הדמיית טומוגרפיה פליטת פוזיטרונים למדידת Vivo של תוכן מיאלין במודל עכברוש Lysolecithin של טרשת נפוצה

Summary

פרוטוקול זה יש את המטרה של ניטור שינויים vivo myelin (demyelination ו remyelination) על ידי טומוגרפיה פליטת פוזיטרונים (PET) הדמיה במודל של בעלי חיים של טרשת נפוצה.

Abstract

טרשת נפוצה (MS) היא מחלה נוירו-אינפלציה עם ניוון אקסונלי ונוירוני מתרחב ו demyelination במערכת העצבים המרכזית, המוביל תפקוד לקוי מוטורי, נכות נפשית, פגיעה קוגניטיבית במהלך התקדמות MS. טומוגרפיה של פליטת פוזיטרונים (PET) היא טכניקת הדמיה המסוגלת לכמת שינויים תאיים ומולקולריים של vivo.

מכשירי רדיו עם זיקה למיאלין שלם יכולים לשמש להדמיית vivo של שינויי תוכן מיאלין לאורך זמן. ניתן לזהות עלייה או ירידה בתוכן מיאלין, מה זה אומר טכניקת הדמיה זו יכולה לזהות demyelination ותהליכי remyelination של מערכת העצבים המרכזית. בפרוטוקול זה אנו מדגימים כיצד להשתמש בהדמיית PET כדי לזהות שינויים מיאלין במודל החולדה lysolecithin, שהוא מודל של נגע demyelination מוקד (המושרה על ידי הזרקה סטראוטקטית) (כלומר, מודל של מחלת טרשת נפוצה). ^{11 ,11} C-PIB PET הדמיה בוצעה בבסיס, ו 1 שבוע ו 4 שבועות לאחר הזרקה סטראוטקסית של lysolecithin 1% בסטריאטום הנכון (4 μL) ו כפיס המוח קורפוס (3 μL) של המוח אשרור, המאפשר כימות של demyelination המוקד (אתר הזרקה לאחר 1 שבוע) ואת תהליך remyelination (אתר הזרקה ב 4 שבועות).

הדמיית מיאלין PET הוא כלי מעניין לניטור שינויים vivo בתוכן מיאלין אשר יכול להיות שימושי לניטור התקדמות המחלה demyelinating ותגובה טיפולית.

Introduction

טרשת נפוצה (MS) היא מחלה נוירו-אינפלציה המשפיעה על מערכת העצבים המרכזית, המאופיינת בדלקת, דמילינקציה ואובדן אקסון¹. הפרוגנוזה של מחלה זו משתנה גם עם התקדמות בטיפול, והיא אחת הסיבות הנפוצות ביותר לגירעונות נוירולוגיים אצל צעירים¹. האבחנה של טרשת נפוצה מבוססת על הקריטריונים של ביטוי קליני והדמיה של נגעים אופייניים על ידי הדמיית תהודה מגנטית (MRI)^2,3.

טומוגרפיה פליטת פוזיטרונים (PET) יכול להיות כלי שימושי עבור ניטור vivo של התקדמות MS ואפקטים טיפוליים. תרכובת פיטסבורג B radiotracer (PIB) שכותרתו פחמן-11⁽¹¹C-PIB) נמצא בשימוש נרחב כדי לכמת לוחות עמילואיד β; עם זאת, בעשור האחרון, זה נחקר כדי לכמת תוכן myelin ולהראות demyelination דינמי remyelination^4,5,6.

עוקבי PET עמילואיד שונים⁽¹¹C-PIB, ¹⁸F-florbetaben,¹⁸F-florbetapir, ^{18 F-flutemetamol)}ניתן להשתמש כדי לכמת מיאלין ולספק מידע חשוב על התקדמות המחלה ותגובה טיפולית, המאפשר זיהוי של demyelination ותהליכי remyelination, ללא הפרעה של neuroinflammation, אשר יכול להתרחש עם תמונות תהודה מגנטית קונבנציונלית (MRI)⁷. עמילואיד PET הדמיה הראה ספיגת מעקב ירד בחולי טרשת נפוצה פעילים לעומת חולים שאינם פעילים אשר יכול להיות מוסבר על ידי נזק חומר לבן מוקדם בחולים הפעילים⁸. ספיגת מעקב עמילואיד התחתון היה קשור גם עם ירידה קוגניטיבית במחקר מעקב, מראה טכניקה זו להיות כלי רב ערך לחקר הפתופיזיולוגיה של המחלה ותוצאות קליניות⁹.

מודל החולדה lysolecithin (LPC) הוא מודל כימי המושרה של טרשת נפוצה, שבו רעלן מוזרק, LPC, גורם לתגובה גבוהה של מקרופאגים שתוצאתו דלקת מוגברת, וכתוצאה מכך, demyelination^10,11. demyelination הוא התהפך במהירות, בתוך כ 4 שבועות, מה שהופך את זה מודל טוב להערכת demyelination ותהליכי remyelination מכרסמים. מודל זה כבר הוערך באמצעות הדמיית PET, עם תוצאות טובות ומתאם עם מאמרים שלאחר המוות¹².

כאן אנו מציגים את הפרוטוקול להדמיית PET מיאלין עם ¹¹C-PIB במודל עכברוש lysolecithin, מראה טכניקת הדמיה זו להיות כלי שימושי למדידת vivo של תוכן מיאלין.

Protocol

כל ההליכים נערכו בהתאם להנחיות המועצה הלאומית לפיקוח על ניסויים בבעלי חיים (CONCEA, ברזיל) ואושרו על ידי ועדת האתיקה לחקר בעלי חיים של בית הספר לרפואה של אוניברסיטת סאו פאולו (CEUA-FMUSP, ברזיל - מספר פרוטוקול: 25/15).

הערה: בפרוטוקול זה, אנו מראים כיצד לגרום מודל עכברוש lysolecithin של טרשת נפוצה וכיצד לרכוש ולנתח את תמונות PET מיאלין.

1. הכנת פתרון ליסולציטין

1. לשקול lysolecithin (L-α-Lysophosphatidylcholine מחלמון ביצה) בקנה מידה אנליטי באמצעות צינור פלסטיק חרוט (1.5 מ"ל).
2. מוסיפים מלוחים סטריליים לצינור כדי להפוך 1% פתרון (למשל: לשקול 1 מ"ג של lysolecithin ולהמיס אותו עם 100 μL של מלוחים) ולהמיס את lysolecithin על ידי טלטול הצינור (רועד מצד לצד ולא מפנה מלמעלה למטה).
3. הכינו את הפתרון רגע לפני תחילת האינדוקציה של מודל בעלי החיים (אל תמלאו את הפתרון הסופי המוכן).

2. דגם עכברוש ליסולציטין - ניתוח סטראוטקסי

1. השתמש חולדות Wistar זכר במשקל בין 220 - 270 גרם. השתמש כפפות ומסכה במהלך כל ההליכים.
2. לגרום להרדמה עם 5% isoflurane מעורבב 100% O₂ (1 L / min) באמצעות תיבת אינדוקציה. בדוק אם החיה מורדמת על ידי התבוננות בהעדר תנועה (יש לראות רק נשימה).
3. מניחים את החיה במנגנון סטראוטקסי על כרית חימום. תקן את האף והאוזניים של החיה לציוד.
   הערה: פרטים על אופן ביצוע ניתוח סטריאוטאקסי ניתן למצוא במסד הנתונים של החינוך המדעי של JoVE. מדעי המוח. כירורגיה סטראוטקסית מכרסמים. יובה, קיימברידג', מסצ'וסטס, 2021.
   1. לפקח על ההרדמה במשך כל ההליך (כולל ניתוח ורכישת תמונה). כדי להתאים את ריכוז isoflurane, לבחון את קצב הנשימה של בעלי החיים. קצב נשימה מהיר דורש ריכוז גבוה יותר וקצב נשימה איטי דורש ריכוז הרדמה נמוך יותר.
4. להזריק את משכך כאבים (ketoprofen - 5 מ"ג / קילוגרם) תת עורית (לדלל את התרופה ל 1 מ"ל מלוחים, זה יעזור לחות את החיה).
5. שים קרם עיניים בעיניים של החיה כדי להגן מפני התייבשות.
6. השתמש בתמיסת כלורהקסידין של 0.5% כדי לנקות את אזור החתך.
7. להזריק 100 μL של לידוקאין הידרוכלוריד 2% תת עורית באזור החתך.
8. לגלח את אזור הגולגולת.
9. השתמש בכלים סטריליים עבור הליך זה.
10. באמצעות אזמל, לעשות חתך של כ 2 ס"מ בעור על הגולגולת.
11. חשוף את הגולגולת עם מלחצי בולדוג.
12. השתמש ספוגית כדי לנקות את אזור הגולגולת עם 1% מי חמצן.
13. לאתר ולסמן את bregma (אטלס מוח עכברוש סטראוטקסי יכול לעזור לזהות את Bregma).
14. מקם את מזרק המילטון (מזרקים נוירוס μL) ב bregma.
15. באמצעות bregma ו אטלס סטראוטקסי כהתייחסות, למקם את מזרק המילטון על הקואורדינטות הבאות: Antero-אחורי: -0.30 מ"מ, לרוחב מאוחר יותר: -3.0 מ"מ, וגחוני עד שהוא נוגע בעצם הגולגולת, ולסמן את הגולגולת ולשים לב כיוון הקואורדינטות על נייר.
16. תקדח את הגולגולת בקואורדינטת המסומנת. יש לדאוג עם דורה מאטר (פגיעה דורה מאטר יכול לגרום הרבה דימום).
17. מלא את מזרק המילטון עם 7 μL של תמיסת ליסולציטין (1% מלוחים). נפח גדול יותר יכול להיות ממוקם במזרק, אבל רק 7 μL יוזרקו (להוציא את הבועות מן המזרק כדי למדוד את עוצמת הקול כראוי).
18. מקם את מזרק המילטון בקואורדינטות הקודמות כדי להתחיל את הזרקת התרופה (סה"כ 7 μL לתוך 3 קואורדינטות סטראוטקטיות גחוני שונות). בהתחשב בקואורדינטות שצוינו קודם לכן, הורידו את מזרק המילטון לקואורדינטות גחון -5.0 מ"מ.
19. לאט מאוד להזריק 2 μL של פתרון lysolecithin (1 μL / 10 דקות). חכה 3 דקות.
20. קח את המחט עד הקואורדינטת סטראוטקסית הגחונית הבאה ( -4.2 מ"מ) ולאט לאט להזריק 2μL של פתרון lysolecithin (1 μL / 10 דקות). חכה 3 דקות.
21. להזריק את הקואורדינטות הגחוני השלישי -3.0 מ"מ (3 μL של פתרון lysolecithin - 1 μL / 10 דקות).
22. חכה 5 דקות ולאחר מכן להסיר את מזרק המילטון מהמוח.
23. לתפור את העור.
24. מוציאים את החיה מהמנגנון הסטראוטקטי ומאפשרים לבעל החיים להתעורר.
25. להחזיר את החיה לכלוב הבית, לשמור על החיה לבד תחת פיקוח כדי לבדוק סימנים של אי נוחות.
26. להזריק משכך כאבים תת עורי (ketoprofen - 5 מ"ג / קילוגרם) מדולל מלוחים, ב 24 שעות ו 48 שעות לאחר הניתוח.

3. רכישת PET

1. קח 7 עד 20 MBq של ¹¹רדיואקטיביות C-PIB במזרק (1 מ"ל הוא הנפח המרבי המותר להזרקה תוך ורידי בחולדות).
2. יש למרדים את החיה עם 5% isoflurane מעורבב ב 100% O₂ (1 L / min) באמצעות תיבת האינדוקציה.
3. הזרק ¹¹C-PIB (רדיואקטיביות מוגדרת בפריט 4.1 לעיל) לתוך וריד הפין, או וריד הזנב של החולדה (שני אתרי הממשל הם בסדר, ההחלטה היא בחירה אישית. אנו רק מייעצים לא להשתמש בהזרקת רטרו-מסלולית מכיוון שהמיקום קרוב מדי לאזור העניין (המוח) ויכול לפגוע באיכות התמונה.
   הערה: רכישת תמונה של נקודת זמן בסיסית מבוצעת לפני הזרקה סטראוטקסית ואת 2 נקודות הזמן האחרות ב 1 שבוע ו 4 שבועות לאחר הניתוח.
4. מוציאים את החיה מהרדמה כדי לאפשר לבעל החיים להתעורר (משאירים את החיה על כרית חמה עד שהיא ערה לחלוטין).
5. תחזיר את החיה לכלוב הביתי.
6. חכה 30 דקות לשלב הבא.
7. הרדמת החולדות עם 5% isoflurane מעורבב 100% O₂ (1 L / min) באמצעות תיבת אינדוקציה.
8. פתח תוכנת סורק PET.
9. בחרו 'סריקה' > 'חיית מחמד מוכנה'.
10. פרטי החוקר הראשי המלאים, מזהה מחקר, מזהה סדרה, מזהה בעלי חיים, משקל בעלי חיים (g) והערות נוספות. בחר הבא.
    הערה: השתמש בנקודה (.) למספר עשרוני במשקל החיה.
11. ערוך אזור החזר על ההשקעה לסריקה (בדרך כלל בין 3 ל- 8). זהו האזור שייכלל בתמונה (אזורים בין המספרים 3 ו -8 של כיסוי המיטה יופיעו בתמונה הסופית).
12. מקם את החולדה המרדים על מיטת עכברוש סטנדרטית של סורק PET והפעל את ההרדמה (3% isoflurane ב 100% O 2 היא_התחלה טובה, ולאחר מכן שיעור ההרדמה צריך להיות מותאם לפי הצורך). כדי להתאים את ההרדמה, בדוק את נתוני הניטור של תוכנת הסורק כדי לוודא שהחיה נושמת בקצב קבוע ואיטי.
    הערה: הפעל את משאבת הוואקום יחד עם מסנן הפחמן הפעיל כדי לאסוף עודף גז isoflurane (אם המשאבה זמינה).
13. יש למרוח קרם עיניים כדי להגן על עיני החיה.
14. לדחוף את מיטת החיה בתוך סורק PET.
15. פרטי פעילות מלאים, זמן כיול פעילות, איזוטופ (C-11) ומשך סריקה (20 דקות). בחר התחל סריקה.
    הערה: תופיע הודעת מיטה נעה לחיות מחמד, ומיטת החיה תעבור לציוד ותעצור בתנוחת ההחזר על ההשקעה שנבחרה קודם לכן. זמן הרכישה יתחיל לספור לאחור ומספר הספירות בשניות יופיע (CPS).
16. בתוכנת הסורק, נווט אל הכרטיסיה צג מימין למסך, סמן את שינוי סף לפרמטרים נשימתיים משתנה (BPM).
    הערה: חלון יתפוצץ, עם פרמטר סף (500). בחר אישור.
17. נווט ל- 0% POWER כדי לשנות פרמטרי טמפרטורה כדי לחמם את החיה במהלך הסריקה. חלון צוץ; להשלים את הפרמטר (80 - 100). בחר אישור.
    הערה: בחר בין 80 ל 100% כוח בהתבסס על תנאי טמפרטורת החדר (יותר כוח, חם יותר זה יקבל).
18. נווט חזרה לכרטיסיה סריקה.
19. נווט אל כלי קביעת התצורה (סמל גלגל השיניים) וזמן ההזרקה המלא, הפעילות הנותרת, זמן כיול הפעילות הנותרת. בחר שמור.
    הערה: חלון יופיע "האם אתה בטוח שברצונך לשנות את המטה-נתונים של הפרוטוקול?" > כן
20. נווט חזרה לכרטיסיה צג (בדוק את הפרמטרים הנשימתיים של החיה, ובמידת הצורך, להגדיל או להקטין את ריכוז isoflurane - בדרך כלל 3% ב 100% O₂ מספיק).
21. לאחר השלמת רכישת PET, הודעת Pet Ready תופיע בכרטיסיה סריקה, סמן את סמל חץ החוצה (משמאל לכלי קביעת התצורה) כדי לצאת ממיטת החיה.
22. מוציאים את החיה מהרדמה ומאפשרים להתעורר על כרית חמה.
23. לבנייה מחדש של התמונה, נווט לכרטיסיה 'בנייה מחדש'.
24. בדוק את סמל הפלוס בפינה השמאלית התחתונה של המסך ובחר את קובץ הלימוד אשר ישוחזר. בחר הבא.
25. נווט אל הכלי רזולוציית אנרגיה. חלון יתפוצץ. קבע את שיא האנרגיה (keV) לפרמטר הציוד (בהתבסס על בקרת איכות חודשית). בחר סגור.
    הערה: שיא האנרגיה יכול להשתנות מדי חודש בעת ביצוע כיול ציוד חודשי.
26. שמור את כל הפרמטרים האחרים כברירת המחדל (גודל voxel איזומטרי: 400 מ"מ; מספר איטרציות: 30; רזולוציית אנרגיה: 30%; שמור איטרציה אחרונה בלבד; בטל את הסימון של שמור נתונים בינאריים) .
27. בדוק את הוסף.
    הערה: חלון יתפוצץ "השחזור נוסף לתור ויתחיל לאחר שהאחרים יסיימו". בחר אישור. קובץ יופיע ברשימת השחזור בכרטיסיה בנייה מחדש והמצב יופיע כממתין או כ- % (התקדמות) או כגמור.

4. ניתוח תמונה

הערה: בצע ניתוח תמונה באמצעות תוכנה ייעודית לניתוח תמונות. בפרוטוקול הנוכחי ההדגמה משתמשת בתוכנה ספציפית, אך אם היא אינה זמינה, ניתן להשתמש באפשרויות אחרות.

1. פתח את PMOD > נתיך אותו.
2. נווט אל הכרטיסיה התאמה בחלק העליון של המסך.
3. פתח את תפריט טען קלט באמצע המסך ובחר קבצי זיהוי אוטומטי, בחר קובץ PET (DICOM, Interfile או NifTI), הוסף לבחירה, לחץ עם פעולות, כוון מחדש לכיוון רגיל, לחץ על טען וסגור.
4. ודא אם מין החיה נכון בתחתית המסך (RAT).
5. סמן את התיבה חתוך בפינה השמאלית התחתונה של המסך.
6. התאם את גודל התיבה הצהובה בתמונת PET כדי לקחת את המוח כולו.
7. לחץ על לחצן קשיח בצד ימין של המסך. בחלון האישור לחץ על כן.
8. לחץ על כלי המוח במרכז הימני של המסך כדי לפתוח אטלס הפניה. בחר עכברוש Px (W.Schiffer) - T2.
9. בחר התאם תוצאות מהכרטיסיה השמאלית העליונה (בחר בכרטיסיה שלב עיבוד).
10. לחץ על שכפול נתונים ^{(הכרטיסיה 4}בתפריט השמאלי העליון).
11. יישר את תמונת PET עם תבנית הפניה באמצעות כלי הסיבוב (סמל לבן במרכז תמונת PET). בדוק יישור עבור 3 מישורים אנטומיים.
12. שמור את קובץ הרישום המשותף (התפריט השמאלי של המסך).
13. בחר תבנית פלט (DICOMor NifTI), ספריה וקידומת קובץ. לחץ על שמור.
    הערה: אם פלט שנרשם במשותף נשמר כ- NifTi, פרטי תמונת הכותרת יאבדו.
14. לחץ על תפריט VOIs בתחתית המסך.
15. נווט אל תבנית > אטלס בתחתית המסך (מתחת לחלון VOIs).
16. בחר Px Rat(W.Schiffer) מהתפריט הנפתח.
    הערה: אם אתה צריך לנתח רק VOIs ספציפיים אתה יכול לבחור רק את אזורי המוח של עניין. אם אתה רוצה את כל אזורי המוח של אטלס המוח, אין צורך בפעולה.
17. לחץ על מיתאר בתחתית המסך.
    הערה: VOIs של אזורי מוח יופיעו בחלון VOIs.
18. צייר באופן ידני את ה- VOI באתר הנגע ובאזור חצי הכדור של המוח הנגדי⁽¹¹אזור ספיגה נמוכה C-PIB וחציית מוח מנוגדת, בהתאמה).
19. לחץ באזור של תמונת PET עם ¹¹C-PIB ספיגה נמוכה.
20. בחרו 'VOI חדש' > 'אישור'.
    הערה: יופיע גיליון אלקטרוני
21. ניווט לסמל SPHERE בחלק האמצעי של המסך (מימין לחלון VOIs)
    הערה: יופיע גיליון אלקטרוני.
22. בחר את שם VOI: נגע ובחר החל.
    הערה: כדור יופיע בתמונה הרשומה במשותף.
23. ליישר את הכדור באזור הנגע ולהתאים את VOI עבור כל המישורים האנטומיים.
24. לחץ על סגור (בחלק התחתון של הגיליון האלקטרוני).
25. בחר את הנגע VOI (מרשימת VOIs).
26. נווט אל סמל פעולות שיקוף VOI (בחלק הימני העליון של חלון VOIs) ובחר לשכפל ולשקף שמאלה /ימינה.
27. נווט אל חישוב סטטיסטיקת VOI שנבחרה בראש חלון רשימת VOIs. נווט אל בחר סמל סטטיסטיקה לחישוב כדי לבחור את נתוני הפלט (לצד השמאלי של סמל סטטיסטיקת VOI). בדרך כלל עבור בדיקת תוכן myelin סטטיסטיקה עבור קבוצה של VOIs, ממוצע, SD, מינימום, מקסימום).
    הערה: יופיע גיליון אלקטרוני. הגדרת ברירת המחדל יחידת נתונים היא kBq/cc. בחלק הימני של הגיליון האלקטרוני (סטטיסטיקת VOI) באפשרותך לבדוק את יחידת הנתונים כ- SUV (ערך ספיגה מתוקננת). אם השלמת את ניהול הרדיוטרייזר ואת פרטי רכישת התמונה כראוי בתוכנת הסורק, כפי שתואר קודם לכן, נתוני SUV יחושבו באופן אוטומטי על ידי תוכנת PMOD, אם לא, תוכל לערוך את הפרטים.
28. נווט אל העתק באמצעות תבנית מספר של אזור מערכת.
    הערה: ודא אם כל הסטטיסטיקות נבחרו להעתקה כפלט (בדוק את הסמל בחלק השמאלי של המסך). הנתונים שיועתקו תלויים באפשרות יחידת הנתונים שנבחרה.
29. הדבק את נתוני הפלט בפנקס רשימות או בגיליון אלקטרוני.
    הערה: טפל בהגדרות תוכנה עבור סימני נקודה ופסיק בין מספרים. זה יכול להיות שונה בין תצורות שפה.
30. שמור את הקובץ בשם ובפרטי המחקר.

תוצאות

איור 1 מציג ¹¹תמונות C-PIB PET עם שינויי מיאלין לאורך זמן. בסריקה הבסיסית, לא ניתן לראות הבדלים בתוכן מיאלין (כלומר, אין demyelination קיים). בתמונת נקודת הזמן של שבוע אחד, ניתן לראות את הנגע demyelinated המוקד (בחצי הכדור הימני) כפי שצוין על ידי החץ הלבן. התמונות מוצגות ב-3 המישורים האנטו?...

Discussion

היתרון הגדול ביותר של שימוש במודל lysolecithin ללמוד טרשת נפוצה הוא ציר הזמן המהיר עבור demyelination (כשבוע) ו remyelination (כ 4 שבועות) להתרחש¹⁴. מודל זה יכול גם להיות המושרה בעכברים¹⁵, עם זאת, אינדוקציה בחולדות הוא יתרון יותר עבור הדמיה PET vivo בשל הגודל הגדול יותר של מוח החולדה בה...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Analytical Balance	Marte	AUWZZOD	max: 220 g- min: 1 mg
Anestesia vaporizer	Nanitech	15800
Beta-cube	Molecubes
Bulldog clamp	Stoelting	5212043P
clorexidine	Rioquimica		0.5%/100 mL
Cotton swabs	johnson e johnson
Dose calibrator	Capintech
Drill	Kinzo powertools	352901	Model Q0M-DC3C
Eppendorf tube	Eppendorf	30125150	1.5 mL
Eye lubricant	ADVFARMA	30049099	vaseline 15 g (pharmaceutical purity)
Fine forceps	Stoelting	52102-38P
Gloves	Descarpack	212101	6.5 size
Heating pad	Softhear
Injection Syringe	Hamilton	80314	10µ, 32ga, model 701
Insuline syringe	BD	328328	1 mL insulin syringes with needle
Isoflurane	Cristália	410525	100 mL , concentration 1 mL/1 mL
Ketoprofen or other analgesic	Sanofi		100 mg/2 mL
lidocaine	Hipolabor	1.1343.0102.001-5	2%/20mL
L-α-Lysophosphatidylcholine from egg yolk	Sigma-aldrich	L-4129	25 mg - ≥99%, Type I, powder
Needle holder	Stoelting	5212290P
Oxygen	White Martins	7782-44-7	Compressed gas
PMOD software	PMOD technologies	Version 4.1	module fuse it
Rat anesthesia mask	KOPF	Model 906
Saline	Farmace	0543325/ 14-8	0.9% sodium chloride for injection, 10 mL
Scapel blades	Stoelting	52173-10
Scapel handles	Stoelting	52171P
Scissor	Stoelting	52136-50P
Semi-analytical Balance	Quimis	BK-3000	max:3,100 g; min:0.2 g
shaver	Mega profissional		AT200 model
Stereotactic Apparatus	KOPF	Nodel 900
Universal holder with needle support	KOPF	Model 1772-F1	Hamilton support for 5 and 10 µL