Multipl Sklerozun Lysolecithin Rat Modelinde Miyelin İçeriğinin In Vivo Ölçümü için Pozitron Emisyon Tomografi Görüntüleme

Özet

Bu protokol, multipl sklerozun bir hayvan modelinde pozitron emisyon tomografisi (PET) görüntüleme ile in vivo miyelin değişikliklerini (demiyelinasyon ve remiyelinasyon) izlemeyi amaçlamaktadır.

Özet

Multipl skleroz (MS), merkezi sinir sisteminde genişleyen aksonal ve nöronal dejenerasyon ve demyelinasyon ile MS ilerlemesi sırasında motor işlev bozukluklarına, psişik engellilik ve bilişsel bozulmaya yol açan nöroinflamatuar bir hastalıktır. Pozitron emisyon tomografisi (PET), in vivo hücresel ve moleküler değişiklikleri ölçebilen bir görüntüleme tekniğidir.

Miyelin sağlamlığına yakınlığa sahip radyotracers, zaman içinde miyelin içerik değişikliklerinin in vivo görüntülenmesi için kullanılabilir. Miyelin içeriğinde bir artış veya azalma tespit etmek mümkündür, bu görüntüleme tekniğinin merkezi sinir sisteminin demiyelinasyon ve remiyelinasyon süreçlerini tespit edebileceği anlamına gelir. Bu protokolde, fokal demiyelinasyon lezyonunun (stereotaktik enjeksiyonla indüklenen) (yani multipl skleroz hastalığının bir modeli) bir modeli olan lesolesitilin sıçan modelinde miyelin değişikliklerini tespit etmek için PET görüntülemenin nasıl kullanılacağını gösteriyoruz. ¹¹ C-PIB PET görüntüleme taban çizgisine ve sıçan beyninin sağ striatumunda (4 μL) ve korpus callosumunda (3 μL) %1 oranında stereotaksik enjeksiyondan 1 hafta ve 4 hafta sonra yapıldı ve fokal demiyelinasyon (1 hafta sonra enjeksiyon bölgesi) ve remiyelinasyon sürecinin (4 haftada enjeksiyon bölgesi) ölçülmesini sağladı.

Myelin PET görüntüleme, miyelin içeriğindeki in vivo değişiklikleri izlemek için ilginç bir araçtır ve bu da demiyelinasyon hastalığının ilerlemesini ve terapötik yanıtı izlemek için yararlı olabilir.

Giriş

Multipl skleroz (MS), merkezi sinir sistemini etkileyen, iltihaplanma, demyelinasyon ve aksonal kayıp¹ile karakterize nöroinflamatuar bir hastalıktır. Bu hastalığın prognozu, tedavideki gelişmelerle bile değişkendir ve gençlerde nörolojik açıkların en yaygın nedenlerinden biridir¹. MS tanısı manyetik rezonans görüntüleme (MRG) ile karakteristik lezyonların klinik bulguları ve görselleştirilmesi kriterlerine dayanmaktadır^2,3.

Pozitron emisyon tomografisi (PET), MS ilerlemesinin ve terapötik etkilerin in vivo izlenmesi için yararlı bir araç olabilir. Karbon-11 (11C-PIB) ile etiketlenmiş Pittsburgh bileşik B radyotracer (PIB), β-amiloid plaklarını ölçmek için yaygın olarak kullanılır; ancak, son on yılda, miyelin içeriğini ölçmek ve dinamik demiyelinasyon ve remiyelinasyon göstermek için çalışılmıştır^4,5,6.

Farklı amiloid PET izleyiciler (¹¹C-PIB, ¹⁸F-florbetaben,¹⁸F-florbetapir, ¹⁸F-flütemetamol) miyelin ölçmek ve hastalık ilerlemesi ve terapötik yanıt hakkında önemli bilgiler sağlamak için kullanılabilir, demiyelinasyon ve remiyelinasyon süreçlerinin tanımlanmasına izin verir, nöroinflamasyonun müdahalesi olmadan, geleneksel manyetik rezonans görüntüleri (MRG)⁷ile ortaya çıkabilir. Amiloid PET görüntüleme, aktif hastalarda erken beyaz madde hasarı ile açıklanabilen aktif olmayan hastalara kıyasla aktif MS hastalarında izleyici alımında azalma olduğunu göstermiştir^8. Alt amiloid izleyici alımı, bir takip çalışmasında bilişsel düşüşle de ilişkilendirildi ve bu tekniğin hastalığın patofizyolojisini ve klinik sonuçlarını incelemek için değerli bir araç olduğunu gösterdi⁹.

Lysolecithin (LPC) sıçan modeli, enjekte edilen toksin LPC'nin, iltihaplanmanın artmasına ve sonuç olarak demyelinasyon^10,11ile sonuçlanan makrofajların yüksek bir tepkisine neden olduğu multipl sklerozun kimyasal kaynaklı bir modelidir. Demyelinasyon, yaklaşık 4 hafta içinde hızla tersine çevrilir, bu da bunu kemirgenlerdeki demyelinasyon ve remyelinasyon süreçlerini değerlendirmek için iyi bir model haline getirir. Bu model zaten PET görüntüleme kullanılarak değerlendirildi, iyi sonuçlar ve ölüm sonrası denemelerle korelasyon¹².

Burada, lesolesithin sıçan modelinde ¹¹C-PIB ile miyelin PET görüntüleme protokolünü sunuyoruz ve bu görüntüleme tekniğinin miyelin içeriğinin in vivo ölçümü için yararlı bir araç olduğunu gösteriyoruz.

Protokol

Tüm prosedürler, Ulusal Hayvan Deneyleri Konseyi'nin (CONCEA, Brezilya) yönergelerine uygun olarak yürütüldü ve Sao Paulo Üniversitesi Tıp Fakültesi Hayvan Araştırmaları Etik Komitesi tarafından onaylandı (CEUA-FMUSP, Brezilya - protokol numarası: 25/15).

NOT: Bu protokolde, multipl sklerozun lysolecithin sıçan modelinin nasıl indüklendiğini ve miyelin PET görüntülerinin nasıl elde edilir ve analiz edilir.

1. Lysolecithin çözelti hazırlığı

1. Konik plastik bir tüp (1,5 mL) kullanarak analitik ölçekte lizolsitin (L-α-Yumurta sarısından L-α-Lizosfatidylcholine) tartın.
2. % 1 çözelti yapmak için tüpe steril salin ekleyin (örneğin: 1 mg lysolecithin tartın ve 100 μL salin ile çözün) ve tüpü sallayarak (bir yandan diğer yana sallayarak ve yukarıdan aşağıya dönmeyerek) lysolecithin'i çözün.
3. Hayvan modeli indüksiyonunu başlatmadan hemen önce çözeltiyi hazırlayın (nihai hazır çözeltiyi stoklayın).

2. Lysolecithin sıçan modeli - Stereotaksik cerrahi

1. 220 - 270 g ağırlığında erkek Wistar sıçanları kullanın. Tüm prosedürler sırasında eldiven ve maske kullanın.
2. İndüksiyon kutusu kullanarak %100 O₂ 'de (1 L/dk) karıştırılan %5 izofluran ile anesteziye neden olur. Hareket yokluğunu gözlemleyerek hayvanın uyuşturulup uyuşturulmamış olup olmadığını kontrol edin (sadece solunum gözlenmelidir).
3. Hayvanı bir ısıtma yastığına stereotaksik aparatlara yerleştirin. Hayvanın burnunu ve kulaklarını ekipmana sabitle.
   NOT: Stereotaksik cerrahinin nasıl yapılacağının ayrıntıları JoVE Science Education Database'de bulunabilir. Sinirbilim. Kemirgen Stereotaksik Cerrahisi. JoVE, Cambridge, MA, 2021.
   1. Anesteziyi tüm prosedür için izleyin (ameliyat ve görüntü alımı dahil). İzofluran konsantrasyonu ayarlamak için hayvan solunum hızını gözlemleyin. Hızlı nefes alma hızı daha yüksek konsantrasyon gerektirir ve yavaş nefes alma hızı daha düşük anestezik konsantrasyon gerektirir.
4. Analjezik (ketoprofen - 5 mg / kg) deri altından enjekte edin (ilacı salin içinde 1 mL'ye seyreltin, bu hayvanı nemlendirmeye yardımcı olacaktır).
5. Dehidrasyondan korunmak için hayvanın gözlerine göz kremi koyun.
6. Kesi alanını temizlemek için% 0,5 klorheksidin çözeltisi kullanın.
7. Kesi bölgesinde 100 μL lidokrin hidroklorür% 2 deri altından enjekte edin.
8. Kafatası bölgesini tıraş et.
9. Bu işlem için steril aletler kullanın.
10. Neşter kullanarak, kafatası üzerinde deride yaklaşık 2 cm'lik bir kesi yapın.
11. Kafatasını Bulldog kıskaçlarıyla ortaya çıkar.
12. Kafatası bölgesini% 1 hidrojen peroksidaz ile temizlemek için bir çubuk kullanın.
13. Bregma'yı bulun ve işaretleyin (stereotaksik sıçan beyin atlası Bregma'nın kimliğinin tespit edilmesine yardımcı olabilir).
14. Hamilton şırıngını (μL nöros şırıng) bregma'ya yerleştirin.
15. Bregma ve stereotaksik atlası referans olarak kullanarak Hamilton şırıngını aşağıdaki koordinatlara yerleştirin: Antero-posterior: -0.30 mm, latero-lateral: -3.0 mm ve kafatası kemiğine dokunana kadar ventral, kafatasını işaretleyin ve koordinatların yönünü kağıda not edin.
16. Kafatasını işaretli koordinatta del. Dura mater'e dikkat et (dura mater'e zarar vermek çok fazla kanamaya neden olabilir).
17. Hamilton şırındını 7 μL lysolecithin çözeltisi (%1 salin) ile doldurun. Şırıng içine daha büyük bir hacim yerleştirilecektir, ancak sadece 7 μL enjekte edilecektir (hacmi doğru ölçmek için kabarcıkları şırınnadan alın).
18. Hamilton şırıngını ilaç enjeksiyonunu başlatmak için önceki koordinatlara yerleştirin (3 farklı ventral stereotaktik koordinata toplam 7 μL). Daha önce belirtilen koordinatları göz önünde bulundurarak, Hamilton şırındıcını ventral koordinat -5.0 mm'ye düşürün.
19. Çok yavaşça 2 μL lysolecithin çözeltisi (1 μL / 10 dk) enjekte edin. 3 dakika bekleyin.
20. İğneyi bir sonraki ventral stereotaksik koordinata (-4,2 mm) alın ve yavaşça 2μL lysolecithin çözeltisi (1 μL / 10 dk) enjekte edin. 3 dakika bekleyin.
21. Üçüncü ventral koordinatı -3,0 mm (3 μL lysolecithin çözeltisi - 1 μL / 10 dk) enjekte edin.
22. 5 dakika bekleyin ve hamilton şırındıcını beyinden çıkarın.
23. Cildi dikin.
24. Hayvanı stereotaktik aparattan çıkarın ve hayvanın uyanmasına izin verin.
25. Hayvanı ev kafesine geri koyun, rahatsızlık belirtilerini kontrol etmek için hayvanı yalnız ve gözetim altında tutun.
26. Ameliyattan sonra 24 saat ve 48 saat salin seyreltilmiş deri altı analjezik (ketoprofen - 5 mg / kg) enjekte edin.

3. PET satın alma

1. Bir şırında 7 ila 20 MBq ¹¹C-PIB radyoaktivite alın (1 mL sıçanlarda intravenöz enjeksiyon için izin verilen maksimum hacimdir).
2. İndüksiyon kutusunu kullanarak% 100 O 2 'de (1 L / dk) karıştırılan%₅ izofluran ile hayvanı uyuşturun.
3. Penis damarına veya sıçanın kuyruk damarına ¹¹C-PIB (yukarıdaki madde 4.1'de tanımlanan radyoaktivite) enjekte edin (her iki yönetim bölgesi de iyidir, karar kişisel bir seçimdir). Sadece retro-orbital enjeksiyon kullanmamanızı tavsiye ediyoruz, çünkü konum ilgi alanına (beyin) çok yakın ve görüntü kalitesini bozabilir.
   NOT: Stereotaksik enjeksiyondan önce taban çizgisi zaman noktasının görüntü alımı, diğer 2 zaman noktası ise ameliyattan 1 hafta 4 hafta sonra gerçekleştirilir.
4. Hayvanın uyanmasını sağlamak için hayvanı anesteziden çıkarın (hayvanı tamamen uyanana kadar ılık bir ped üzerinde bırakın).
5. Hayvanı ev kafesine geri verin.
6. Bir sonraki adım için 30 dakika bekleyin.
7. Bir indüksiyon kutusu kullanarak% 100 O 2 'de (1 L / dk) karıştırılan%₅ izofluran ile sıçanları uyuşturun.
8. PET tarayıcı yazılımını açın.
9. Tarama > Evcil Hayvan Hazır 'ıseçin.
10. Tam baş araştırmacı ayrıntıları, Çalışma Kimliği, Seri Kimliği, Hayvan Kimliği, Hayvan ağırlığı (g) ve Ek notlar. İleri 'yiseçin.
    NOT: Hayvan ağırlığındaki ondalık sayı için nokta (.) kullanın.
11. Yatırım getirisi alanını tarama için düzenleyin (genellikle 3 ile 8 arasında). Bu, görüntüye dahil edilecek alandır (yatak örtüsünün 3 ve 8 numaraları arasındaki alanlar son görüntüde görünecektir).
12. Anestezi yapılan sıçanı PET tarayıcısının standart bir sıçan yatağına yerleştirin ve anesteziyi açın (%100 O_2'de % 3 izofluran iyi bir başlangıçtır ve daha sonra anestezi oranı gerektiği gibi ayarlanmalıdır). Anesteziyi ayarlamak için, hayvanın sabit ve yavaş bir ritimde nefes aldığını doğrulamak için tarayıcı yazılımının izleme verilerini kontrol edin.
    NOT: Isoflurane gazı fazlalığını toplamak için (pompa varsa) aktif karbon filtresine bağlı vakum pompasını açın.
13. Hayvanın gözlerini korumak için göz kremi uygulayın.
14. Hayvan yatağını PET tarayıcının içine itin.
15. Tam Etkinlik ayrıntıları, Etkinlik Kalibrasyon Süresi, İzotop (C-11) ve Tarama süresi (20 dakika). Taramayı Başlat 'ıseçin.
    NOT: Evcil Hayvan Hareketli Yatak mesajı görünecek ve hayvan yatağı ekipmana taşınacak ve daha önce seçilen yatırım getirisi konumunda duracaktır. Edinme zamanı geri sayıma başlar ve saniye başına sayım sayısı (CPS) görünür.
16. Tarayıcı yazılımında, ekranın solundaki Monitör sekmesine gidin, Eşiği Solunum parametreleri değişikliğine (BPM) değiştir'i kontrol edin.
    NOT: Eşik parametresi (500) ile tamamlanan bir pencere açılır. Tamam 'ıseçin.
17. Tarama sırasında hayvanı ısıtmak için sıcaklık parametrelerini değiştirmek için % 0 GÜÇ'e gidin. Bir pencere açılır; parametreyi tamamlayın (80 - 100). Tamam 'ıseçin.
    NOT: Oda sıcaklığı koşullarına göre %80 ila %100 güç seçin (ne kadar fazla güç, o kadar ısınır).
18. SCAN sekmesine geri dönün.
19. Yapılandırma aracına (dişli simgesi) gidin ve Enjeksiyon Süresi, Kalan Etkinlik, Kalan Etkinlik Kalibrasyon Süresi 'nitamamlayın. Kaydet 'iseçin.
    NOT: "Protokol meta verilerini değiştirmek istediğinizden emin misiniz?" > EVET
20. Monitör sekmesine geri dönün (hayvanın solunum parametrelerini kontrol edin ve gerekirse izofluran konsantrasyonu artırın veya azaltın - genellikle% 100 O_{2'de% 3} yeterlidir).
21. PET alımı tamamlandığında, Pet Ready mesajı Tarama sekmesinde görünecektir, hayvan yatağını taşımak için Ok Dışarı Simgesi'ni (yapılandırma aracının solunda) işaretleyin.
22. Hayvanı anesteziden çıkarın ve ılık bir ped üzerinde uyanmaya bırakın.
23. Görüntüyü yeniden oluşturmak için Yeniden Yapılandır sekmesine gidin.
24. Ekranın sol alt kısmındaki artı simgesini kontrol edin ve yeniden inşa edilecek çalışma dosyasını seçin. İleri 'yiseçin.
25. Enerji Çözünürlüğü aracına gidin. Bir pencere açılacak. Enerji zirvesini (keV) ekipman parametresine göre yapılandırın (aylık kalite kontrolüne göre). Kapat 'ıseçin.
    NOT: Aylık ekipman kalibrasyonu yapılırken enerji zirvesi her ay değişebilir.
26. Diğer tüm parametreleri varsayılan olarak saklayın (İzometrik voksel boyutu: 400 mm; yineleme sayısı: 30; Enerji çözünürlüğü: %30; Yalnızca son yinelemeyi kaydet; ikili verileri koru) seçeneğinin işaretini kaldırın.
27. Ekle 'yi denetleyin.
    NOT: "Yeniden yapılandırma kuyruğa eklendi ve diğerleri bittikten sonra başlayacak" penceresi açılır. Tamam 'ıseçin. Yeniden yapılandırma sekmesindeki yeniden yapılandırma listesinde bir dosya görüntülenir ve durum bekleme veya % (ilerleme) veya tamamlandı olarak görünür.

4. Görüntü Analizi

NOT: Özel görüntü analizi yazılımı kullanarak görüntü analizi yapın. Geçerli protokolde gösterim belirli bir yazılım programı kullanır, ancak kullanılamıyorsa, başka seçenekler de kullanılabilir.

1. PMOD > Fuse it 'iaçın.
2. Ekranın üst kısmındaki Eşleşen sekmesine gidin.
3. Ekranın sağ ortasındaKi Yükleme Girişi menüsünü açın ve Dosyaları Otomatik Algıla'yı seçin, PET dosyasını (DICOM, Interfile veya NifTI) seçin, seçilene ekleyin, İşlemlerle tıklatın, Standart Yönlendirmeye Yeniden Yönlendir,Yükle ve Kapat'ı tıklatın.
4. Hayvan Türlerinin ekranın(RAT)altında doğru olup olmadığını doğrulayın.
5. Ekranın sağ alt kısmındaki Kırp kutusunu işaretleyin.
6. Tüm beyni almak için PET görüntüsündeki sarı kutu boyutunu ayarlayın.
7. Ekranın sağındaki Sert düğmeye tıklayın. Onay penceresinde Evet'i tıklatın.
8. Referans Atlası'nı açmak için ekranın sağ ortasındaki beyin aracına tıklayın. Px Rat (W.Schiffer) - T2'yi seçin.
9. Sağ üst sekmeden Sonuçları Eşleştir'i seçin (İşlem aşaması sekmesini seçin).
10. Veri yeniden dilimleme 'ye tıklayın (sağ üst menüdeki^4.sekme).
11. Döndürme aracını (PET görüntüsünün ortasındaki beyaz simge) kullanarak PET görüntüsünü referans şablonuyla hizalayın. 3 anatomik düzlem için hizalamayı kontrol edin.
12. Ortak kayıt dosyasını kaydedin (ekranın sağ yan menüsü).
13. Çıktı biçimi (DICOMor NifTI), dizin ve dosya önekini seçin. Kaydet 'itıklatın.
    NOT: Birlikte kaydedilen çıktı NifTi olarak kaydedilirse, üstbilgi görüntüsü bilgileri kaybolur.
14. Ekranın altındaki VOIs menüsünü tıklatın.
15. Ekranın altındaki Şablon > Atlas'a gidin (VOI penceresinin altında).
16. Açılan menüden Px Rat(W.Schiffer) öğesini seçin.
    NOT: Yalnızca belirli VOI'leri analiz etmeniz gerekiyorsa, yalnızca ilgi çekici beyin alanlarını seçebilirsiniz. Beyin atlasının tüm beyin bölgelerini istiyorsanız, harekete gerek yoktur.
17. Ekranın altındaki Anahat'ı tıklatın.
    NOT: Beyin bölgelerinin VOI'leri VOI penceresinde görünecektir.
18. VOI'yi lezyon bölgesinde ve kontralateyal beyin yarımküre bölgesinde (sırasıyla¹¹C-PIB düşük alım alanı ve kontralateteral beyin yarımküresi) manuel olarak çizin.
19. ¹¹C-PIB düşük alım ile PET görüntü alanına tıklayın.
20. Yeni VOI > Tamam 'ıseçin.
    NOT: Bir elektronik tablo görünecektir
21. Ekranın orta kısmındaki SPHERE simgesine gidin (VOI penceresinin solunda)
    NOT: Bir elektronik tablo görünecektir.
22. VOI adını seçin: lezyon ve Uygula 'yıseçin.
    NOT: Ortak kayıtlı görüntüde bir küre görünecektir.
23. Lezyon bölgesindeki küreyi hizalayın ve VOI'yi tüm anatomik düzlemler için ayarlayın.
24. Kapat'ı tıklatın (elektronik tablonun alt kısmında).
25. Lezyon VOI'yi seçin (VOI listesinden).
26. VOI yansıtma işlemleri simgesine gidin (VOI penceresinin sağ üst kısmında) ve Klonla'yı seçin ve sola/sağa yansıtın.
27. VOI listesi penceresinin en üstünde seçili VOI İstatistiklerini Hesapla'ya gidin. Çıktı verilerini seçmek için Hesaplanacak istatistikleri seç simgesine gidin (VOI istatistikleri simgesinin sağ tarafında). Genellikle miyelin içeriği için VOI grubu istatistiklerini kontrol edin, Ortalama, SD, Min, Max).
    NOT: Bir elektronik tablo görünecektir. Veri Birimi varsayılan ayarı kBq/cc'dir. Elektronik tablonun (VOI İstatistikleri) sol üst kısmında Veri Birimini SUV (Standartlaştırılmış Alım Değeri) olarak kontrol edebilirsiniz. Tarayıcı yazılımında radyotracer yönetimini ve görüntü alma ayrıntılarını doğru bir şekilde tamamladıysanız, daha önce açıklandığı gibi, SUV verileri PMOD yazılımı tarafından otomatik olarak hesaplanır, değilse, ayrıntıları düzenleyebilirsiniz.
28. Sistem yerel konumu numarası biçimini kullanarak kopyala 'yagidin.
    NOT: Çıktı olarak kopyalamak için tüm istatistiklerin seçili olup olmadığını doğrulayın (Ekranın sağ üst kısmındaki Kontrol simgesi). Kopyalanacak veriler seçilen Veri Birimi'ne bağlıdır.
29. Çıktı verilerini not defterine veya elektronik tabloya yapıştırın.
    NOT: Sayılar arasındaki nokta ve virgül sembolleri için yazılım ayarlarına dikkat edin. Bu, dil yapılandırmaları arasında farklı olabilir.
30. Dosyayı çalışma adı ve ayrıntılarıyla kaydedin.

Sonuçlar

Şekil 1' de zaman içinde miyelin değişiklikleri olan açıklayıcı ¹¹C-PIB PET görüntüsü gösterilmektedir. Taban çizgisi taramasında miyelin içeriğinde herhangi bir fark görülemez (yani demyelinasyon yoktur). 1 haftalık zaman noktası görüntüsünde, beyaz okla belirtildiği gibi fokal demiyelinlenmiş lezyonu (sağ yarımkürede) görmek mümkündür. Görüntüler 3 anatomik düzlemde (koronal, eksenel ve sagittal) sunulur ve hepsinde demiyelinlenmiş lezyonu ...

Tartışmalar

Multipl skleroz çalışması için lysolecithin modelini kullanmanın en büyük avantajı, demyelinasyon (yaklaşık 1 hafta) ve remyelinasyon (yaklaşık 4 hafta) için hızlı zaman çizelgesi¹⁴. Bu model farelerde de indüklenebilir¹⁵, ancak, sıçanlarda indüksiyon, fare beyninin farelere kıyasla daha büyük boyutu nedeniyle in vivo PET görüntüleme için daha avantajlıdır.

İndüksiyon modelinin ilk adımı son derece dikka...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Analytical Balance	Marte	AUWZZOD	max: 220 g- min: 1 mg
Anestesia vaporizer	Nanitech	15800
Beta-cube	Molecubes
Bulldog clamp	Stoelting	5212043P
clorexidine	Rioquimica		0.5%/100 mL
Cotton swabs	johnson e johnson
Dose calibrator	Capintech
Drill	Kinzo powertools	352901	Model Q0M-DC3C
Eppendorf tube	Eppendorf	30125150	1.5 mL
Eye lubricant	ADVFARMA	30049099	vaseline 15 g (pharmaceutical purity)
Fine forceps	Stoelting	52102-38P
Gloves	Descarpack	212101	6.5 size
Heating pad	Softhear
Injection Syringe	Hamilton	80314	10µ, 32ga, model 701
Insuline syringe	BD	328328	1 mL insulin syringes with needle
Isoflurane	Cristália	410525	100 mL , concentration 1 mL/1 mL
Ketoprofen or other analgesic	Sanofi		100 mg/2 mL
lidocaine	Hipolabor	1.1343.0102.001-5	2%/20mL
L-α-Lysophosphatidylcholine from egg yolk	Sigma-aldrich	L-4129	25 mg - ≥99%, Type I, powder
Needle holder	Stoelting	5212290P
Oxygen	White Martins	7782-44-7	Compressed gas
PMOD software	PMOD technologies	Version 4.1	module fuse it
Rat anesthesia mask	KOPF	Model 906
Saline	Farmace	0543325/ 14-8	0.9% sodium chloride for injection, 10 mL
Scapel blades	Stoelting	52173-10
Scapel handles	Stoelting	52171P
Scissor	Stoelting	52136-50P
Semi-analytical Balance	Quimis	BK-3000	max:3,100 g; min:0.2 g
shaver	Mega profissional		AT200 model
Stereotactic Apparatus	KOPF	Nodel 900
Universal holder with needle support	KOPF	Model 1772-F1	Hamilton support for 5 and 10 µL