טומוגרפיה אופטית קוהרנטית העכבר הרזולוציה על קוליים כדי לסייע הזרקה תוך-עיני במחקר ריפוי גנטי ברשתית

Summary

כאן אנחנו מדגימים גישה מוזרה לשימוש טומוגרפיה אופטית קוהרנטית בתחום ספקטרלי ברזולוציה גבוהה (HR-SD-אוקטובר) כדי לסייע משלוח של סוכנים טיפול גנטי לחלל subretinal להעריך את פעולתה אמיתיות, לאפיין את קולט אור חיוניות.

Abstract

HR-SD-אוקטובר מנוצל כדי לעקוב אחר ההתקדמות של ניוון קולט אור במודלים של העכבר בשידור חי, להעריך את המסירה של סוכני טיפולית לחלל subretinal, וכן להעריך רעילות והיעילות ויוו. HR-SD-אוקטובר משתמשת ליד אור אינפרא-אדום (800-880 ננומטר) ויש אופטיקה במיוחד המיועד של אופטיקה ייחודי של העין העכבר עם רזולוציה צירית sub-2-מיקרון. העכבר הטרנסגניים מודלים של ניוון הרשתית החיצונית (קולט אור) ופקדים היו עם תמונה כדי להעריך את התקדמות המחלה. Microneedles זכוכית משך שימשו כדי לספק זריקות ברשתית sub של adeno-הקשורים וירוס (AAV) או חלקיקים (NP) דרך בגישה טרנס-scleral, טרנס-חיבור. מיצוב זהיר של המחט לתוך מרחב subretinal נדרשה לפני זריקה מכויל ללחץ, אשר מספק נוזלים לחלל תת ברשתית. ניתוח subretinal בזמן אמת נערך על הרשתית שלנו מערכת (RIS) הדמיה. HR-SD-אוקטובר הפגינו מתקדמת ניוון הרשתית אחיד עקב ביטוי רעילים מוטציה האנושי מוטציה אופסין # רודופסין (P347S) transgene (RHO^P347S) בעכברים. HR-SD-OCT מאפשר כימות קפדני של כל השכבות ברשתית. השכבה החיצונית גרעינית (גרת) בעובי ואת קולט אור מדידות אורך (OSL) קטע החיצוני לתאם עם קולט אור חיוניות, ניוון או הצלה. מערכת משלוח RIS מאפשר הדמיה בזמן אמת של זריקות subretinal במחלקת יולדות (~ P10-14) או עכברים בוגרים, ו- HR-SD-אוקטובר מיד קובע ההצלחה של משלוח ומפות המכסים איזורים. HR-SD-אוקטובר הוא כלי רב עוצמה שיכול להעריך את ההצלחה של הניתוח subretinal בעכברים, בנוסף כדי מדידה החיוניות photoreceptors vivo בתוך. HR-SD-אוקטובר יכול לשמש גם כדי לזהות אחיד גדודים בעלי חיים כדי להעריך את היקף ניוון הרשתית, רעילות, והצלה טיפולית בתוך הגן פרה טיפול מחקרים.

Introduction

חוקרים מפתחים ג'ין טיפולים למגוון רחב של מחלות ניוון רשתית ברשתית עם התקוות של הריפוי לתרגם טיפולים עבור מחלות אנושיות^{1,2,3,4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11}. ובזמן תחום או תחום ספקטרלי טומוגרפיה אופטית קוהרנטית (SD-אוקטובר) נעשה שימוש כדי לחקור את ההיבטים של ניוון הרשתית החיצונית במודלים של העכבר ספציפ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

פרוטוקולים בבעלי חיים היו שנסקרו, אושרה על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים שימוש ועדות של HCS יורד את VA והאוניברסיטה באוניברסיטה-באפלו. חיות שימשו בהתאם לאמור של האגודה לחקר חזון, רפואת עיניים (ארוו), את הצהרת הלסינקי.

1. עכבר מודלים

1. לזהות העכבר מודלים להערכה כולל פקדים.
   הערה: הדמיה בוצע עבור C57BL/6(J), hC1/hC1 / / mWT/mWT, מודל ניוון רשתית העכבר humanized חלקית homozygous עבור האדם מוטציה רו^P347S hC1 אללים-הפראי-סוג (WT) העכבר רו^{+ +} גנוטיפ^{26 , 27}, hC1 x BL/6(J), מודל humanized חלקית עם עותק יחיד של מוטציה האנושי

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

תוצאות

הערכת את הנוכחות, קצב ואת אחידות של ניוון הרשתית החיצונית מודל
מדידות של גרת נרשמו מ- OPL בוקיצה, הגדרת גבולות גרת באמצעות הכלי caliper הניתנים התוכנה כלי נגינה. המטרה הייתה למפות את ההתקדמות של ניוון הרשתית החיצונית במודל של עכברים adRP humanized חלקית. תמונות דומות בין ע?.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

HR-SD-אוקטובר מספק שיטה פשוטה פלואורסנציה פוטנציאליים מודלים חייתיים של מחלות אנושיות כדי לקבוע את התועלת שלהם בבדיקת פוטנציאל הרפוי. היכולת לאפיין במהירות ובאמינות מודל בעלי פוטנציאל של מחלות אנושיות חיוני לתהליך של גילוי תרופות טיפוליות (למשל, ריפוי גנטי חלופי, ריפוי גנטי תמונות צי?.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
C57BL6 (J)	Jackson Laboratories	664
N129R-	N/A	N/A
2HRho 1T/1T	N/A	N/A
Envisu R-2200 Ocular Coherence Tomography Instrument (OCT)	Bioptigen	90-R2200-U1-120.
Retinal Imaging System (RIS)	In-house	N/A
Stemi 2000C Microscope	Zeiss	000000-1106-133
P-97 Flaming/Brown micropipette puller	Sutter Instrument Co	p-97
MMN-33 micro manipulator	Narishige USA	MMN-33
PLI-100  micro injector	Harvard Apparatus	64-1736
Micropipette Holder (Rotating)	In-house	N/A
Micropipette Storage Receptacle	World Precision Instruments Inc.	E210
Borosilicate glass capillary tubes 1.5-1.8 X 100mm,	Harvard Apparatus	30-0053
2,2,2-Tribromoethanol	SIGMA Aldrich	T48402-25G
Tert-amyl Alcohol	SIGMA Aldrich	240486-100ML
Atropine Sulfate Ophthalmic Solution, USP 1%	Akorn Inc.	NDC 17478-215-05
Goniovisc	BioVision Limited	NDC 17238-610-15
Cyclopentolate Hydrochloride Ophthalmic Solution, USP  2%	Akorn Inc.	NDC 17478-097-10
Gentamicin Sulfate Ointment USP, 0.1%	Perigo	NDC 45802-046-35
Systane Ultra	Alcon Laboratories, Inc.	9006619-1013
Tetracaine Hydrochloride	Bausch and Lomb	NDC 24208-920-64
Ophthalmic Solution, USP 0.5%	Bausch and Lomb	NDC 24208-920-64
DPBS	Gibco Life Technologies	14190-136
Virus Preparations	ViGene /UNC	N/A
Gold nanorods	NANOPARTz	D12M-850-1.75
Fluorescein Sulfate AK-FLUOR 25%	Akorn Inc.	NDC 17478-250-20
Coverslips	Fisher Scientific	12-548-A
Forceps	Milton	18-825
Needles 30 guage	Beckton Dickenson	W11604
Syringes	Beckton Dickenson	309659
Bioptigen software Package	Bioptigen	N/A
Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution, USP 0.5%	Akorn Inc.	NDC 17478-263-12
Windows Excel	Microsoft	N/A
Adobe Illustrator	Adobe
Scale	Mettler
Scissors	World Precision Instruments
Ear punch	Nat’l band
CL 100 Light source	Welch Allyn	CL100
Nitrogen Gas	Jackson Welding Supply	N/A
Heated Water bath	Neslab	RTE-140
Heating plate	In House	N/A
Heating mat	Cincinnatti Sub Zero	273
Clay mouse holder	Plast.i.clay American Art Clay Co.	N/A
Betadine	MedLine	NDC53329-938-06
Cotton Tip Applicators	American Health Service	Ctag
EtOH 70%	Fisher Scientific	BP2818-100
Gloves Nitrile	VWR	89038-272
Diagnosys ERG Color Dome instrument	Diagnosys Inc.	D125
Contact lenses	In-house	N/A
Diagnosys Software	Diagnosys Inc.	N/A
Origin 6.1 software	OriginLab Corp.	N/A
Reference electrodes	Ocuscience	F-Thread Electrode (DTL) 24”