הדמיה לא פולשנית של פטרת מופצת הזחלים דג הזברה

Summary

ההתפתחות המהירה, גודל קטן השקיפות של דג הזברה הם יתרונות עצומים למחקר שליטה החיסון המולדת של זיהום ^1-4. כאן אנו מדגימים טכניקות הדבקה הזחלים דג הזברה באמצעות הפתוגן פטרייתי קנדידה אלביקנס על ידי microinjection, המתודולוגיה בשימוש לאחרונה לערב פעילות תא בלען NADPH אוקסידאז שולט dimorphism פטרייתי ⁵.

Abstract

קנדידה להפיץ נגרמת על ידי פתוגן קנדידה אלביקנס היא בעיה חשיבות קלינית אצל אנשים מאושפזים והיא קשורה עם תמותה המיוחס 30 עד 40% ^6. קנדידה מערכתית נשלטת בדרך כלל על ידי חיסון מולדת, אנשים עם פגמים גנטיים מולדים רכיבי תא החיסון כגון NADPH אוקסידאז תא בלען רגישים יותר candidemia ^7-9. מעט מאוד ידוע על הדינמיקה של C. אלביקנס אינטראקציה עם תאים חיסוניים מולדים in vivo. נרחב במבחנה קבעו כי מחוץ המארח ג אלביקנס germinates בתוך מקרופאגים, והוא נהרס במהירות על ידי נויטרופילים ^10-14. במבחנה, אך שימושי, לא יכול לשחזר מורכבים בסביבה vivo, הכולל זמן תלויי הדינמיקה של רמות ציטוקינים, קבצים מצורפים תאי מטריקס ואנשי קשר אינטר ^{10, 15-18} הזחל דג הזברה מציע שורה חוליות ייחודי צדדי לחקר זיהום. במשך 30 הימים הראשונים של התפתחות הזחלים דג הזברה יש רק הגנה החיסון המולדת ^{2, 19-21,} לפשט את חקר מחלות כמו קנדידה שהפיצו, כי הם תלויים במידה רבה חסינות מולדת. גודל שקיפות קטנה של דג הזברה הזחלים לאפשר הדמיה של הדינמיקה זיהום ברמה התאית עבור המארחת והן הפתוגן. הזחלים מהונדס עם קורנים תאים חיסוניים מולדים יכול לשמש כדי לזהות סוגים מסוימים תאים המעורבים זיהום ^22-24. שונה נגד תחושת oligonucleotides (Morpholinos) ניתן להשתמש כדי להפיל רכיבים חיסוניים שונים כגון NADPH אוקסידאז תא בלען וללמוד את השינויים בתגובה fungaאני זיהום ^5. בנוסף על היתרונות האתיים והמעשיים של השימוש חוליות נמוך קטן, הזחלים דג הזברה מציעה אפשרות ייחודית תמונת הקרב ודק בין הפתוגן ומארח הן intravitally וגם בצבע.

דג הזברה נעשה שימוש לזיהום מודל עבור מספר של חיידקים פתוגניים האדם, כבר סייעה התקדמות גדולה בהבנה שלנו של זיהום mycobacterial ^{3, 25.} עם זאת, רק לאחרונה יש פתוגנים הרבה יותר גדול כמו פטריות השתמשו כדי להדביק את הזחל ^{5, 23, 26,} ועד כה לא היתה תיאור ויזואלי מפורט של המתודולוגיה זיהום. כאן אנו מציגים טכניקות שלנו microinjection למוח האחורי החדר של דג הזברה ²⁵ דקדקנית, כולל שינויים שלנו על הפרוטוקולים הקודמים. הממצאים שלנו תוך שימוש במודל דג הזברה הזחל על זיהום פטרייתי לסטות במבחנה ולחזק את הצורך לבחון בין מאכסן לפתוגן interaction בסביבה מורכבת של המארח ולא מערכת פשוטה של צלחת פטרי ^5.

Protocol

כל הפרוטוקולים טיפול דג הזברה וניסויים שבוצעו תחת טיפול בבעלי חיים מוסדי ועדת שימוש (IACUC) פרוטוקול A2009-11-01.

1. Morpholino ומנות הזרקת הזחל

משך הניסוי: * (10-15 דקות)

דרגת הקושי: *

1. על זריקות ביצים, להכין פתרון 2% agarose במים במיקרוגל סטרילית. כאשר הפתרון מתקרר לשפוך חלק ממנו לתוך צלחת פטרי נוספת עמוק (פישר סיינטיפיק) עד שהוא חצי מלא. מגניב על הקרח ולוודא צלחת שטוחה.
2. לאחר המנה מתקרר, שופכים השכבה העליונה של 15 מ"ל agarose 2%. לרסס זריקה ביצה תבנית פלסטיק מחורצת (מסתגלת כלי מדעי) עם מים סטריליים מבקבוק ספריי. בזהירות להניח את הצד Groove עובש לתוך agarose חם. כאשר agarose מתקרר, השתמש מרית מתכת שטוחה (VWR מדעי) לנתק את התבנית מן התנורעלה. לאט לאט להסיר את הרשת מן agarose. העובר גלישת הזרקת מנות Parafilm (VWR מדעי) ו החנות הפוכה ב 4 ° C.
3. על זריקות הזחל דגים, להכין פתרון 2% agarose כמתואר. יוצקים את הפתרון אל תוך צלחת פטרי בגודל סטנדרטי (VWR מדעי) ומניחים בצד עד שהוא מתקשה. מנות גלישת הזרקת הזחל ב Parafilm וחנות הפוך ב 4 ° C.

2. תרבות פטרייתי הכנה

משך הניסוי: ** (30 דקות)

דרגת קושי: **

1. להכין תמצית שמרים, peptone, דקסטרוז (YPD) צלחות אגר: 10 גר '/ ליטר תמצית שמרים, 20 גר' / ליטר peptone, 20 גר '/ ליטר דקסטרוז, ו 20 גר' / ליטר אגר אל החיטוי ו. עבור נוזל YPD להכין 10 גרם / תמצית שמרים ליטר, 20 גר '/ ליטר peptone, 20 גר' / ליטר דקסטרוז ו החיטוי 20-30 דקות ב 121 ° C.
2. יומיים לפני זיהומים דגים להכין צלחת פס מן קפואמניות של קנדידה אלביקנס תרבויות על גבי אגר YPD לקבל מושבות בודדות.
3. דגירה על 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
4. לשים 5 מ"ל מרק YPD לתוך 150 x 16 מ"מ (תרבות צינורות VWR מדעי).
5. יום לפני זיהומים דגים לאסוף 1 מושבה קטנה על אגר YPD עם לוחית עץ (VWR מדעי). שים את מקל בצינור תרבות מערבולת סביב למושבה מחדש להשעות בנוזל YPD.
6. לגדול בן לילה ב 37 ° C על תוף TC-7 רקמות תרבות רולר מצויד גלגל 14 אינץ בדיקה צינור (ניו ברונסוויק מדעי).
7. למחרת, ספין למטה 1 מ"ל של התרבות ב g 14000x דקה 1 בצינור 1.7 מ"ל (Axygen). הסר את supernatant ו resuspend גלולה בנוזל שיורי על ידי vortexing (VWR מדעי).
8. הוסף 1 מ"ל 1x פוספט שנאגרו מלוחים (VWR מדעי) ומסובב כפי שתואר לעיל.
9. חזור על לשטוף PBS 3 פעמים.
10. לדלל 1:100 דילול ב 1x PBS (10 μL של שטף ג אלביקנס לתוך 990 μL 1x PBS).
11. סמוך על Hemocytometer (VWR מדעי).
12. מדולל ל -10 ⁷ תאים למ"ל.

3. דג הזברה זיהומים

משך הניסוי: **** (1-3 שעות)

דרגת הקושי: ****

1. איסוף עוברים לפי סעיף 5 וחנות במים ביצים, 60 מ"ג / ל 'מלחי הים מיידיות (פישר סיינטיפיק) במים deionized סטרילית.
2. באמצעות מיקרוסקופ לנתח כגון SZ61 אולימפוס (Olympus), עוברים dechorionate ביום זיהום. השתמש דומון Dumoxel פינצטה (VWR מדעי) למשוך סיסית ²⁷ מזה כמו לפתוח שקית צ'יפס, או בעדינות לתקוע את פינצטה במצב סגור לתוך סיסית ואז לאט לאט לפתוח אותם. הדג צריך לקפוץ היישר סיסית.
3. מערבולת צלחת פטרי נוספת עמוקה עם מכסה על להעביר דגים למרכז הצלחת. העברת דגים מכסה של צלחת. הסר ביצה מיםלהחליף עם התקשורת טריים. הוספת דגים למדיה.
4. הזרקת מנות חמות הזחל באינקובטור ב 28 מעלות ג הכן tricaine מתאן sulfonate (מערב כימיים בע"מ) דילול על 200 מיקרוגרם / מ"ל ​​עבור anesthetizing דגים.
5. לספור את המספר הרצוי של הזחלים לזיהום (20-50 דגים). את הדג בתמיסה sulfonate tricaine מתאן להמתין 1-2 דקות עד שהם מפסיקים לנוע.
6. הפעל את יחידת MPPI-3 הזריקה (מכשירים מדעיים יישומית). ודא כי מתג לחץ על "הדופק" ואת "משך הדופק" מוגדר 9 עם 3 PSI עבור יחידת backpressure. פתח את שסתום למיכל חנקן עד שהלחץ על יחידת ההזרקה קורא 30 PSI.
7. טען micropipette משך ²⁸ עם 5 μL של vortexed קנדידה אלביקנס בריכוז של 1x10 ⁷ תאים למ"ל. מניחים את micropipette בעריסה micropipette (מכשירים מדעיים יישומית). למלא צלחת ריקה נוספת פטרי עמוקה עם מים. העבר את micropipette עד קצה אניבתוך נוף של פשוט לגעת את פני המים באמצעות מיקרוסקופ לנתח ושימוש דומון Dumoxel פינצטה (VWR מדעי) לקצץ את המחט על 3 מ"מ מקצה הצינורית ומשכה.
8. לחץ על מתג רגל (מכשירים מדעיים יישומית) כדי לאמת את המחט כבר מקוטע. אתה צריך לראות את הנוזל לפזר אם היית מצליח. הקוטר של בולוס נוזלים צריך להיות לא גדול יותר מאשר קוטר האישון של הזחל ²⁵ חסודה דג הזברה (0.21 מ"מ, מניב בתחום של 4.9 NL בנפח). התאם את הלחץ בהתאם אם בולוס נוזלים גדול מדי או קטן מדי.
9. להרדים את הדגים sulfonate מתאן tricaine (200 מיקרוגרם / מ"ל). ברגע דגים הפסיקו לזוז, מערבולת צלחת עם מכסה עד דגים הם במרכז. לאסוף 50 דגים בעזרת פיפטה העברה (פישר סיינטיפיק). לחץ על הצד של פיפטה ליישב את הדגים לכיוון קצה. בעדינות פיפטה הדג על צלחת agarose הזחל שימוש כנוזל שפחות.
10. הקו דגים עם מוט זכוכית חלקה (להיזהר לא לרסק אותם). לשאוב כנוזל רב ככל האפשר את הצלחת. השתמש KimWipe כדי הפתיל משם כל הלחות.
11. מקם את המנה הזחל agarose עם דגים מתחת למיקרוסקופ עד לקבלת תצפית טובה על דגים ועל המחט בעת ובעונה אחת. להזיז את המחט זכוכית לכיוון הדגים. קרב על הדג והן המחט תוך כדי למקם את המחט לכיוון הדגים. בזהירות להזיז את המחט אל תוך שלפוחית ​​זכוכית otic ^{27, 29} (אוזן) של דגים 1. אתה תדע פעם שעברת את המחט אל תוך הדג, כי כאשר אתה לוחץ על מתג רגל (מטיריאלס מכשירים מדעיים), החדר למוח האחורי יהיה להרים מעט.
12. לחץ על מתג רגל (מכשירים מדעיים יישומית) ולצפות נוזלי לפזר בתוך למוח האחורי של הדג החדר ^27. חוזר בי את המחט מדגים ולעבור לדגים הבא. חזור על התהליך עד אשר הזריק את כל הדגים על הצלחת. הסר את כל דEAD דגים להזריק תחליפים כדי לשמור על המספר הנכון (50 דגים). לכל קבוצת דגים 50 מוזרק במחט microinjection החדש חייב להיות מוכן, או C. אלביקנס מתיישב התחתון של המחט סותם את זה, או זורק את הריכוז המוזרק.
13. שוטפים את הדגים את המנה על ידי מטה את צלחת וריסוס ביצים מים על הדג אל צלחת נקייה נוספת פטרי עמוקה המכילה 60 מ"ל מים ביצה. חשוב לא להשאיר את הדגים על agarose יותר מ 15-20 דקות או שהם יהיו להתייבש ולמות.
14. חזור על התהליך עד גמר כל זריקה. אל תשכח PBS ו פתוגניים לא שולטת הזריק.
15. בסיום, לשמור את הדגים על 28 ° C.
16. סגור את שסתום מיכל חנקן. להעביר את יחידת ההזרקה מתג מ "הדופק" כדי "רציפה" כדי להקל את הלחץ בתור טנק, הלחץ אמור לרדת לאפס בשלב זה. לעבור יחידת ההזרקה חזרה "דופק". כבה את יחידת ההזרקה ולנקות את אזור העבודה.

4. הכנת דגים הדמיה

משך הניסוי: ** (30 דקות)

דרגת קושי: **

1. הכן sulfonate tricaine פתרון מתאן כמו קודם (200 מיקרוגרם / מ"ל). צא דגים נגוע, ולהעביר אותם tricaine.
2. הכן 47.9% 0.4 מ"ל נמוכה להמיס agarose (VWR מדעית) במים, ביצה. מחממים את הפתרון על ידי במיקרוגל. מצננים 37 ° C ו-add sulfonate tricaine מתאן (200 מיקרוגרם / מ"ל) לתערובת
3. ברגע דגים משותקת sulfonate מתאן tricaine, דגים פיפטה הפרט לתוך צלחת פטרי (VWR מדעית) המכיל 0.4% נמוך להמיס agarose (VWR מדעי).
4. לאחר מכן, להעביר את הדגים נמוכה להמיס agarose לתוך בארות בודדים של צלחת הזכוכית התחתונה (MatTek Corporation) עבור הדמיה. השתמש מעט נמוכה להמיס agarose ככל האפשר, כך הדג שוכב בתחתית הצלחת. השתמש רק מספיק tricaine-agarose למלא בנר מעגלי צלחת תחתית הכוס.

5. שינויים הקשורים יופיטר הפרוטוקולים

Micropipettes עבור Microinjection

משך הניסוי: * (10-15 דקות)

דרגת הקושי: *

1. משוך מוטות זכוכית חלולים BF120-69-10 (מכשירי סאטר) באמצעות לוהטים בראון micropipette פולר דגם P-97 (סאטר מכשירים) על פי יואן ואח'. ^30. בחירת תוכנית # 7 עם חום התנאים הבאים = 470, מהירות = 120, זמן = 200. מחט המתקבל הוא 8 מ"מ מן שפוע עד קצה ו, מקוטע פעם 3 מ"מ מעל קצה זה בעל קוטר של כ 10 מיקרומטר.
2. טען micropipette זכוכית לתוך הסוגריים. בחר "משוך". נימה חימום יהיה לחמם את המחט על פי פרמטרים של תוכניות ואת מוט זכוכית יפרידו לשתי micropipettes ומשכה. החנות micropipettes בתיבת אחסון פיפטה (Suttאה מכשירים).

אוסף העובר, הזרקת morpholino ותחזוקה

משך הניסוי: *** (1-2 שעות)

דרגת הקושי: ***

3. איסוף עוברים לפי השיטות של רוזן ואח'. ^31. השתמש מסננת פלסטיק (Wares של Knutsford) לאסוף ביצים מטנק הרבייה (בתי גידול מימיים). החזק את מסננת הפוכה על צלחת פטרי נוספת עמוק ולשטוף עם מים מיכל לאיסוף ביצים.
4. להכנת morpholino, להוסיף מים סטריליים μL 300 ל -300 nanomoles של morpholino (GeneTools, LLC). זה נותן המניות עבודה של 1.0 מ"מ.
5. בדוק את ריכוז morpholino באמצעות Nanodrop (Thermo Scientific). בחר "חומצות גרעין לשנות את סוג מדגם" הגל השני "עד 265. הזן קבוע על ידי הכפלת משקל מולקולרי של morpholino ב -1000 מחולק absorptivitמקדם Y מופיע בגליון המאפיינים morpholino oligo.
6. Nanodrop ריקה עם 2 μL 0.1 N HCl. לדלל 5 μL של פתרון morpholino אל μL 95 של 0.1 N HCl (20x דילול). מניחים 2 μL של דילול על כן nanodrop ולמדוד לחץ. להכפיל את הריכוז פי דילול (20). זה נותן ריכוז העבודה של morpholino. כדי לחשב את ריכוז millimolar לחלק את הריכוז מתקבל על ידי משקל מולקולרי של morpholino.
7. להכין מלאי של עובד morpholino ב Danieau חיץ (58 mM NaCl, KCl 0.7 מ"מ, 0.4 מ"מ MgSO _4, 0.6 מ"מ Ca (NO _{3) 2,} 5.0 HEPES מ"מ, ה-pH 7.6) ואדום פנול 0.01% (VWR מדעי).
8. לעבודה הזרקת morpholino פעל על פי פרוטוקול רוזן ואחרים. ³¹ ו יואן ואח'. ^30. יש לשטוף את הכלים morpholino הזרקת מים ביצה חמה על 28 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות. להסיר מים מנות הזרקה ו-line up 1-cבשלב טו עוברים לתוך החריצים של המנה בזריקה (להכינו סעיף 1) עם טפטפת העברה. כל צלחת תחזיק כ 250 ביצים. להזריק 1-2 בשלב עוברי תאים עם morpholino. ביצים יישאר בשלב 1 תאים במשך 15 דקות ^27.
9. יש לשטוף את הביצים הזריק עם מים ביצה עם סיום (מים deionized סטרילית עם מלחי 60 מ"ג / ל 'אושן מיידי) ומקום 60 מ"ל ביצה מים נוספות צלחות פטרי עמוקים. מנות morpholino הזרקת ניתן לעשות שימוש חוזר. לשטוף עם מים, ביצה, כאשר סיים ולאחסן הפוך ב 4 ° C.
10. לאחסון של עוברים להוסיף 60 מ"ל מים ביצה צלחת. לספור את 110 עוברים עם טפטפת לתוך העברה נוספות מנות נפרדות פטרי עמוקים עם 60 מ"ל מים ביצה. הוסף מתילן 0.00003% כחול למנוע התפתחותם של חיידקים ו עוברים דגירה על 28 ° C.
11. כדי להאיץ את ההתפתחות של עוברי לשמור מנות העובר על 33 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות על הבמה על פי קימל ואח'. ^27, המאפשר עוברים לפתח בראשתא המטען זווית של 75 מעלות (25 פרים שלב ^27).
12. לעבודה זיהום הזחל לשמור על העוברים על 28 מעלות צלזיוס לאחר הזרקת עם ג אלביקנס.
13. כל יום להחליף מנות העובר עם 60 מ"ל מים ביצה טרייה.

הדמיה

משך הניסוי: ***** (1-5 שעות)

דרגת הקושי: ***

14. להכין דגים נמוכה להמיס agarose (לפי סעיף 4.2) עם tricaine בתחום ההדמיה זכוכית הכלים התחתון (MatTek Corporation) כפי שתואר קודם לכן. מניחים את המנה על הבמה IX-81 (אולימפוס) מיקרוסקופ אולימפוס הפוכה. להביא את הדג אל המוקד תחת הגדלה פי 4 לעומת זאת תחת הפרעות של אור ההפרש (DIC). דמויות יכולות להיות שנתפסו על 4x, 20x, ו בהגדלה 40X ב DIC, TRITC (isothiocyanate rhodamine tetramethyl), ו FITC (isothiocyanate fluorescein) הגדרות המסנן.
15. השתמש IX-81 Olympus מיקרוסקופ הפוכה עם FV-1000 סריקת לייזר במערכת confocal פי Ariga et al. ^32. לקיים קורסים הזמן בהגדלה 40X ידי הגדרת Z-ערימות עם פרוסות 1-1.5 מיקרומטר כל שעה של זיהום.
16. הדמיה כמובן זמן ארוך של 2 שעות או יותר, במקום שכבת נמוכה להמיס agarose על גבי הדג בצלחת הדמיה כל 2-3 שעות. הדבר מונע agarose מהתייבשות ומוחצת את הדג בזמן שהוא נמצא צילמו. לקורסים זמן ממושך עם מספר קטן של דגים, להשתמש במה מחוממת (Bioptechs Inc) כדי לשמור על 28 מעלות צלזיוס במהלך זיהומים.

6. נציג תוצאות

דוגמה למוח האחורי מוצלח החדר ג אלביקנס זיהום הזחל דג הזברה לאחר 5 שעות לאחר הפגיעה (HPI) ו 24 HPI מוצג (איור 1). מקרופאג דמויי תאים עם ג אפוף אלביקנס נראים החדר למוח האחורי של HPI 5. עד 24 HPI, C. albicans הוא בתוך התא מקרופאג כמושל ברקמות הזנב הגב מעיד על קנדידה מפושטת. תוצאה זו זיהום תלויה מאוד על זריקה מדויקת של 10-15 שמרים בצורת C. אלביקנס לתוך החדר למוח האחורי. הקרנה של דגים נגוע מיד לאחר ההזרקה אפשר להבטיח זאת.

איור 1 מהונדס fli1:. EGFP ^{22, 33} הזחל נגוע CAF2-yCherry קנדידה אלביקנס וגם צילמו intravitally על ידי מיקרוסקופ confocal. (AC) 5 שעות לאחר הפגיעה () הזחל מאשרום עם EGFP-להביע מקרופאג דמויי תאים באתר של זיהום (למוח האחורי החדר) סרגל קנה מידה = 100 מיקרומטר. (B ו-C) הגדלה תמונות גבוהות יותר של דגים אותו, מראה ג אלביקנס בתוך phagocytes. קנה מידה בר = 100 מיקרומטר עבור B ו -10 מיקרומטר עבור C. (DF) 24 שעות לאחר הפגיעה (ד ') הזחל מאשרום עם קנדידה המופץ עם CAF2-yCherry ג אלביקנס בתוך EGFP Macrophage דמויי תאים ברקמה הזנב הגב. סרגל קנה מידה = 100 מיקרומטר. (E ו-F) תמונות הגדלה גבוהה של דגים אותו, מראה ג אלביקנס ברקמות הזנב. סרגל קנה מידה = 100 מיקרומטר.

Discussion

שיטת microinjection דג הזברה המוצג כאן שונה Gutzman et al. ³⁴ ב שכאן אנחנו מדגימים הזרקת דרך שלפוחית ​​otic לתוך החדר למוח האחורי של הזחלים hpf 36-48. השיטה מאפשרת לנו לתאר להזרקה קבועה של 10-15 שמרים לתוך החדר למוח האחורי עם נזק לרקמות מופחת. פרוטוקול זה מייצר זיהום מקומי בתחיל?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
שם מגיב	חברה	מספר קטלוגי	הערות (לא חובה)
הרבייה טנקים	בתי גידול מימיים	2L
1.7 מ"ל צינורות	Axygen	MCT-175-C
מיידית האוקיינוס	פישר סיינטיפיק	S17957C
מנות נוספות עמוקים פטרי	פישר סיינטיפיק	08-757-11z
סטנדרט פטרי מנות	VWR מדעי	25384-302
העברת בטפי להחדרת נוזלים	פישר סיינטיפיק	13-711-7M
תמצית שמרים	VWR ScientiFIC	90000-726
Peptone	VWR מדעי	90000-264
דקסטרוז	פישר סיינטיפיק	D16-1
אגר	VWR מדעי	90000-760
פנויה Hemocytometer	VWR מדעי	82030-468
פוספט שנאגרו מלוחים	VWR מדעי	12001-986
דומון Dumoxel מלקטת	VWR מדעי	100501-806
עץ פינים	VWR מדעי	10805-018
KimWipes	VWR מדעי	300053-964
נמוכה ממיסיםAgarose	VWR מדעי	12001-722
Agarose מנות הזרקה	VWR מדעי	12002-102
בראון הלוהט micropipette פולר	סאטר מכשירים	P-97
מוטות זכוכית חלולים	סאטר מכשירים	BF120-69-10	על מוטות זכוכית זכוכית חלקה על ידי חימום מעל בונזן מבער
פיפטה תיבת אחסון	סאטר מכשירים	BX10
MPPI-3 הזרקת מערכת	מכשור מדעי יישומי	MPPI-3
לחץ בגב היחידה	מכשור מדעי יישומי	BPU
Micropipette ערכת מחזיק	Appliאד מכשור מדעי	MPIP
רגל החלף	מכשור מדעי יישומי	FSW
Micromanipulator	מכשור מדעי יישומי	MM33
בסיס מגנטי	מכשור מדעי יישומי	בסיס מגנטי
Tricaine sulfonate מתאן	המערבי כימיים בע"מ	MS-222
לנתח את היקף	אולימפוס	SZ61 בסיס העליון SZX-ILLB2-100
Confocal מיקרוסקופ	אולימפוס	IX-81 עם מערכת FV-1000 סריקת לייזר confocal
TC-7 תרבות רקמות רולר תוף עם גלגל 14 אינץ בדיקה צינור	ניו ברונסוויק מדעי	TC-7
הדמיה מנות	MatTek Corporation	P24G-1.0-10-F
פיפטה טיפים טוען מחטים	Eppendorf	930001007
צלחת רשתות יציקה	מסתגלת מדע כלים	TU-1
מחוממת שלב	Bioptechs בע"מ	דלתא T-5
שטוחה מרית	VWR מדעי	82027-486
נפות פלסטיק	מרכולתם של Knutsford מחובר	12 ס"מ
Parafilm	VWR מדעי	52858-000
מערבולת Genie	VWR מדעי	14216-184
150 x 16 מ"מ צינורות תרבות	VWR מדעי	60825-435
Nanodrop	Thermo Scientific	ND 2000
פנול אדום	VWR מדעי	97062-478
HCl	VWR מדעי	87003-216
NaCl	VWR מדעי	BDH4534-500GP
KCl	VWR מדעי	BDH4532-500GP
MgSO 4	VWR מדעי	BDH0246-500GP
Ca (NO 3) 2	VWR מדעי	BDH0226-500GP
HEPES	VWR מדעי	BDH4520-500GP
Morpholinos	GeneTools, LLC