בדיקות הומותאימות של דם-יצירת קשר שתלים בלופ זרימה לולאה דגם מחקה זרימת הדם האנושית

Summary

פרוטוקול זה מתאר הערכת התאמה מקיפה של התקנים ליצירת קשר דם באמצעות שתלים נוירונימי לייזר. מודל לולאה של זרימה עם דם האדם טרי, heparinized מוחל כדי לחקות את זרימת הדם. לאחר הפרזיה, סמנים המטולוגיים שונים מנותח ומושווים לערכים שנרכשו ישירות לאחר איסוף הדם להערכת התקנים של המכשירים שנבדקו.

Abstract

השימוש הולך וגובר של מכשירים רפואיים (למשל, שתלי כלי דם, סטנטים, וקטטרים לב) למטרות זמניות או קבועות שנשארות במערכת הדם של הגוף דורש גישה אמינה ופרמטרית שתוצאתה הסיבוכים המטולוגיים האפשריים שנגרמו על ידי התקנים אלה (כלומר, הפעלה והשמדה של רכיבי דם). בדיקות מקיפות של השתלת מבחנה של שתלים ליצירת קשר דם היא הצעד הראשון לקראת הצלחה במימוש vivo. לכן, ניתוח מקיף על פי הארגון הבינלאומי לתקינה 10993-4 (ISO 10993-4) הוא הכרחי לפני היישום הקליני. לולאת הזרימה המוצגת מתארת מודל רגיש לניתוח הביצועים הסטטיים של סטנטים (במקרה זה, נוירונימי) וחשיפת תופעות לוואי. השימוש בדם האנושי הטרי ודגימת דם עדינה הם חיוניים כדי למנוע את ההפעלה של דם. הדם מכיל דרך אבובים heparinized המכיל את הדגימה באמצעות משאבה קנולות בקצב של 150 mL/min ב 37 ° צ' עבור 60 דקות. לפני ואחרי הפרזיה, סמנים המטולוגיים (כלומר, ספירת תאי הדם, המוגלובין, המטוקריט וסמני הפלסטלינה) המציינים את הפעלת הלוקוציטים (פולימלטיות ברורות [PMN]-elastase), טסיות (β-thromboglobulin [β-TG]), מערכת קרישת הדם (תוממבין-אנטיתרומבין III [תאת]), והמפל המשלים (SC5b -9) מנותח לסיכום, אנו מציגים מודל חיוני ואמין עבור בדיקות הומותאימות נרחבת של סטנטים והתקנים אחרים ליצירת קשר דם לפני היישום הקליני.

Introduction

ביישום vivo של שתלים וביואטילים, אשר אינטראקציה עם דם אנושי, דורש אינטנסיבי בדיקות טרום קלינית התמקדות בחקירת סמנים שונים של המערכת המוסטטית. הארגון הבינלאומי לתקינה 10993-4 (ISO 10993-4) מציין את העקרונות המרכזיים להערכת מכשירים ליצירת קשר דם (קרי, סטנטים ושתלי כלי הדם) ורואה בעיצוב ההתקן, בכלי העזר הקליני ובחומרים הדרושים¹.

דם אנושי הוא נוזל המכיל חלבונים ותאים שונים פלזמה, כולל לוקיציטים (כדוריות דם לבנות [WBCs]), אריתרופוציטים (כדוריות דם אדומות [RBCs]), וטסיות, אשר לבצע פונקציות מורכבות בגוף האדם². המגע הישיר של חומרים זרים עם דם יכול לגרום לתופעות לוואי, כגון הפעלה של מערכת החיסון או קרישת הדם, אשר יכול להוביל לדלקת או סיבוכים טרומבוטיים ובעיות חמורות לאחר השרשה^3,4,5. לפיכך, באימות מחוץ לגופית מציעה הזדמנות לפני השרשה כדי לזהות ולא לכלול סיבוכים המטולוגיים שעלולים להיגרם על ידי מגע הדם עם משטח זר⁶.

מודל לולאה של זרימה הציג הוקמה כדי להעריך את ההזרמת ההפרעות של סטנטים נוירוכלי והתקנים דומים על ידי החלת שיעור הזרימה של 150 mL/min ב אבובים (קוטר של 3.2 מ"מ) כדי לחקות את תנאי הזרימה מוחין ו קטרים העורק^2,7. מלבד הצורך האופטימלי במודל מתורבת, מקור הדם הוא גורם חשוב בהשגת תוצאות אמינות ולא שינה כאשר מנתחים את התאימות של ביומטריה⁸. את הדם שנאסף יש להשתמש מיד לאחר הדגימה כדי למנוע שינויים שנגרמו על ידי אחסון ממושך. באופן כללי, אוסף עדין של דם ללא קיפאון באמצעות מחט G 21 יש לבצע כדי למזער את ההפעלה של טסיות ו קרישה מדורגת במהלך ציור דם. יתרה מזאת, הקריטריונים להדרה של תורמים כוללים את אלה המעשנים, בהריון, נמצאים במצב בריאותי גרוע, או שלקחו גלולות למניעת הריון או משככי כאבים במהלך 14 הימים הקודמים.

מחקר זה מתאר מודל בלתי מתורבת עבור בדיקות המוחלות הנרחבות של שתלים סטנט בתנאי זרימה. כאשר השוואת בלתי מצופה של סטנטים מצופים בפירין-הפארין, תוצאות הבדיקות המקיפות הינן משקפות הומותאימות משופרת של סטנטים מצופים בפירין-הפארין⁹. לעומת זאת, סטנטים בלתי מצופים מגבירים את הפעלת הקרישה, כפי שניתן להדגים באמצעות גידול ב-thombin-אנטיתרומבין III (תאת) ריכוזים ואובדן מספרי טסיות דם בשל הדבקה של טסיות למשטח סטנט. באופן כללי, שילוב מודל התקן התקן זה כמבחן טרום קליני מומלץ לאתר תופעות לוואי על מערכת ההסטטית הנגרמת על ידי המכשיר.

Protocol

הליך דגימת הדם אושר על ידי ועדת האתיקה של הפקולטה לרפואה באוניברסיטת טואבנגן (קוד זיהוי פרוייקט: 270/2010BO1). כל הנושאים שסופקו כתובים, הסכמה מושכלת להכללה לפני השתתפות.

1. הכנת הפארין-Monovettes טעון

1. מערבבים את הפארין הבלתי מדוללת (5,000 IU/mL) עם נתרן כלוריד (הארה ב, 0.9%) פתרון ולהכין פתרון עם ריכוז כתוצאה של 15 IU/mL של הפארין.
2. הוסף 900 μL של פתרון הפארין מדולל לכל monovette ניטרלי (9 מ ל) כדי לקבל ריכוז הפארין הסופי של 1.5 IU/mL לאחר דגימת דם. הכינו שלושה monovettes לכל תורם בתוספת שלושה מילואים monovettes ואחסנו את monovettes ההפרין שנטען ב -4 ° c עד לדגימת דם.

2. דגימת דם

1. קחו את הmonovettes שנטענו מהמקרר 30 דקות לפני דגימת הדם.
2. איסוף מדגם דם של 27 מ"ל מכל תורם בריא (n = 5) באמצעות הפנקב לולאת הזרימה. רק להחיל חוסם עורקים חלקה כדי למנוע הפעלה מוקדמת של טסיות ואת המפל קרישת הדם.
3. לאסוף דגימות דם בשלושה monovettes המכיל 900 μL של פתרון הפארין (1.5 IU/mL) והבריכה כל שלושת monovettes במיכל פלסטיק אחד כדי להבטיח כי כל הרכיבים מופצים באופן שווה.
4. העבר ישירות דם heparinized לתוך שלושה monovettes שונים המכיל את EDTA (1.2 mL), ציטראט (1.4 mL), או תערובת של ציטראט, theפסקו, אדנוזין, ו dipyridamole (CTAD, 2.7 mL) כדי לאסוף ערכים בסיסיים. המשך בדגימות כמתואר בסעיפים 5-8.
   הערה: כדי להבטיח התנהגות קרישה שאינה מושפעת, התורמים צריכים להימנע מצריכת תרופות משפיעות (למשל, חומצה אצטילסליצילית, naproxen, ו carbenicillin) בתוך 14 הימים האחרונים, כמו גם גלולות למניעת הריון ועישון.

3. הכנת לולאת הזרימה

1. חותכים שלושה צינורות פוליוויניל כלוריד מצופה הפארין עם אורך של 75 ס מ וקוטר פנימי של 3.2 מ"מ. טען את הצינורות עם שתלים נוירונימי לייזר לחתוך עם או בלי הציפוי הפירין-הפארין. זכור להשאיר אמבטיה אחת. לא מתבטלת כפקד
2. מניחים קצה אחד של הצינור במאגר מלא 0.9% הנאל, לחבר את הצינורות לראש המשאבה, ולהכניס את הקצה השני לתוך גליל מדידה.
3. כוונן את ההגדרות של המשאבה הפריסטטית כדי להשיג קצב זרימה של 150 mL/min באמצעות טיימר בעת בדיקת רמת המילוי בצילינדר המדידה.

4. ביצועי בדיקות הומותאימות

1. השתמש במזרק 12 מ ל כדי למלא את הצינורות בדם. תן 6 מ ל זרימת הדם בצורה חלקה לתוך כל צינור המכיל מדגם או בקרה ללא טעינה.
2. טופס מעגל ולסגור את הצינורות בחוזקה באמצעות 0.5 ס מ אורך של צינורות חיבור סיליקון. מניחים את הצינורות באמבט מים של 37 ° c ומתחילים את הפרפיוז עבור 60 דקות.

5. ניתוח ספירת הדם השלמה

1. לשים 1.2 mL של דם לאחר הדגימה (בסיס) או אחרי זלוף לתוך monovette המכיל edta ובזהירות להפוך את הצינור 5x.
2. להכניס את הmonovette לתוך מנתח הדם ולבצע ניתוח ספירת דם עבור כל דוגמה. לאחר מכן, מודלת את הmonovettes על הקרח במשך 15-60 דקות אחרי ספירת הדם לניתוח נוסף, כמתואר בסעיף 7.

6. אוסף פלזמה ציטראט

1. מלאו את הmonovettes המכיל ציטראט עם 1.4 מ ל של דם (שצויר טרי או אחרי מחזור הדם) והיפוך בזהירות 5x.
2. צנטריפוגה את הצינורות עבור 18 דקות ב 1,800 x g בטמפרטורת החדר (RT). Aliquot 3 250 μL דוגמיות של שבר פלזמה לתוך 1.5 mL התגובה צינורות להקפיא את דגימות פלזמה בחנקן נוזלי. אחסן אותם ב-20 ° צ' עד לניתוח.

7. אוסף של פלזמה EDTA

1. מודלת את הmonovettes על הקרח במשך 15 עד 60 דקות אחרי מדידת ספירת הדם. לאחר מכן, צנטריפוגה את הצינורות במשך 20 דקות ב 2,500 x ו -4 ° c.
2. Aliquot 3 250 μL דוגמיות של שבר פלזמה לתוך 1.5 mL התגובה צינורות לאחר צנטריפוגה ולהקפיא את הצינורות בחנקן נוזלי. אחסן אותם ב-80 ° צ' עד לניתוח.

8. אוסף של פלזמה CTAD

1. ממלאים את הmonovettes המכיל את התערובת CTAD עם 2.7 mL של דם (מצויר טרי או אחרי דגירה) ובזהירות להפוך 5x. לאחר מכן, הmonovettes בקרח במשך 15-60 דקות. לאחר מכן, צנטריפוגה את הצינורות במשך 20 דקות ב 2,500 x ו -4 ° c.
2. העברה 700 μL של השבר פלזמה האמצעית לתוך צינור התגובה 1.5 mL וצנטריפוגה את צינורות התגובה מלא 20 דקות ב 2,500 x g ו 4 ° c.
3. Aliquot 2 100 μL דגימות של השבר האמצעי לתוך שפופרות תגובה של 1.5 mL לאחר צנטריפוגה ולהקפיא את הצינורות בחנקן נוזלי. אחסן אותם ב-20 ° צ' עד לניתוח.
   הערה: האוסף של פלזמה EDTA ופלזמה CTAD ניתן לבצע יחד משום שתנאי ההפעלה זהים.

9. מדידת האדם תאת מתוך פלזמה ציטראט

1. הפשרת הפלזמה הציטראט באמבט מים של 37 ° c.
2. השתמש בערכה הקשורה לאנזימים המקושרים באמצעות האנזים (אליסה) בהתאם להוראות היצרן. לשחזר את תקני פלזמה ושליטה ולדלל את הפתרון כביסה, אנטי אדם-תאת peroxidase (POD)-נוגדן מצובן, ואת פתרון כרומוגן. השאירו את כל הריאגנטים ואת לוחית microtiter ב-RT (15-25 ° c) עבור 30 דקות לפני תחילת הבדיקה.
3. Pipet 50 μL של מאגר לדוגמה לתוך כל טוב של צלחת microtiter ולהוסיף 50 μL של מאגר לדוגמה (ריק), תקן פלזמה, בקרת פלזמה, ומדגם פלזמה בלתי מדולל בכפילויות לצלחת הבאר. אטום את הצלחת ואת הדגירה ב 37 ° c עבור 15 דקות עם טלטול עדין. ואז, לשטוף את צלחת 3x עם 300 μL של הפתרון כביסה.
4. הוסף 100 μL של הנוגדן לאדם-מצוב. אטום את הצלחת ואת הדגירה ב 37 ° c עבור 15 דקות עם טלטול עדין. ואז, לשטוף את צלחת 3x עם 300 μL של הפתרון כביסה.
5. הוסף 100 μL של פתרון כרומוgen טרי מוכן לכל טוב. אטום את הצלחת ואת הדגירה ב RT עבור 30 דקות.
6. הסר את הסרט חותם ולהוסיף 100 μL של פתרון להפסיק כל טוב. קרא את הדחיסות האופטית (OD) עם פומטר ב-490-500 ננומטר. התאם את נתוני העקומה הסטנדרטיים כקו מגמה וחשב את ריכוז הדגימות.

10. מדידת PMN-אלסטסה מפלסמה ציטראט

1. הפשרת הפלזמה הציטראט באמבט מים ב-37 ° c.
2. השתמש במערכת הפולימורבית (PMN)-מערכת אליסה בהתאם להוראות היצרן: לשחזר את השליטה PMN-elastase ואת תקן PMN-elastase כדי להכין עיקול סטנדרטי באמצעות מאגר הדילול של הערכה.
3. דלל את פתרון הכביסה בהתאם לתיאור היצרן. להשאיר את כל הריאגנטים ואת לוחית microtiter ב-RT עבור 30 דקות לפני תחילת הבדיקה. דלל את דגימות הפלסמה הציטראט ל1:100 עם מאגר הדילול.
4. הוסף 100 μL של מאגר המדגם (ריק), PMN-elastase רגיל (15.6-1000 ng/mL), PMN-elastase שולטת (ריכוזים גבוהים ונמוכים), ודגימות פלזמה מדולל בכפילויות לצלחת הבאר. לאטום את הצלחת ואת הדגירה ב RT עבור 60 דקות עם טלטול עדין. לאחר מכן, לשטוף את הצלחת 4x עם 300 μL של הפתרון כביסה.
5. הוסף 150 μL של נוגדן מצובן האנזים כל טוב. לאטום את הצלחת ואת הדגירה ב RT עבור 60 דקות עם טלטול עדין. לאחר מכן, לשטוף את הצלחת 4x עם 300 μL של הפתרון כביסה.
6. להוסיף 200 μL של 3, 3 ', 5, 5 '-טטרמתיל בנזיל (TMB)-פתרון המצע לכל טוב. לאטום את הצלחת ואת הדגירה ב RT במשך 20 דקות בחושך. לאחר מכן, הסר את סרט החותם והוסף 50 μL של פתרון העצירה לכל באר.
7. קרא את ה-OD עם פומטר ב 450 ננומטר עם קריאה לעיון ב 630 nm. התאם את נתוני העקומה הסטנדרטיים כקו מגמה וחשב את ריכוז הדגימות.

11. מדידה של קומפלקס משלים מסוף (TCC) מ-EDTA פלזמה

1. הפשרת פלזמה EDTA באמבט מים ב 37 ° c, ולאחסן על הקרח לאחר הפשרה.
2. השתמש בערכה המשלים SC5b-9 אליסה על פי הוראות היצרן: לדלל את הפתרון כביסה כמתואר בפרוטוקול של היצרן. להשאיר את כל הריאגנטים ואת לוחית microtiter ב-RT עבור 30 דקות לפני תחילת הבדיקה. לדלל את דגימות פלזמה EDTA כדי 1:10 עם מאגר הדילול של הערכה.
3. הוסף 300 μL של פתרון כביסה לכל באר כדי לחלק מחדש את פני השטח ומייבשים לאחר 2 דקות. הוסף 100 μL של מאגר לדוגמה (ריק), SC5b-9 תקנים, SC5b-9 שולטת (ריכוזים גבוהים ונמוכים), ואת דגימות פלזמה מדולל בכפילויות לצלחת הבאר.
4. לאטום את הצלחת ואת הדגירה ב RT עבור 60 דקות. הבא, לשטוף את צלחת 5x עם 300 μL של הפתרון כביסה.
5. הוסף 50 μL של נוגדן מצובן האנזים כל טוב. אטום את הצלחת ואת הדגירה ב RT עבור 30 דקות. לאחר מכן, לשטוף את צלחת 5x עם 300 μL של הפתרון כביסה.
6. הוסף 100 μL של פתרון TMB-מצע לכל טוב. אטום את הצלחת ואת הדגירה ב RT עבור 15 דקות בחושך.
7. הסר את סרט החותם והוסף 100 μL של פתרון העצירה לכל באר. קרא את ה-OD עם פומטר בשעה 450 nm. התאם את נתוני העקומה הסטנדרטיים כקו מגמה וחשב את ריכוז הדגימות.

12. מדידה של β-thromboglobulin מ-CTAD פלזמה

1. הפשרת פלזמה CTAD באמבט מים ב-37 ° c.
2. השתמש בערכת ה-β-thromboglobulin (β-TG) בהתאם להוראות היצרן: לשחזר את השליטה β-TG ואת תקן הβ-TG ולדלל את פתרון הכביסה באמצעות H₂O מזוקקים. בנייה מקדימה את הנוגדן פוד באמצעות מאגר פוספט סיפק. להשאיר את כל הריאגנטים ואת לוחית microtiter ב-RT עבור 30 דקות לפני תחילת הבדיקה.
3. הכן את עקומת התקן ואת הפקד על פי הוראות היצרן עם מאגר פוספט סיפק. דלל את דגימות הפלסמה. של ה1:21
4. הוסף 200 μL של מאגר הפוספט (ריק), תקני β-TG, פקדי β-TG (ריכוזים גבוהים ונמוכים) ודגימות פלסמה מדולדלות בכפילויות לצלחת הבאר. חותם את הצלחת ואת הדגירה ב RT עבור 60 דקות. לאחר מכן, לשטוף את צלחת 5x עם 300 μL של הפתרון כביסה.
5. הוסף 200 μL של נוגדן מצובן האנזים כל טוב. חותם את הצלחת ואת הדגירה ב RT עבור 60 דקות. לאחר מכן, לשטוף את צלחת 5x עם 300 μL של הפתרון כביסה.
6. הוסף 200 μL של פתרון TMB-מצע לכל טוב. אטום את הצלחת ואת הדגירה ב RT עבור 5 דקות בחושך. הסר את הסרט חותם ולהפסיק את התגובה על ידי הוספת 50 μL של חומצה גופרתית 1 M (H₂SO₄) לכל טוב.
7. השאירו את הצלחת עבור 15-60 דקות, ואז לקרוא את ה-OD עם פומטר ב 450 ננומטר. התאם את נתוני העקומה הסטנדרטיים כקו מגמה וחשב את ריכוז הדגימות.

13. הכנה לדוגמא לסריקת מיקרוסקופ אלקטרוני

1. להסיר את השתל מהצינור באמצעות מלקחיים ולשטוף את השתל בקצרה על ידי טבילה אותו לתוך 0.9% הפתרון 3x.
2. חנות בתמיסה גלוטרלדהיד (2% גלוטאלדהיד בתמיסת מלח באגירה (PBS-מאגר ללא Ca^{2 +}/Mg^{2 +}]) לילה ב 4 ° c.
3. בשלב הבא, השתלת השתלים ב-PBS-מאגר עבור 10 דקות. הפחתת דגימות על ידי הדגירה של אתנול עם ריכוז גובר עבור 10 דקות כל אחד: 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 96%, ו 100%. אחסן את הדגימות היובשות ב-100% אתנול עד לניתוח נוסף.
4. לבצע ייבוש נקודה קריטית בהתאם להוראות המכשיר הייבוש או הספרות¹⁰ בדיוק לפני סריקת מיקרוסקופ אלקטרוני (SEM).

14. סריקת מיקרוסקופ אלקטרוני

1. חברו את השתלים יבשים למנשא מדגם למיקרוסקופ הסריקה והצמידו את הדגימות עם הזהב פלדיום.
2. הציגו את השתלים האלה. לתוך תא הדגימה צלם תמונות ב-100-, 500-, 1,000-ו-2,500-הגדלה של האזורים עם המשטח המייצג והדבקה בתא.

תוצאות

מסוכם בקצרה, דם שלם של האדם נאסף ב הרין טעונים monovettes אז במאגר ומשמש כדי להעריך את רמות הבסיסית של ספירת תאים, כמו גם סמני תאימות פלמטיות.

לאחר מכן, הצינורות המכילים את דגימות השתל נוירונימי היה מלא, והדם היה מוכן עבור 60 דקות ב 150 mL/min ו-37 ° צ' באמצעות משאבה פריסטלטית. שוב, מספר התא...

Discussion

הפרוטוקול המוצג מתאר שיטה מקיפה ואמינה לבדיקת תאימות בדיקות דם שתלים בהתאם ISO 10993-4 במודל זרימת הטיה החיקוי של זרימת הדם האנושית. מחקר זה מבוסס על בדיקות של שתלים נוירוכלי לייזר לחתוך, אבל ניתן לבצע עם מגוון רחב של דגימות. התוצאות מראות ששיטה זו מאפשרת ניתוח נרחב של פרמטרים שונים כגון ספירת ?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
aqua ad iniectabilia	Fresenius-Kabi, Bad-Homburg, Germany	1088813
beta-TG ELISA	Diagnostica Stago, Duesseldorf, Germany	00950
Centrifuge Rotana 460 R	Andreas Hettich, Tuttlingen, Germany	-
Citrat monovettes (1.4 mL)	Sarstedt, Nümbrecht, Germany	6,16,68,001
CTAD monovettes (2.7 mL)	BD Biosciences, Heidelberg, Germany	367562
EDTA monovettes (1.2 mL)	Sarstedt, Nümbrecht, Germany	6,16,62,001
Ethanol p.A. (1000 mL)	AppliChem, Darmstadt, Germany	1,31,08,61,611
Glutaraldehyde (25 % in water)	SERVA Electrophoresis, Heidelberg, Germany	23114.01
Heparin coating for tubes	Ension, Pittsburgh, USA	-
Heparin-Natrium (25.000 IE/ 5 mL)	LEO Pharma, Neu-Isenburg, Germany	PZN 15261203
Multiplate Reader Mithras LB 940	Berthold, Bad Wildbad, Germany	-
NaCl 0,9%	Fresenius-Kabi, Bad-Homburg, Germany	1312813
Neutral monovettes (9 mL)	Sarstedt, Nümbrecht, Germany	2,10,63,001
PBS buffer (w/o Ca2+/Mg2+)	Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany	70011044
Peristaltic pump ISM444B	Cole Parmer, Wertheim, Germany	3475
Pipette (100 µL)	Eppendorf, Wesseling-Berzdorf, Germany	3124000075
Pipette (1000 µL)	Eppendorf, Wesseling-Berzdorf, Germany	3123000063
Plastic container (100 mL)	Sarstedt, Nümbrecht, Germany	7,55,62,300
PMN-Elastase ELISA	Demeditec Diagnostics, Kiel Germany	DEH3311
Polyvinyl chloride tube	Saint-Gobain Performance Plastics Inc., Courbevoie France	-
Reaction Tubes (1.5 mL)	Eppendorf, Wesseling-Berzdorf, Germany	30123328
neurovascular laser-cut implants	Acandis GmbH, Pforzheim	01-0011x
SC5b-9 ELISA	TECOmedical, Buende, Germany	A029
Scanning electron microscope	Cambridge Instruments, Cambridge, UK	-
Sealing tape (96 well plate)	Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany	15036
Syringe 10/12 mL Norm-Ject	Henke-Sass-Wolf, Tuttlingen, Germany	10080010
TAT micro kit	Siemens Healthcare, Marburg, Germany	OWMG15
Waterbath Type 1083	Gesellschaft für Labortechnik, Burgwedel, Germany	-