L’approche du modèle d’AVC de photothrommose peut convenir aux études cellulaires et moléculaires de la plasticité corticale en raison des frontières limitées et de la flexibilité pour induire des lésions dans différentes zones du cortex. Trois principaux avantages distinguent le modèle de photothrommbose des autres modèles d’AVC, la possibilité de diriger la lésion vers la région souhaitée, sa reproductibilité élevée et sa faible mortalité. Un dosage approprié du bengale rose est essentiel pour le succès et la stabilité du modèle.
Les résultats dépendent de spécifications techniques telles que la puissance laser, la synchronisation des applications croisées et le shilling optique du cortex non affecté. Commencez par dissoudre le bengale rose dans une solution saline à 0,9% pour une concentration finale de 10 milligrammes par millilitre. Stérilisez méticuleusement tous les instruments à l’aide d’un stérilisateur au plomb chaud et désinfectez toutes les surfaces avant et après la chirurgie avec un spray désinfectant microbien.
Préparez une seringue remplie de solution saline pour maintenir la zone d’opération hydratée et préparer le gaz d’anesthésie. Mesurez le poids corporel de la souris pour ajuster la dose de bengale rose à injecter. Réglez le coussin chauffant contrôlé par rétroaction associé pour maintenir la température corporelle de la souris.
Une fois que la souris est complètement anesthésiée et fixée dans le cadre stéréotaxique, insérez doucement la sonde rectale pour surveiller la température corporelle de la souris tout au long de l’intervention chirurgicale. Appliquez la pommade pour les yeux au panthénol Dex sur les deux yeux et nettoyez la peau et la fourrure environnante avec un agent désinfectant. Utilisez des ciseaux pour faire une seule incision longitudinale de deux à deux centimètres et demi et rétractez-vous pour exposer le crâne.
Utilisez du coton pour retirer doucement le périoste et localiser les sutures coronales. Portez des lunettes de protection lorsque vous allumez le laser de 561 nanomètres et marquez le plus trois millimètres à gauche, puis éteignez le laser et accrochez l’autocollant avec un trou de quatre millimètres de diamètre dans les coordonnées marquées. Injecter à la souris intrapariétale du bengale rose.
Placez le faisceau laser à une distance de quatre à cinq centimètres du crâne. Allumez le laser et illuminez le crâne pendant 20 minutes. Réhydratez le crâne en appliquant deux gouttes de solution saline à 0,9%.
Après avoir guéri la plaie, placez la souris dans une chambre de récupération à 37 degrés Celsius pour récupérer de l’anesthésie. Après une heure, replacez la souris dans la cage dans une pièce à température contrôlée. La coloration violette cristalline aux sections coronales du cerveau en série a été utilisée pour l’analyse d’entrée de volume de l’infarctus après 24 heures de l’induction de l’AVC.
La variabilité de ce modèle d’AVC était faible et le volume moyen de l’infarctus était de 29,3 millimètres cubes, ce qui représentait 23% de l’hémisphère cérébral. La lésion phototrombeuse a provoqué une déficience motrice sensorielle modérée et à long terme indiquée par le score neuro composite. Les animaux victimes d’un AVC ont eu un changement significatif dans le score neurologique 24 heures après la chirurgie.
Même si les différences persistaient, les souris AVC se sont améliorées au fil du temps. Chez les souris soumises à l’éclairage rose bengal plus, le poids corporel et la température corporelle ont diminué 24 heures après la chirurgie. Cependant, dans les trois jours suivant l’opération, une récupération a été observée.
Les changements ischémiques ont été confirmés à l’aide de l’imagerie laser. Les résultats ont indiqué que l’éclairage rose bengal ou laser seul ne produisait pas de lésion tandis que l’application simultanée des deux générait une zone hypoperfusée ronde entourée par la zone oligomère étroite. Le violet cristallin et la coloration en tunnel pour l’évaluation du volume de l’infarctus 24 heures après la chirurgie n’ont révélé aucune lésion tissulaire, que ce soit dans les chirurgies d’éclairage rose bengal ou laser.
D’autre part, le bengale rose plus l’éclairage laser ont généré une lésion bien délimitée. Il est important de mesurer le poids corporel de l’animal pour ajuster l’injection de bengale rose. L’état correct des commutateurs de coroner est important pour induire une lésion constante entre les animaux.
Étant donné que ce protocole laisse le crâne intact et peut même être effectué à travers les fenêtres crâniennes, il peut être combiné avec l’imagerie in vivo à grand champ ou multiphotons.
