フォトトロンボシスのストロークモデルアプローチは、限られた境界と皮質の異なる領域で傷害を誘発する柔軟性のために皮質可塑性の細胞および分子研究に適している可能性があります。3つの主な利点は、フォトトロンボシスモデルを他のストロークモデルと区別し、病変を所望の領域に向ける可能性、再現性が高く、死亡率が低い。適切なバラベンガルのドージングは、成功とモデルの安定性のために重要です。
結果は、レーザーパワー、クロスアプリケーションタイミング、影響を受けない皮質の光学シリングなどの技術仕様に依存します。1 ミリリットルあたり 10 ミリグラムの最終濃度の 0.9%生理食塩水にバラのベンガルを溶解することで始めます.ホットリード滅菌器を使用して細心の注意を払ってすべての器具を殺菌し、微生物消毒スプレーで手術前後のすべての表面を消毒します。
塩水溶液を充填したシリンジを調製し、水分補給された操作領域を維持し、麻酔ガスを調製します。注射するローズベンガルの用量を調整するためにマウスの体重を測定します。マウスの体温を維持するために、関連するフィードバック制御加熱パッドを設定します。
マウスが完全に麻酔され、立体的フレームに固定されたら、直腸プローブを静かに挿入して、外科的処置中にマウスの体温を監視します。両方の目にDexパンテノール眼軟膏を塗布し、消毒剤で皮膚と周囲の毛皮をきれいにします。はさみを使用して、縦切りから2センチの縦切りを1回作り、頭蓋骨を露出させるために引き込む。
綿を使用して骨膜を静かに取り除き、コロナ縫合糸を見つけます。561ナノメートルのレーザーをオンにしながら保護メガネを着用し、プラス3ミリメートルを左にマークし、レーザーのスイッチを切り、マークされた座標に直径4ミリメートルの穴を持つステッカーをフックします。ローズベンガルでマウスのイントラパリアタールを注入します。
頭蓋骨から4~5センチメートルの距離にレーザー光を置きます。レーザーのスイッチを入れ、頭蓋骨を20分間照らします。0.9%生理食塩水の2滴を塗布することによって、頭蓋骨を水分補給します。
傷口を縫合した後、麻酔から回復するために摂氏37度の回復室にマウスを置きます。1時間後、温度調節された部屋のケージにマウスを戻します。結晶紫色染色を連続コロナ脳切片に、脳卒中誘導の24時間後の梗塞体積エントリ解析に使用した。
この脳卒中モデルのばらつきは低く、平均梗塞容積は29.3立方ミリメートルで、1つの脳半球の23%を占めていた。光トロンボシス病変は、複合神経スコアによって示される中等度および長期の感覚運動障害を引き起こした。脳卒中動物は手術後24時間後に神経スコアに有意な変化を示した。
違いは持続したが、脳卒中マウスは時間の経過とともに改善した。ローズベンガルプラスイルミネーションを施したマウスでは、手術後24時間で体重と体温が低下した。しかし、手術後3日以内に回復が観察された。
レーザーイメージングを用いて虚血性変化が確認された。結果は、ローズベンガルまたはレーザー照明だけでは病変を生じなかったことを示したが、両方の同時適用は狭いオリゴマーゾーンに囲まれた丸い低浸透領域を生成した。手術後24時間の梗塞容積の評価のための結晶紫とトンネル染色は、ローズベンガルまたはレーザー照明手術のいずれにも組織損傷を明らかにしなかった。
一方、バラベンガルとレーザー照明は、よく区切られた病変を生成した。動物の体重を測定して、バラのベンガル注射を調整することが重要です。検視官スイッチャーの正しい状態は、動物間の一貫した病変を誘発するために重要である。
このプロトコルは頭蓋骨をそのまま残し、頭蓋窓を通しても行うことができるので、広視野または生体内イメージングのマルチフォトンと組み合わせることができる。
