protéine de Q40 dans la région de tête des adultes âgés de quatre jours. Le vieillissement est une conséquence des dommages causés par la dégénérescence progressive de l’homéostasie cellulaire et tissulaire. Ainsi, la compréhension de la manipulation de la rupture neuronale liée à l’âge sont les priorités des premières places.
Les techniques présentées combinées avec la génétique et les écrans pharmacologiques pourraient mener à une notification des modulateurs normaux de mort cellulaire avec l’intérêt thérapeutique potentiel.
