JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

פרוטוקול זה מתאר את הייצור של polycaprolactone (PCL) נימה עם microspheres חומצה (PLA) polylactic מוטבע אשר מכילים decellularized מטריצות (DM) עבור הדפסת תלת-ממד של רקמות מבניות הנדסת מבנים.

Abstract

Bioprinting תלת-ממד שואפת ליצור מותאם אישית פיגומים פעילים ביולוגית, להתאים את הגודל הרצוי ואת הגיאומטריה. שדרה גומי סינתטי אשר בהתקשותו יכול לספק יציבות מכנית דומה רקמה מקורית סוכנים וחיסונים מציעים רמזים ההלחנה כדי ובתאים, המוביל שלהם ההעברה, התפשטות של בידול כדי לשקם את רקמות המקורי / האיברים1,2. למרבה הצער, רבים תואמת הדפסת תלת-ממד, bioresorbable פולימרים (כגון חומצה polylactic, פלה) הם מודפסים בטמפרטורה של 210 ° C ומעלה - טמפרטורות אשר פוגמים תכשירים. מצד שני, הוא polycaprolactone (PCL), סוג אחר של פוליאסטר, bioresorbable, חומר להדפסה תלת-ממד בעל עדינה ההדפסה לטמפרטורה של 65 מעלות צלזיוס. לכן, זה היה שיערו הזה decellularized מטריצה חוץ-תאית (DM) הנכלל מחסום PLA הגנה תרמית יכול להדפיס תוך PCL פילמנט ולהישאר קונפורמציה פונקציונלי שלה. בעבודה זאת, תיקון osteochondral היה היישום שעבורו נבחנה ההשערה. ככזה, סחוס חזירי היה decellularized, במארז polylactic חומצה microspheres (PLA) אשר היו אז extruded עם polycaprolactone (PCL) לתוך פילמנט לייצר מבנים תלת-ממד באמצעות התמזגו התצהיר דוגמנות. המבנה עם או בלי microspheres את (PLA-DM/PCL ו- PCL(-), בהתאמה) הוערכו ההבדלים תכונות פני השטח.

Introduction

טכניקות הנדסה הנוכחי של רקמות ליישומים קליניים כגון שחזור עצמות, סחוס, גיד, רצועה השתמש אוטומטית - allografts לתיקון רקמות שנפגעו. כל אחת מהטכניקות הללו מתבצע באופן שגרתי כמו "תקן הזהב" הקלינית על ידי קודם קצירת רקמה או מן המטופל או התאמה cadaveric, ולאחר מכן מציבים הרקמה לתוך האתר פגם2. עם זאת, אסטרטגיות אלו מוגבלים על ידי תורם אתר תחלואה, התורם מחסור לאתר פגמים גדולים, הסיכון לזיהום, ולא מצליח למצוא שתלי התואמים את הגיאומטריה הרצוי. בנוסף, מחקרים הראו כי allografts המשמש עבור שחזור לצמצם תכונות מכניות וחיסונים בהשוואה רקמות יליד3. עם שיקולים אלה בחשבון, מהנדסי רקמה לאחרונה פנו שלושה bioprinting תלת-ממדי (3D) כדי לייצר גיאומטריות מותאם אישית, מורכבים פעילים ביולוגית, נועד להכיל פגם בגודל וצורה תוך מתן מספיק תכונות מכניות עד שיפוץ וחיסונים תושלם.

באופן אידיאלי, לפיגום מודפס 3D מקובעים על עמוד השדרה פולימריים, באפשרותך לשמור את היציבות הנדרשת מכני של רקמה מקורית תכשירים incorporated מציעים רמזים הביוכימי הסמוכים תאים, שמוביל את ההגירה שלהם, התפשטות, בידול, רקמת ייצור2,5. למרבה הצער, רוב המבנים אשר מכילים רכיבים ביולוגיים נעשים עם ג'לים או פולימרים חלשים מכדי לעמוד ויוו כוחות מנוסים על ידי הרקמות ממוקד עבור שחזור אוטומטי/להשתלת. פולימרים אחרים כגון חומצה polylactic (PLA) הם bioresorbable, 3D להדפסה, מבחינה מבנית נשמע, אבל מודפסות ב והטמפרטורה מעל 210 ° C - עושה את זה בלתי אפשרי עבור תכשירים להיות מודפס במשותף במהלך ייצור. Polycaprolactone (PCL) הוא עוד אישר ה-FDA, bioresorbable פולימר שניתן 3D מודפס בטמפרטורה נמוכה יותר (65 ° C), אשר הפך פופולרי יותר ויותר בבדיית החולה הספציפי שתלים עם מורכבות מורפולוגיות5,6 ,-7,-8,-9. עם זאת, רוב bioprinters באמצעות טכנולוגיית פנאומטיים שיקשה להדפסת PCL בטמפרטורות נמוכות שבו פעילויות ביולוגיות יכול להישאר ללא פגע. עד כה, השתלבותם של פולימרים אלה עם אוטומטי/allografts biomaterial להדפסה הרומן טרם להתבצע. בהיעדר חומר כזה, סביר בגישה האמיתית רקמות מהונדסים רקמות השיקום. לכן, יש ביקשו לשלב ה-PLA, PCL, ואנו decellularized להשתלת מטריצות (DM) כדי לנצל את היתרונות של כל חומר כדי לייצר מבנה קיימא מסוגלת שיחזור רקמות מורכבות. תהליך זה יספק חוזק מכני ראשוני צורך להתנגד ויוו כוחות, יציבות תרמית כדי להכיל כתוסף בייצור מבנה המשרה כלפי היווצרות של הרקמה הרצויה.

בניסיון האחרונות כתובת הקשיים הנ ל, הראינו כי זה ריאלי כדי לתמצת סחוס decellularized מטריצה חוץ-תאית בתוך מכשול PLA הגנה תרמית יכול להיות extruded בתוך PCL חוטים, שמירה על היכולת של מיט להשפיע על התאים שמסביב מארח2. זה נתן השראה אותנו לחפש את גישות קליניות יעיל עבור שיקום הרקמה. במחקר הנוכחי, אנו מנצלים את הטכנולוגיה פלטפורמה לבנות פיגומים all-in-one זה כוללים את ה-PLA, מיט PCL (PLA-DM/PCL).

המטרה שלנו היא כדי לשפר את היעילות ואת התועלת של allografts בטכניקה biofabrication הרומן המוצע כדי לסכם באופן מדויק יותר רקמה מקורית, בסופו של דבר להשתמש בהם ביישומים שונים.

Protocol

1. קבלת ו Preprocessing Microspheres

  1. תוצרת microspheres עם המטריצה הרצוי אנקפסולציה (PLA-מיט)2.
    הערה: זה הכרחי כי microspheres הם בגודל אחיד. מסיבה זו, ניפוי המנזר microspheres לשימוש חיוני. למרות decellularization מטריקס וכימוס יש כבר מפורט פרסומים קודמים2, להלן סיכום קצר של התהליך.
    1. ראשית, למסוק את הסחוס פקקים של הגפיים האחוריות חזירי. Decellularize הסחוס בסדרה של שוטף עם 0.05% טריפסין/0.5 מ מ tetrasodium ethylenediaminetetraacetic חומצה (EDTA), המתואמת Dulbecco של הנשר בינוני (DMEM) ו- 1.5% חומצה peracetic ו- 2.0% טריטון X-100 במשך 4 שעות כל אחד עם מים מזוקקים שוטף לפני ואחרי כל שלב2.
    2. מסננים את המטריצה decellularized, תקפיא את התמונה, lyophilize, לטחון, להמיס בתוך תמיסת פפסין. בעקבות פירוק, מערבבים את הפתרון פפסין עם פלה אשר מומס דיכלורומתאן.
    3. להוסיף את התערובת dropwise 3% אלכוהול בתמיסה של מים. Centrifuge microspheres וכתוצאה מכך, שטיפה, ניקוז, lyophilize שוב.
      הערה: לקבלת פרטים מלאים על התהליך ראה את פרוטוקול שפורסמו בעבר2.
  2. ניפוי microspheres.
    1. להבטיח כי כל הצלחות מסננת נוקו ביסודיות, יבשים לפני השימוש. אם נחוץ, נקי sieves באמצעות אולטראסאונד מנקה כדי להבטיח כי בכל התחומים יוסרו המסננת.
    2. להרכיב את המסננת בשייקר עם המגש מסננת מיקרומטר 106 בחלק העליון, המגש מיקרומטר 53 אחרי זה, וגם המסננת פאן בחלק התחתון.
    3. מקום יבש microspheres במגש העליון מסננת ומניחים את המכסה על המגש העליון. הפעל ניפוי גס במשך 8 עד 10 דקות חוזר בסדר למשך 8-10 דקות.
      הערה: טיימס מסננת ייתכן שתצטרך להיות גדל או קטן בהתאם האצווה.
    4. בזהירות להסיר את הלוחות מסננת אחד ולמקם אותם במהופך על נייר שוקלים גדולים. הקש על הצדדים בעדינות כדי להבטיח כי רוב הכדורים נפלו מתוך המסננת, על הנייר.
    5. למחוק את הכדורים מנופחים (> 106 מיקרומטר), מוחקים הספירות (< מיקרומטר 53). הוספת ספירות הן בטווח גודל 53 ל 106 מיקרומטר כדי שפופרת צנטרפוגה שכותרתו עם מספר אצווה וסוג ומניחים במקפיא-20 ° C עד להמשך השימוש.

2. הערכות בקרת איכות ננו-ספירה

הערה: ראה איור 1.

  1. ביצוע הערכת מאקרוסקופית-ויזואלית כדי לבדוק כי microspheres הם מדים כדורית, עם אין אגרגטים הנוכחי.
  2. להעריך את microspheres באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סריקה (SEM).
    1. בשביל זה, המקום microspheres על גבי SEM צ'אק, להתיז בחוטי זהב-פלדיום באווירה ארגון באמצעות עם coater לרעוד. להוציא לעובי 4 nm.
    2. ציית תכונות פני השטח, מורפולוגיה, קטרים של microspheres באמצעות 10 kV האצת מתח ומרחק עבודה 10 מ מ כדי להבטיח את הייצור, ניפוי של microspheres היה מוצלח.

3. נימה יצירה עבור הדפסת תלת-ממד

  1. שיא, מדידת המסה של microspheres המתקבל שלבים 2 ו- 3; יש צורך לפחות 25 גרם.
  2. להוסיף אבקת polycaprolactone (PCL) microspheres עבור יחס משקל 1:4 של microspheres כדי PCL.
  3. לערבב את תערובת אבקה על מיניאטורי מתגלגל מערבל-סל ד 20 למשך 5 דקות ולאחר מכן להפוך את המיכל ומערבבים ב rpm 20 עבור 5 דקות נוספות (ראה איור 2).
  4. רבים extruders זמינים מסחרית (ראה את הטבלה של חומרים) יש מעילים בידוד כיוון טמפרטורות עבודה המיועד שלהם הם עבור התצהיר מאוחה מסורתי דוגמנות (FDM) חוטים. לשנות את מכבש (במקרה הצורך) על-ידי הסרת החומר בידודית, להשתמש בו בשילוב עם מאווררים שולחניים (אשר לנשוף אויר extruder ועל פילמנט מעוקם) לשימוש של המתקן בטמפרטורות נמוכות.
    הערה: מאווררים שולחניים אשר לנשוף אויר כדי לקרר את מכבש ואת הלהט שימושיים עבור הליך זה.
  5. תוכנית ההתקנה ההתקנה ציוד לשחול. ראו איור 3.
    1. תוכנית ההתקנה המתקן כך שקע שלה היא ~ 60 ס מ מן הים למנגנון ההדפסה ברקע, עם נתיב ישיר מהשפך ההבלטה לים ברקע.
      הערה: מנגנון יכולים באופן אופציונלי לגדול 3-4 ס מ מהספסל אם יימצא כי הסיב הוא שמוט עד לנקודה של נגיעה benchtop.
    2. למקם מאוורר שולחני ~ 15 ס מ הז'קט חימום וישיר אותו לעבר הז'קט חימום להציע קירור עם אויר לאורך כל פילמנט הייצור. מקום למאוורר הקירור השנייה בערך באמצע הדרך בין extruder ברקע, להפנות. את זה לכיוון extrudate כדי לסייע קירור הלהט עם אויר.
    3. להתאים את מיקום כנדרש לאורך כל התהליך.
  6. הגדרת המתקן ששונה חימום רכיב 52 ° C, להפעיל את שולחן העבודה קירור האוהדים, ולאפשר המכשיר לבוא שיווי משקל במשך 20-30 דק. ודא כי הצינור המתאים מחובר אל המתקן.
  7. לפני ההתחלה, מלא הופר extruder עם התערובת ננו-ספירה/PCL מהשלב 3.3. להפעיל את מנגנון ההדפסה ברקע, אוז'ה extruder ליזום ההבלטה של נימה.
  8. כאשר חוט הלהט הראשוני הנמתח, באופן ידני למשוך את extrudate מהשפך ההבלטה עם מלקחיים ואאכיל אותו מנגנון נימה.
  9. חוט הלהט הרצוי ייקח קצת זמן לצאת מנגנון ההדפסה ברקע. באמצעות מאגרים נפרדים או קלטת, בבירור לסמן כאשר הרכב פילמנט חזותית מופיע אחיד.
  10. לפקח מקרוב על התהליך ולשנות פרמטרים לפי הצורך. התאם את מכבש חום ההבלטה אוז'ה מהירות, מהירות ההדפסה ברקע כדי להשיג 1.75 מ מ קוטר פילמנט כפי שהיא נמדדת מחוגה. להתאים את האוהדים לפי הצורך כדי לקרר את הסיב כראוי כדי למנוע חתכים פילמנט שאינו עגול. לערבב ולמלא את הופר לפי הצורך.
    הערה: תשומת לב נדרש במהלך תהליך זה כדי להשיג פילמנט נאותה להדפסה תלת-ממד עוקבות. הפרמטרים לעיל ישתנה בהתאם לתנאי הסביבה, מילוי רמת אחידות של תערובת במכרז, תרמודינמיקה וזרימה דינמיקת קבוצות ספציפיות של PCL, microspheres.
  11. המשך הבלטת ממד עד כל האבקה שימש הופר הוא כמעט ריק. להוסיף אבקת PCL (ללא microspheres) הופר לחשוף את התערובת ננו-ספירה שנמצא כעת בתוך המתקן. המשך להוסיף אבקת PCL כדי הופר עד לא microspheres יותר גלויים ב- extrudate.
  12. הקפד לתייג והוא נפרד הסיב אשר מכיל את microspheres בריכוז הרצוי, כמו לאחר הסיב הוא מקורר זה קשה יותר להבחין בין חוט הלהט אחיד לבין נימה לא אחידה.
  13. המשך הבלטת ממד עד שיש אבקת מינימלי עזב במכרז, ולאחר מכן כבה את מנגנון ההדפסה ברקע, אוז'ה extruder, גוף החימום extruder, ואת האוהדים.

4. הדפסה עם נימה

  1. עיצוב גיאומטריית הצורה הרצויה וליצור משתמש במחשב בעזרת תוכנת עיצוב. לאחר מכן לחתוך את הדגם, להכתיב את toolpath באמצעות תוכנה עם פרוסות התואמת מכונת הדפסה 3D בשימוש.
  2. לטעון את הסיב משלב 3 על גבי כל מדפסת FDM סטנדרטי, מצוידים עם חרירי סטנדרטי לקוטר הרצוי (בדרך כלל 0.4 מ מ). מתחילים את הקטנות (בדרך כלל 65-70 ° C ו-300 מ מ/דקה מהירות קווית) נימה אישית הוא הפקיד--שכבה על ע י המכונה.
  3. ודא להקדיש תשומת לב מיוחדת השכבה הראשונה ולהתאים הגדרות לפי הצורך כדי לקבל הדפסה באיכות טובה.
    הערה: ניתן לבצע התאמות מהירות הדפסה, הדפסה טמפרטורה, פלטפורמה טמפרטורה, מכפיל ההבלטה של פרמטרים אחרים. עיין המדפסת ומדריך לפתרון בעיות עם פרוסות של היצרן לקבלת סיוע נוסף.

5. בקרת איכות הערכה

  1. למקם את המבנה מודפס ב- SEM חריטה, להתיז בחוטי זהב-פלדיום באווירה ארגון באמצעות עם coater לרעוד. להוציא לעובי 4 nm.
  2. להתבונן במיקרוסקופ באמצעות 10 kV האצת מתח ומרחק עבודה 10 מ מ לבדוק תכונות פני השטח עבור נוכחות או היעדרות של microspheres אם הוא ישים.

6. בדיקות פונקציונליות של המבנה מודפס

הערה: phosphatase אלקליין (ALP) יכול לשמש פונדקאית עבור מטריצה decellularized כדי לקבוע אם חלבונים שעברו אנקפסולציה הם פעילים ביולוגית לאחר תהליך הייצור נימה. ALP משמש כי זה מזרז תגובה מצע, p-nitrophenyl פוספט, כדי לשנות צבע צהוב תוצרי לוואי, p-nitrophenol, פוספט אורגניים, אבל רק אם ALP קונפורמציה פונקציונלי.

  1. להדפיס גיאומטריה (n = 3) יש לזה של מסה קצה לפחות 400 מ"ג עם חוט הלהט ננו-ספירה ALP (PLA-ALP/PCL) באמצעות פרמטרים ההדפסה זהה כמו פיגומים PLA-DM/PCL. גם להדפיס PCL-היחידה (PCL(-)) פיגומים של הגיאומטריה אותו כמו פיגומים PLA-ALP/PCL. להטביע אותם במאגר טריס-HCl 1 מ"ל, תקופת דגירה של 24 שעות ביממה-סיבוב 37 ° C ו 110 סל ד כדי לאפשר דיפוזיה אנזים.
  2. להוסיף 1 מ"ל של 1 מ"ג/מ"ל p-nitrophenyl פוספט, ניתרן hexahydrate, טריס-HCl. Incubate ב 37 מעלות צלזיוס, 110 סל ד עבור מתכוון 10 נוספים לקרוא את ספיגת supernatant-415 ננומטר.

תוצאות

לאחר ניפוי, microspheres צריך להופיע במדים, להשתחרר מן אגרגטים. תחת SEM, microspheres sieved ייתכן נקבוביות קטנות על פני השטח, אבל אחרת יהיה כדורית וחלק, כפי שמוצג באיור1. חוטים הבלטת כל צריך להיות של קוטר אחיד, חתך מעגלי. פילמנט המכיל microspheres (PLA-DM/PCL) יהיו מעט יותר מט תוך PCL בלב...

Discussion

שניהם decellularized מטריצות, פיגומים PCL מודפס 3D הוכחו באופן עצמאי כדי לאפשר הדבקה ותיקון התפשטות של תאים, אימות והשימוש osteochondral10,11,12. השימוש של מטריקס decellularized ב גישות הנדסת רקמות תיקון היה נושא של עניין הרבה הצלחה של האחרונים עברו2

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgements

הפרויקט מומן באופן חלקי על ידי מענק מ רפואת ילדים אורטופדיים החברה של צפון אמריקה (POSNA) ולהעניק מכוני הבריאות הלאומיים NIBIB R21EB025378-01 (מענק מחקר בביו-הנדסה גישוש).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Sieve machineHaver & Boecker TylerRo-Tap RX 29-E Pure
Sieve 90 umFisherbrand170328156No. 170
Sieve 53 umFisherbrand162513588No. 270
Sieve 106 umFisherbrand162018121No. 140
Sputter coaterLeican/a
Scanning Electron MicroscopeHitachi, USAn/a
Filabot EX2Filabot.comFB00061
Filabot SpoolerFilabot.comFB00073
CAPA 6506Perstorp24980-41-4
Phosphate buffered saline, PBSGibco10010023
6" FanComfort Zone, Amazonn/a
Ultrasonic Water BathCole ParmerSK-08895-13
DreamerFlashForgen/a
Drum MixerCustom maden/aSimilar piece of equipment: https://www.coleparmer.com/i/argos-technologies-flexiroll-digital-tube-roller-shaker-120-vac/0439744?PubID=UX&persist=true&ip=
no&gclid=CjwKCAjw-
dXaBRAEEiwAbwCi5khGDMz0
dTjsraEsBGfhMEH7ytx
LQWGUPNgUJYQ1p3vj_yxkYoI_
ixoC9GwQAvD_BwE
Micro BalanceMettler Toledo, Fisher Scientific01-913-851
Simplify3DSimplify3Dn/a
SolidWorksSolidWorksn/a
MicrospheresProduced in-house, see concurrently submitted JoVE submission
p-nitrophenyl phosphate, disodium salt, hexahydrateMillipore4876-5GM
Phosphatase, alkalineRoche Diagnostics GmbH10 713 023 001
Absorbance ReaderTecanSunrise
Tris-HCl BufferSigma-AldrichT6455-100ML
Heated shakerNew Brunswick ScientificExcella E24

References

  1. Hutchmaker, D., Teoh, S., Zein, I., Ng, K. W., Schantz, J. -. T., Leahy, J. C. Design and Fabrication of a 3D Scaffold for Tissue Engineering Bone. Synthetic Bioabsorbable Polymers and Implants. 15 (2), 845-847 (1988).
  2. Ghosh, P., Gruber, S. M. S., Lin, C. -. Y., Whitlock, P. Microspheres containing decellularized cartilage induce chondrogenesis and remain functional after incorporation within a poly(caprolactone) filament useful for fabricating a 3D scaffold. Biofabrication. , (2018).
  3. Partington, L., et al. Biochemical changes caused by decellularization may compromise mechanical integrity of tracheal scaffolds. Acta Biomaterialia. 9 (2), 5251-5261 (2013).
  4. Hutmacher, D. W. Scaffolds in tissue engineering bone and cartilage. Biomaterials. 21 (24), 2529-2543 (2000).
  5. Kang, H., Hollister, S. J., La Marca, F., Park, P., Lin, C. -. Y. Porous biodegradable lumbar interbody fusion cage design and fabrication using integrated global-local topology optimization with laser sintering. Journal of biomechanical engineering. 135 (10), 101013-101018 (2013).
  6. Kang, H., Lin, C. Y., Hollister, S. J. Topology optimization of three dimensional tissue engineering scaffold architectures for prescribed bulk modulus and diffusivity. Structural and Multidisciplinary Optimization. 42 (4), 633-644 (2010).
  7. Lin, C. -. Y., et al. Functional bone engineering using ex vivo. gene therapy and topology-optimized, biodegradable polymer composite scaffolds. Tissue Engineering. 11 (9-10), 1589-1598 (2005).
  8. Lin, C. -. Y., Hsiao, C. -. C., Chen, P. -. Q., Hollister, S. J. Interbody Fusion Cage Design Using Integrated Global Layout and Local Microstructure Topology Optimization. Spine. 29 (16), 1747-1754 (2004).
  9. Zopf, D., Hollister, S., Nelson, M., Ohye, R., Green, G. Bioresorbable Airway Splint Created with a Three-Dimensional Printer. New England Journal of Medicine. 368 (21), 2043-2045 (2013).
  10. Pati, F., Song, T. H., Rijal, G., Jang, J., Kim, S. W., Cho, D. W. Ornamenting 3D printed scaffolds with cell-laid extracellular matrix for bone tissue regeneration. Biomaterials. 37, 230-241 (2015).
  11. Zhang, W., et al. The effect of interface microstructure on interfacial shear strength for osteochondral scaffolds based on biomimetic design and 3D printing. Materials Science and Engineering C. 46, 10-15 (2015).
  12. Williams, J. M., et al. tissue engineering using polycaprolactone scaffolds fabricated via. selective laser sintering. Biomaterials. 26 (23), 4817-4827 (2005).
  13. Monibi, F. A., Cook, J. L. Tissue-Derived Extracellular Matrix Bioscaffolds: Emerging Applications in Cartilage and Meniscus Repair. Tissue Engineering Part B: Reviews. , (2017).
  14. Wiles, K., Fishman, J., Coppi, P., Birchall, M. The Host Immune Response to Tissue-Engineered Organs: Current Problems and Future Directions. Tissue Engineering Part B: Reviews. 22 (3), (2016).
  15. Sutherland, A. J., Detamore, M. S. Bioactive Microsphere-Based Scaffolds Containing Decellularized Cartilage. Macromolecular Bioscience. , (2015).
  16. Whitlock, P. W., Smith, T. L., Poehling, G. G., Shilt, J. S., Van Dyke, M. A naturally derived, cytocompatible, and architecturally optimized scaffold for tendon and ligament regeneration. Biomaterials. , (2007).
  17. Whitlock, P. W., et al. Effect of cyclic strain on tensile properties of a naturally derived, decellularized tendon scaffold seeded with allogeneic tenocytes and associated messenger RNA expression. Journal of surgical orthopaedic advances. 22 (3), 224-232 (2013).
  18. Whitlock, P. W., et al. A novel process for optimizing musculoskeletal allograft tissue to improve safety, ultrastructural properties, and cell infiltration. Journal of Bone and Joint Surgery - Series A. 94 (16), 1458-1467 (2012).
  19. Schultz, G. S., Davidson, J. M., Kirsner, R. S., Herman, I. M. Dynamic Reciprocity in the Wound Microenvironment. Wound Repair Regeneration. 19 (2), 134-148 (2012).
  20. Benders, K. E. M., van Weeren, P. R., Badylak, S. F., Saris, D. B. F., Dhert, W. J. A., Malda, J. Extracellular matrix scaffolds for cartilage and bone regeneration. Trends in Biotechnology. 31 (3), 169-176 (2013).
  21. Crapo, P., Gilbert, T., Badylak, S. An overview of tissue and whole organ decellularization processes. Biomaterials. 32 (12), 3233-3243 (2011).
  22. Guan, Y., et al. Porcine kidneys as a source of ECM scaffold for kidney regeneration. Materials Science and Engineering C. 56, 451-456 (2015).
  23. Dean, R. L. Kinetic studies with alkaline phosphatase in the presence and absence of inhibitors and divalent cations. Biochemistry and Molecular Biology Education. 30 (6), 401-407 (2002).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

143BiofabricationDecellularizedOsteochondral

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved