Ce protocole est parmi les premiers à décrire l’utilisation d’un appareil auto-injecteur dans l’allotransplantation tumorale de la drosophile. Un sujet qui a gagné en popularité ces dernières années. Le principal avantage de cette méthode est qu’elle augmente l’efficacité de la recherche sur le cancer chez la drosophile en améliorant la vitesse, la cohérence et le rendement de l’allotransplantation tumorale.
L’allotransplantation tumorale chez la drosophile est une technique délicate qui peut être difficile à maîtriser. Soyez patient et ayez confiance que la pratique rend parfait. Après avoir croisé les mouches et couvé les œufs pendant six jours à 18 degrés Celsius, transférer les flacons contenant les larves écloses dans un incubateur fixé à 29 degrés Celsius.
Triez les mouches adultes anesthésiées de type sauvage ou mutantes en fonction de leur sexe. Fixez un morceau de ruban adhésif de cinq centimètres de long à une lame de microscope avec le côté collant vers le haut. Immobilisez les mouches en collant leurs ailes au ruban adhésif avec des pinces.
Placez le boîtier du contrôleur et l’auto-injecteur sur les côtés opposés du microscope optique. Traitez une extrémité du capillaire en verre à l’aide d’un extracteur de micro-pipette en quatre étapes, en le chauffant à une extrémité fermée étroite. Utilisez des pinces pour clipser le capillaire à un angle d’environ 60 degrés afin de préparer un capillaire en verre de 3,5 pouces.
Dévissez légèrement le capuchon de l’injecteur. Maintenez le bouton vide enfoncé pour faire avancer l’aiguille de l’injecteur jusqu’à ce que 70 à 80% de sa longueur totale s’affiche. Utilisez une seringue pour remplir le capillaire en verre avec de l’huile minérale.
Sélectionnez l’une des larves et transférez-la sur une plaque de dissection remplie de 100 microlitres de milieu de Schneider pour préparer la dissection tumorale de l’anneau imaginal SG. En utilisant une paire de pinces pour maintenir la section médiane du corps larvaire, pincez la tête larvaire à l’aide d’une autre paire de pinces et appliquez une force d’étirement dans le sens de la longueur. Localisez et isolez le SG en forme de Y des larves, puis disséquez la tumeur de l’anneau imaginal SG en enlevant le tissu adjacent.
Remplissez le capillaire en verre avec le Medium de Schneider jusqu’au segment supérieur de 0,5 centimètre en maintenant le bouton de remplissage enfoncé. Localisez une tumeur primaire et appuyez sur le bouton de remplissage jusqu’à ce que la tumeur soit aspirée dans le capillaire. Assurez-vous que la tumeur se trouve à l’extrémité du capillaire ou à plusieurs millimètres de l’extrémité du capillaire.
Repérez une mouche adulte immobilisée sur la bande. Ensuite, utilisez une pince pour maintenir doucement le bas-ventre et percer la cuticule latérale inférieure de l’abdomen avec le capillaire. Appuyez sur le bouton vide jusqu’à ce que la tumeur pénètre dans le nouvel abdomen hôte.
À l’aide d’une pince, pincez doucement les ailes de l’hôte pour le retirer du ruban adhésif. Ensuite, placez-le dans un nouveau flacon avec des aliments frais. Dépister les tumeurs qui se sont développées dans l’abdomen de l’hôte à l’aide d’un microscope à fluorescence environ 10 à 14 jours après l’allographe et disséquer la tumeur allogreffée cultivée hors de l’hôte à l’aide de deux paires de forceps.
Utilisez une paire de pinces pour maintenir l’abdomen et l’autre paire pour ouvrir la cuticule abdominale, exposant la tumeur allogreffée. Isolez soigneusement la tumeur des tissus hôtes attachés. Utilisez des aiguilles stériles et disséquez les tumeurs en plus petits morceaux adaptés à la taille capillaire.
Répétez ce processus pour une nouvelle génération d’hôtes adultes pour compléter l’allotransplantation de la tumeur. Le processus de développement de la tumeur a été suivi par imagerie en direct d’une tumeur de l’anneau imaginal SG de première génération se développant dans l’abdomen d’un hôte adulte au jour 10, après l’allotransplantation. Une tumeur de l’anneau imaginal SG de sixième génération occupant une grande partie de l’abdomen hôte le jour 10, post-allotransplantation est montrée ici.
L’imagerie à ce stade peut aider à révéler les modèles de croissance tumorale ainsi que ses comportements de migration et d’invasion. La transplantation tumorale est une excellente technique pour les études longitudinales de la progression tumorale, de l’évolution et des métastases. Résultats de grande importance, pour l’étude des interactions tumeurs-hôtes.
Ce proto a un grand potentiel dans les dépistages de médicaments anticancéreux en utilisant les médicaments Temodal. Grâce à cette technique, les chercheurs seront en mesure d’économiser beaucoup de temps et d’efforts dans l’enquête.
