L'approccio del modello di ictus della fototrombosi può essere adatto per studi cellulari e molecolari della plasticità corticale a causa dei bordi limitati e della flessibilità per indurre lesioni in diverse aree della corteccia. Tre vantaggi principali distinguono il modello di fototrombosi da altri modelli di ictus, la possibilità di dirigere la lesione verso la regione desiderata, la sua elevata riproducibilità e la bassa mortalità. Un corretto dosaggio del rose bengal è fondamentale per il successo e per la stabilità del modello.
I risultati dipendono dalle specifiche tecniche come la potenza del laser, la temporizzazione dell'applicazione incrociata e lo scellino ottico della corteccia non interessata. Iniziare sciogliendo il rose bengala in soluzione salina allo 0,9% per una concentrazione finale di 10 milligrammi per millilitro. Sterilizzare meticolosamente tutti gli strumenti utilizzando uno sterilizzatore al piombo caldo e disinfettare tutte le superfici prima e dopo l'intervento chirurgico con uno spray disinfettante microbico.
Preparare una siringa riempita con soluzione salina per mantenere idratata l'area operativa e preparare il gas di anestesia. Misurare il peso corporeo del topo per regolare la dose di rosa bengala da iniettare. Impostare la piastra riscaldante controllata a feedback associata per mantenere la temperatura corporea del mouse.
Una volta che il mouse è completamente anestetizzato e fissato nel telaio stereotassico, inserire delicatamente la sonda rettale per monitorare la temperatura corporea del topo durante la procedura chirurgica. Applicare l'unguento per gli occhi al pantenolo Dex su entrambi gli occhi e pulire la pelle e la pelliccia circostante con un agente disinfettante. Usa le forbici per fare una singola incisione longitudinale da due a due centimetri e mezzo e ritrarre per esporre il cranio.
Utilizzare il cotone per rimuovere delicatamente il periosteo e individuare le suture coronali. Indossare occhiali protettivi mentre si accende il laser a 561 nanometri e contrassegnare i più tre millimetri a sinistra, quindi spegnere il laser e agganciare l'adesivo con un foro di quattro millimetri di diametro nelle coordinate contrassegnate. Iniettare il topo intraparietale con rosa bengala.
Posizionare il raggio laser a una distanza da quattro a cinque centimetri dal cranio. Accendi il laser e illumina il cranio per 20 minuti. Reidratare il cranio applicando due gocce di soluzione salina allo 0,9%.
Dopo aver suturato la ferita, posizionare il topo in una camera di recupero a 37 gradi Celsius per riprendersi dall'anestesia. Dopo un'ora, rimette il mouse nella gabbia in una stanza a temperatura controllata. La macchia viola cristallina alle sezioni cerebrali coronali seriali è stata utilizzata per l'analisi dell'ingresso del volume dell'infarto dopo 24 ore dall'induzione dell'ictus.
La variabilità di questo modello di corsa era bassa e il volume medio dell'infarto era di 29,3 millimetri cubici, che rappresentava il 23% dell'emisfero di un cervello. La lesione da fototrombosi ha causato una compromissione motoria sensoriale moderata e a lungo termine indicata dal punteggio neuro composito. Gli animali colpiti da ictus hanno avuto un cambiamento significativo nel punteggio neurologico 24 ore dopo l'intervento chirurgico.
Anche se le differenze persistevano, i topi stroke sono migliorati nel tempo. Nei topi sottoposti al rose bengal più illuminazione, il peso corporeo e la temperatura corporea sono diminuiti 24 ore dopo l'intervento chirurgico. Tuttavia, entro tre giorni dall'intervento chirurgico, è stato osservato il recupero.
I cambiamenti ischemici sono stati confermati utilizzando l'imaging laser. I risultati hanno indicato che il rose bengal o l'illuminazione laser da sola non hanno prodotto una lesione mentre l'applicazione simultanea di entrambi ha generato un'area ipoperfusa rotonda circondata dalla stretta zona oligomerica. La colorazione viola cristallina e tunnel per la valutazione del volume dell'infarto 24 ore dopo l'intervento chirurgico non ha rivelato alcun danno tissutale né negli interventi chirurgici di illuminazione laser né nel rose bengal.
D'altra parte, il rose bengal più l'illuminazione laser hanno generato una lesione ben delimitata. È importante misurare il peso corporeo dell'animale per regolare l'iniezione di rosa bengala. La corretta condizione degli switcher coroner è importante per indurre una lesione coerente tra gli animali.
Poiché questo protocollo lascia intatto il cranio e può essere eseguito anche attraverso finestre craniche, può essere combinato con l'imaging in vivo a campo largo o multi fotone.
