Collecte dynamique en temps réel de liquide extracellulaire hippocampique de rats conscients à l’aide d’un système de microdialyse

Le liquide extracellulaire hippocampique et la foule par la technique de microdialyse cérébrale contribue à surveiller la micro maladie spécifique des maladies du nerf central. La technique de microdialyse cérébrale permet d’obtenir une inquisition dynamique et continue du liquide cérébral interstitiel dans des régions cérébrales spécifiques de rats non anesthésiés. Commencez par fixer le rat anesthésié sur un localisateur cérébral stéréotaxique et essuyez la zone chirurgicale rasée avec un tampon povidone iodée et éthanol trois fois avant l’opération.

Ensuite, faites une incision faciale crânienne de 1,5 centimètre au milieu avec des ciseaux chirurgicaux et retirez le périoste à l’aide de ciseaux chirurgicaux et de pinces ophtalmiques. En considérant le bregma comme la position basale, à l’aide d’une perceuse crânienne, percer l’endocrâne pour percer une ouverture de deux millimètres dans la région CA1 de l’hippocampe. Maintenant, fixez la stilette du cathéter sur la pince d’un localisateur cérébral stéréotaxique et ajustez la position de l’enveloppe de microdialyse aux positions antéropostérieure, médiolatérale et ventrale dorsale.

Ajustez la valve dorso-ventrale du localisateur stéréo cérébral et implantez le boîtier de microdialyse dans la région CA1 à une profondeur de 3,5 millimètres. Percez trois autres ouvertures d’un diamètre de deux millimètres de sorte que les trois ouvertures forment un triangle dans lequel l’ouverture de la sonde est située au centre. L’implant se visse dans les ouvertures à une profondeur d’un millimètre et fixe le cathéter de sonde avec du ciment dentaire.

Ensuite, utilisez une suture chirurgicale 4-O pour fermer la peau. Connectez la microseringue de la pompe de microdialyse au dispositif d’activité éveillée ACSF et au collecteur d’échantillons cryogéniques conformément aux instructions du fabricant. Ensuite, pour évacuer l’air dans le pipeline, réglez la pompe de microdialyse à un débit d’un microlitre par minute.

Ensuite, connectez le pipeline et la sonde de microdialyse cérébrale et faites fonctionner la pompe de microdialyse à un débit d’un microlitre par minute pour injecter ACSF dans la sonde jusqu’à ce que la surface de la sonde soit légèrement humide. Immerger la sonde dans une solution d’injection d’héparine sodique pour une utilisation ultérieure. Pour recueillir la HECF du rat éveillé, insérez la sonde de microdialyse cérébrale dans le cathéter de la sonde et placez le rat dans une chambre avec rembourrage pour s’assurer que les rats sont libres de se déplacer.

Allumez le contrôleur pivotant multicanal pour éviter d’entrelacer les pipelines de microdialyse pendant la libre circulation du rat. Allumez ensuite la pompe à microseringue et pompez l’ACSF à raison d’un microlitre par minute. Après un équilibrage de 60 minutes du système de collecte HECF de microdialyse, collecter périodiquement HECF.

Après l’arrêt du prélèvement, retirez la sonde de microdialyse cérébrale du cathéter de la sonde. Immergez la sonde dans de l’eau désionisée et lavez-la avec de l’eau désionisée pendant 12 heures pour éliminer les dépôts de sel échoués du pipeline et de la sonde. Retirez la sonde et placez-la dans une solution de tripsine à 0,05% à quatre degrés Celsius.

Le liquide extracellulaire hippocampique acquis par la technique de microdialyse cérébrale est semblable à de l’eau, incolore et transparent à la fréquence d’échantillonnage définie. Les procédures les plus importantes consistent à implanter soigneusement la microdialyse dans la région CA1 et à insérer la sonde dans le cathéter pop. La technique de microdialyse permet simplement d’aider au changement dynamique des marqueurs de la maladie dans des régions spécifiques du cerveau, à l’efficacité de la substance du médicament et au catabolisme tissulaire des composants du médicament.