Les blessures du globe ouvert peuvent entraîner une perte permanente de la vision si elles ne sont pas traitées. Ce modèle de culture d’organes du segment antérieur permet d’évaluer ces blessures dans le cadre des besoins d’expérimentation animale. Ce protocole permet de suivre les blessures du globe ouvert et les traitements pour stabiliser la blessure pendant trois jours ou plus avec une plate-forme de culture d’organes.
Trent Pearson, un technicien de recherche du laboratoire Dr.Boice, fera la démonstration de la procédure. Pour commencer, posez le drap chirurgical et les instruments nécessaires à la dissection grossière. Installez l’armoire de biosécurité pour visualiser les yeux sur le microscope à dissection.
Installez l’armoire de biosécurité pour l’assemblage de plats. Installez l’espace de travail d’induction des blessures du globe ouvert à l’intérieur de l’armoire de biosécurité. Placez l’étau de suivi croisé sur la prise de laboratoire, devant la plate-forme de ponction.
Après avoir enlevé les tissus orbitaux supplémentaires et lavé les yeux avec un PBS antimycotique antibiotique, pour hémisectiser l’œil, placez l’œil sur la gaze imbibée de PBS antimycotique antibiotique. Utilisez une lame de rasoir stérile ou un scalpel pour créer une incision près de l’équateur de l’œil. Ensuite, hémisectez l’œil à l’aide de ciseaux chirurgicaux incurvés pour isoler l’œil antérieur.
Utilisez des micro-ciseaux comme pelle pour prélever l’humeur vitrée du segment antérieur et retirez la lentille du segment antérieur avec des micro-ciseaux. Coupez progressivement l’iris à la racine de l’iris radialement jusqu’à ce que le maillage trabéculaire soit visible. Étendez la coupe à 360 degrés autour de l’iris, pour exposer toute la région de maillage trabéculaire et nettoyer tout iris résiduel restant recouvrant le maillage trabéculaire si nécessaire.
Coupez les restes du corps ciliaire postérieur à la région de maillage trabéculaire en ne laissant qu’une bande mince d’un millimètre du tissu. Après avoir placé le segment antérieur dans la boîte de Pétri. Mouillez un coton-tige dans le média et tamponnez doucement au centre de la cornée pour enlever tout pigment.
Tenez les yeux avec une pince et enlevez le pigment supplémentaire autour de la sclérotique en essuyant. Placez le segment antérieur inversé sur la région surélevée du plat inférieur, en veillant à ce que la cornée reste au centre de la région surélevée. Placez la bague de serrage sur le dessus du segment antérieur nouvellement placé et serrez doucement les vis avec la touche L.
Fixez les deux connecteurs fluidiques avec joints toriques aux orifices filetés situés au bas de la parabole. Au premier connecteur fluidique, fixez un moyeu d’aiguille plié de calibre 18 à 90 degrés, une longueur de tuyau, un moyeu d’aiguille de calibre 18, un filtre à seringue en nylon, une valve à trois voies et une seringue de 20 millimètres remplie de média. Au deuxième connecteur fluidique, fixez un moyeu d’aiguille plié de calibre 18 à 90 degrés, une longueur de tuyau, un moyeu d’aiguille de calibre 18, une vanne à trois voies comme démontré pour le premier connecteur de fluide, puis fixez la partie barillet d’une seringue stérile de 10 millilitres, qui agira comme un réservoir pour attraper le liquide et les bulles.
En gardant les vannes à trois voies ouvertes de manière appropriée aux seringues, poussez doucement le support à travers le système, en utilisant le premier port de connecteur fluidique. Pour gonfler le segment antérieur, remplissez le tube avec du média et éventuellement remplissez le réservoir. Retirez les bulles en poussant doucement le support dans le plat et inversez le plat pour pousser les bulles.
Placez la boîte de culture d’organes du segment antérieur dans l’incubateur de culture cellulaire. Dirigez les lignes de tuyauterie par le bas de la porte de l’incubateur pour éviter toute interférence avec l’ouverture et la fermeture de la porte. Positionnez les conduites de tuyauterie avec le réservoir au niveau de l’instrument du transducteur de pression.
Connectez la vanne latérale à trois voies au transducteur de pression mis en place pendant que le PBS circule dans la conduite pour éviter que les bulles d’air ne pénètrent dans les conduites de tuyauterie. À l’intérieur de l’armoire de biosécurité préparée pour l’induction de blessure ouverte, réglez le régulateur de pression sur la plate-forme de perforation à une force de 50 livres par pouce carré pour générer une force de perforation adéquate sur les objets jusqu’à 4,5 millimètres de diamètre. Placez l’étau de suivi croisé sur la prise de laboratoire devant la plate-forme de ponction.
Étendez le bras du piston à sa distance maximale et positionnez l’apex de la cornée dans la région d’un millimètre de l’objet perforant, rétractez le bras du piston et rapprochez le segment antérieur d’un centimètre de l’objet perforant. Pour déclencher le dispositif de ponction, allumez l’appareil et ouvrez l’électrovanne avec le deuxième interrupteur de l’appareil. Pour retirer l’appareil de l’œil, appuyez sur le deuxième interrupteur, vérifiez l’induction correcte de la blessure par inspection visuelle et les fuites de média du site de la blessure.
Après la chirurgie, l’intégrité de l’épithélium cornéen a été évaluée par imagerie à l’aide de la tomographie par cohérence optique. Le tissu du segment antérieur blessé a été imagé immédiatement après la blessure et 72 heures après la blessure. Les yeux contrôlés ne montrent aucune perturbation notable dans la cornée, tandis que des blessures claires ont été localisées à travers la cornée après la blessure.
D’après la projection descendante de l’intensité maximale, il était évident que les blessures étaient de forme et de taille irrégulières, mais que la taille des blessures avait diminué en 72 heures. La pression interoculaire a été observée pendant les trois premiers jours avant la chirurgie afin de déterminer la stabilité de la pression dans la plage acceptable. Dans les résultats représentatifs, trois yeux sur cinq se situent dans la plage de pression interoculaire acceptable.
La pression interoculaire change en raison de la lésion du globe ouvert et de l’intervention thérapeutique. Après l’induction de la blessure au globe ouvert, la pression a considérablement diminué et est restée faible jusqu’à la finalisation de l’expérience. Le traitement des tissus lésés avec de l’adhésif dermabond a entraîné une augmentation de la pression interoculaire par rapport aux tissus non traités, ce qui indique que cette méthode peut être utilisée pour mesurer l’efficacité des thérapies pour restaurer la pression intraoculaire.
La configuration initiale du segment en culture d’organes est essentielle pour la stabilité à long terme du tissu. Trop serrer l’anneau peut causer un stress sur le tissu et réduire la conformité.
