Le modèle TMEV est l’une des premières plateformes expérimentales à permettre l’étude des mécanismes de développement des crises à la suite d’une infection du SNC. Les infections du SNC augmentent considérablement le risque d’épilepsie. Ces modèles aident à identifier des cibles thérapeutiques et des composés potentiels pour les patients à risque.
Les expérimentateurs devraient être formés au travail avec des souris. L’injection de virus peut être très bien pratiquée en injectant du colorant dans les animaux morts pour obtenir une précision et une routine suffisantes. Laura Bell, une étudiante diplômée de mon laboratoire, fera la démonstration de la procédure.
Pour commencer, retirez le capuchon de la seringue à insuline et ajoutez un tube en polyéthylène comme collier autour de l’aiguille pour assurer une profondeur d’injection adéquate de 2,5 millimètres. Ensuite, immergez la seringue dans de l’éthanol pendant 30 minutes et placez la seringue sous la lumière UV pendant 30 minutes. Ensuite, remettez le capuchon sur l’aiguille et enveloppez la seringue dans une poche stérilisante.
Collez le sachet pour le fermer et étiquetez avec la date de préparation. Pour effectuer l’injection du virus, procurez-vous des aliquotes de la souche Daniels de TMEV du congélateur à moins 80 degrés Celsius. Décongelez le virus et gardez-le sur la glace.
Ensuite, chargez la seringue avec la suspension virale. Ensuite, nettoyez le banc avec un désinfectant et travaillez sous un absorbeur de fumée. Transférez la souris anesthésiée de la boîte d’anesthésie sous le capot et vérifiez la tolérance chirurgicale en effectuant un pincement de l’orteil.
Nettoyez ensuite la tête de l’animal avec un tampon d’alcool et inclinez légèrement la tête de la souris vers la gauche afin que le site d’injection soit dirigé vers le haut. Tirez la peau un peu vers l’arrière et insérez l’aiguille dans la tête. Ensuite, injectez 20 microlitres par voie intracordienne à une profondeur de 2,5 millimètres dans la région temporale de l’hémisphère droit.
Laissez la seringue en place pendant cinq à 15 secondes et vérifiez s’il y a une fuite de l’injection ou si des bulles d’air sont visibles, puis préparez une nouvelle seringue. Lorsque vous retirez soigneusement la seringue, tournez-la légèrement. Ensuite, transférez l’animal dans une nouvelle cage, qui est placée à moitié sur un coussin chauffant pendant la récupération de l’anesthésie.
Et ne laissez pas les animaux sans surveillance jusqu’à ce qu’ils aient repris suffisamment conscience pour maintenir une position couchée sternale. Tout d’abord, amenez toutes les cages au banc et observez les animaux pour les convulsions deux fois par jour pendant la phase de lumière. Évaluez l’activité épileptique à l’aide d’une échelle de course modifiée et indiquez le nombre et l’intensité des crises.
Ensuite, faites glisser un stylo sur la cage pour faire du bruit et transférez chaque animal dans une autre boîte et inversement. Pour les animaux qui ne se sont pas saisis spontanément ou après une légère secousse de la cage, déclencher des crises par une manipulation plus intense tout en retournant soigneusement la souris en la retournant à sa queue de gauche à droite. Observez à nouveau le comportement épileptique de chaque animal et répétez le processus pour les cages suivantes.
Les crises comportementales ont été enregistrées si elles se sont produites pendant les injections de drogue ou pendant les séances de surveillance ultérieures de la manipulation des crises. Les données observées ont été présentées sous la forme d’une carte thermique créée en représentant les étapes de la crise en différentes couleurs. En enregistrant l’EEG, divers événements épileptiques peuvent être identifiés dans la phase chronique, des mois après l’infection par le TMEV.
La quantification de la dégénérescence de l’hippocampe et des souris épileptiques infectées par le TMEV montre une diminution significative de la surface de l’hippocampe et une augmentation correspondante de la zone ventriculaire des souris TMEV par rapport aux témoins. L’analyse immunohistologique peut fournir des informations sur divers paramètres tels que la présence de cellules inflammatoires. Dans ce cas, les sections contenant l’hippocampe ont été colorées avec des anticorps pour marquer les lymphocytes T.
Les animaux infectés simulés ne montrent aucune infiltration de lymphocytes T, tandis qu’une infiltration modérée a été observée chez la majorité des souris infectées par le TMEV. Certaines des souris infectées présentent une infiltration sévère des lymphocytes T. Tous les animaux n’ont pas de crises au cours de chaque période d’observation.
En outre, l’incidence la plus élevée de crises survient les cinquième et sixième jours après l’inoculation. Nous utilisons le modèle TMEV pour tester l’efficacité de nouveaux médicaments antiépileptiques contre les crises d’épilepsie induites par l’infection. Des tests examinant les changements de comportement comorbides et les changements électrophysiologiques peuvent également être évalués.
Le modèle TMEV a fourni au milieu de la recherche sur l’épilepsie le premier modèle d’épilepsie du lobe temporal induit par une infection du SNC, permettant d’étudier les mécanismes sous-jacents de l’épileptogenèse après une infection.
