Le doryphore de la pomme de terre est l’un des ravageurs les plus graves de la pomme de terre dans les zones tempérées. Les études de l’immunité et de la pathogenèse de ce ravageur sont principalement réalisées au stade actif. Cependant, en zone tempérée, ce ravageur passe la majeure partie de son cycle de vie en état d’hibernation.
Dans cette étude, nous présentons une méthode d’hibernation du doryphore de la pomme de terre et une technique de collecte des coléoptères en hiver. Le principal avantage de cette méthode est qu’elle permet d’obtenir n’importe quel nombre d’individus hivernants pour l’analyse du virus à n’importe quelle période d’hibernation. Utilisez des cages constituées d’un cadre en bois rigide d’une taille de 25 x 25 x 40 centimètres.
Pour construire un cadre pour la cage, utilisez des lattes de bois d’au moins deux centimètres d’épaisseur et quatre centimètres de largeur. Couvrez l’intérieur de la cage avec un treillis en acier inoxydable d’une taille ne dépassant pas cinq sur trois millimètres. Fixez le maillage à l’aide d’une agrafeuse à bois.
Tapisser l’intérieur de la cage d’un géotextile synthétique noir d’une densité de 60 grammes par mètre carré. Fixez fermement un tube de tissu synthétique translucide respirant, d’environ 60 centimètres de haut au sommet de la cage. Croisez et fixez deux cordes solides au fond de la cage pour la sortir du sol en cas de besoin.
Creusez un trou dans le sol de 40 centimètres de profondeur. Posez de l’herbe sèche ou du foin sur le trou. Placez la cage à l’intérieur de manière à ce que le foin ou l’herbe sèche se trouve entre les parois de la cage et le sol.
Remplissez les cages avec de la terre provenant du même champ de pommes de terre où les insectes sont collectés. Installez des enregistreurs de données de température et d’humidité étanches dans les cages aux profondeurs requises. Plantez les plants de pommes de terre à l’intérieur de la cage trois à quatre semaines avant l’introduction du coléoptère et arrosez-les modérément.
Fixez un tube de tissu synthétique verticalement à un bâton de n’importe quel matériau installé à l’extérieur de la cage. Ramasser manuellement les coléoptères adultes dans les champs de pommes de terre exempts de pesticides vers la fin de la végétation des pommes de terre. Conservez les coléoptères collectés dans des seaux en plastique de 20 litres contenant des fanes de pommes de terre pour nourrir les insectes avant de les placer dans les cages.
Couvrez les seaux d’un tissu respirant. Ne placez pas plus de 200 individus de coléoptères sur les plants de pommes de terre recouverts par le treillis en tissu synthétique. Lorsque les fanes de pommes de terre sont consommées, ajoutez-en de nouvelles placées dans un bocal en plastique contenant de l’eau et changez les fanes de pommes de terre tous les jours par la suite.
Une fois que tous les coléoptères se sont enfouis dans le sol pour passer l’hiver, détachez le tube de tissu synthétique du bâton et posez le tissu. Enlevez la neige au-dessus de la surface de la cage. Desserrez la cage de chaque côté à l’aide d’une pelle solide.
Retirez la cage du sol à l’aide de cordes. Apportez la cage au laboratoire. Retirez la terre de la cage en petites portions, brisez soigneusement les gros morceaux de terre et isolez les coléoptères à l’aide d’une pince à épiler.
Séparez les coléoptères vivants des cadavres. Les coléoptères vivants et sains compactent le sol autour d’eux en formant une cavité d’air, appelée berceau, et sont donc facilement séparés du sol. Les coléoptères tués par des champignons sont momifiés ou ont un mycélium visible à la surface.
Les insectes en décomposition bactérienne sont sombres. Tamisez le sol à travers un tamis pour vous assurer que tous les coléoptères sont isolés et non endommagés. Placez les cadavres présentant des symptômes d’infection fongique ou de décomposition bactérienne dans un tube de Faucon stérile individuel pour une identification future.
Conservez les coléoptères vivants au réfrigérateur à une température de 2 degrés Celsius jusqu’à ce qu’ils soient analysés dans des contenants fermés et ventilés contenant une boule de coton humide. Pour prélever l’hémolymphe, faites une ponction dans la partie latérale de l’abdomen sous l’aorte avec une aiguille à insuline. Pour isoler l’intestin, coupez la capsule de tête, pressez tout le contenu dans une boîte de Pétri avec un tampon phosphate.
Séparez l’intestin et nettoyez-le de la graisse et des vaisseaux de Malpighi. Séparez une section souhaitée de l’intestin, comme l’intestin antérieur, l’intestin moyen ou l’intestin postérieur. Pour isoler le corps adipeux, séparez-le des autres tissus après l’isolement de l’intestin.
Pour isoler les champignons entomopathogènes des cadavres, placez les cadavres momifiés dans une chambre d’humidité stérile. Utiliser des conidies aériennes ou des sclérotes provenant du contenu interne des coléoptères pour le placage sur gélose au dextrose Sabouraud avec 0,4 % d’acide lactique. Isolez les bactéries des cadavres présentant des symptômes de pourriture bactérienne.
Coupez la tête d’un coléoptère, pressez le contenu interne et collectez-le dans des tubes pour un placage ultérieur sur un support pour les bactéries. Des températures inférieures à zéro dans les cages, à une profondeur de 30 centimètres, ont été enregistrées de fin novembre à début avril. La température moyenne au cours de cette période était de 3,3 à 0,1 degrés Celsius.
La température la plus basse enregistrée était de 7,9 degrés Celsius à la mi-février. La mortalité des insectes a augmenté pendant l’hibernation et a atteint un maximum au printemps avant l’émergence. Le nombre initial de coléoptères était de 2 000, dont 1 470 individus ont survécu.
Ainsi, le taux de survie des coléoptères pendant l’hibernation était de 61%Une analyse de 530 cadavres a montré que pendant la période d’hibernation, 53% d’entre eux étaient caractérisés par des symptômes de décomposition bactérienne et 25% étaient caractérisés par des symptômes d’infection fongique. Beauveria a dominé parmi les cultures isolées de champignons entomopathogènes. Le métarhizium, le cordyceps et le lecanicillium étaient beaucoup moins fréquents.
Parmi les bactéries isolées des cadavres présentant des symptômes de décomposition bactérienne, des espèces appartenant aux genres Bacillus, Sphingobacterium, Peribacillus, Pseudomonas, Serratia, Rahnella et Glutamicibacter ont été identifiées. L’utilisation de cette méthode peut résoudre le problème de l’obtention de doryphores de la pomme de terre dans le champ en hiver. Il permet d’obtenir autant d’individus que nécessaire avec le faible taux de mortalité des insectes.
L’étude des différents aspects de l’hibernation des coléoptères est importante tant du point de vue fondamental que du point de vue appliqué pour améliorer l’approche de la lutte contre ce ravageur. Et bien sûr, cette technique peut être adaptée pour d’autres espèces d’insectes hivernant dans le sol.
