Ce protocole d’un modèle de maladie que vous voyez infection par le virus de la dengue dans le cerveau devenir une plate-forme in vivo pour le dépistage des vecteurs viraux et hôtes associés à la neuropathogenèse. Contrairement aux modèles précédents, nos modèles utilisent des outils de l’infection avec un faible litre viral, pour infecter l’Institut immunocompétent de recherche sur le cancer allaitant les souris pour l’induction de procréation encéphalitique comme la maladie. Ting-Jing Shen, doctorant de mon laboratoire, démontrera la procédure.
Avant d’entreprendre la procédure d’infection, diluer le virus de la dengue non adapté deux stocks, à une fois 10 à la cinquième plaque formant des unités par 40 microlitres de concentration moyenne RPMI 1640. Ensuite, chargez une seringue de 0,3 millilitre munie d’une aiguille de calibre 30 avec 10 microlitres de virus dilué. Et une seringue de 0,3 millilitre équipée d’une aiguille de calibre 30, avec 30 microlitres de virus par animal.
Pour la livraison intercerbrale du virus, appuyez sur l’oracle entre le pouce et l’index pour retenir doucement une souris de sept jours de l’Institut de recherche sur le cancer en position couchée et injecter le volume de 10 microlitres de virus dilué dans la région de lambda, à l’intersection de la suture sagittale et lambdoid. Après l’injection intercerbrale, utilisez le pouce et l’index pour maintenir la souris dans une position supinée, et doucement intraperitoneally, injecter le volume de 30 microlitres de virus dilué, dans l’abdomen murin. Pour la notation de la progression de la maladie, attribuez un score de zéro à cinq à chaque souris inoculée quotidiennement, selon la catégorie des maladies virales aiguës encéphalite-like, et tracez les scores pour chaque jour comme figure basée sur la courbe, en utilisant le plus moyen et moins l’écart type des scores quotidiens d’essai dans chaque groupe.
Par rapport aux changements de poids corporel mesurés chez les souris simulées, moyennes seulement inoculées, les animaux inoculés par le virus de la dengue présentent une diminution du poids corporel à chaque moment au cours de l’essai. En outre, les animaux infectés par le virus de la dengue démontrent une augmentation significative des postures du dos bossu, des convulsions limbiques, de la faiblesse limbique, de la paralysie et de la mort par rapport aux symptômes affichés par les animaux inoculés simulés. En effet, les souris infectées par la dengue présentent une réduction dépendante du temps des taux de survie qui n’est pas observée chez les animaux inoculés simulés, confirmant l’établissement d’un modèle infectieux de virus de la dengue dans le système nerveux central qui démontre la progression des maladies virales aiguës comme l’encéphalite chez la souris.
La ponction du mauvais emplacement peut entraîner un blocage de l’aiguille par le score et le débordement de la solution virale à l’extérieur de la tête, entraînant une injection ratée et une infection ratée. Après la procédure, des échantillons de cerveau peuvent être récoltés pour des dommages pathologiques, l’infiltration de cellules immunitaires, et l’analyse virale de réplication par l’hématoxyline et la cytométrie de flux de coloration d’éosine, et l’analyse de formation de plaque, respectivement. Notre modèle de murine immunocompétente, fournit une plate-forme pour explorer les mécanismes pathogènes de l’infection par le virus de la dengue, pour la mise au point de vaccins contre le virus de la dengue, ou médicaments anti-dengue.
Le virus de la dengue est un agent pathogène de niveau deux de biosécurité et, à ce titre, toutes les expériences avec ce virus devraient être réalisées dans un laboratoire qualifié de biosécurité animale de niveau deux.
