JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

כאן, אנו מציגים צינור סטנדרטי להשגת גידולי ATC מורין על ידי מודלים עכבריים מהונדסים גנטית ספונטניים. יתר על כן, אנו מציגים דינמיקה של הגידול ומידע פתולוגי על הנגעים הראשוניים והגרורות. מודל זה יסייע לחוקרים להבין גידולים ולהקל על תגליות תרופות.

Abstract

סרטן בלוטת התריס אנפלסטי (ATC) הוא ממאירות נדירה אך קטלנית עם פרוגנוזה עגומה. יש צורך דחוף במחקר מעמיק יותר על הקרצינוגנזה ופיתוח של ATC, כמו גם שיטות טיפוליות, שכן טיפולים סטנדרטיים הם למעשה מדולדלים בחולי ATC. עם זאת, שכיחות נמוכה הקשתה על מחקרים קליניים יסודיים ואיסוף דגימות רקמות, ולכן הושגה התקדמות מועטה ביצירת טיפולים יעילים. השתמשנו בהנדסה גנטית כדי ליצור מודל ATC מורין מותנה (mATC) על רקע C57BL/6. מודל ATC murine עבר גנוטיפ על ידי TPO-cre/ERT2; BrafCA/wt; Trp53 ex2-10/ex2-10 ומושרה על ידי הזרקה intraperitoneal עם טמוקסיפן. בעזרת מודל מורין חקרנו את דינמיקת הגידול (גודל הגידול נע בין 12.4 מ"מ 2 ל-32.5 מ"מ2 לאחר 4 חודשים של זירוז), הישרדות (תקופת ההישרדות החציונית הייתה 130 יום), גרורות (גרורות ריאה התרחשו ב-91.6% מהעכברים), עקומות ומאפיינים פתולוגיים (המאופיינים בצביעה אימונוהיסטוכימית של Cd8, Foxp3, F4/80, Cd206, Ki67 וקספאז-3). התוצאות הצביעו על כך של-mATC ספונטני יש דינמיקה של גידולים דומים מאוד ומיקרו-סביבה אימונולוגית לגידולי ATC אנושיים. לסיכום, עם דמיון רב בתכונות פתופיזיולוגיות וגנוטיפים מאוחדים, מודל mATC פתר במידה מסוימת את המחסור ברקמת ATC קלינית ובהטרוגניות דגימה. לכן, זה יקל על המנגנון ומחקרים תרגומיים של ATC ולספק גישה לחקור את פוטנציאל הטיפול של תרופות מולקולריות קטנות וחומרים אימונותרפיה עבור ATC.

Introduction

סרטן בלוטת התריס הוא אחד הממאירויות האנדוקריניות הנפוצות ביותר1, שמקורו באפיתל בלוטת התריס. בשנים האחרונות, שכיחות סרטן בלוטת התריס עלתה במהירות ברחבי העולם2. ניתן לחלק את סרטן בלוטת התריס לסוגים שונים בהתאם למידת התמיינות תאי הגידול. על בסיס התנהגות קלינית והיסטולוגיה, קרצינומה של בלוטת התריס מחולקת לקרצינומה ממוינת היטב, כולל קרצינומה פפילרית של בלוטת התריס (PTC) וקרצינומה פוליקולרית של בלוטת התריס (FTC), קרצינומה ממוינת גרוע (PDTC), וקרצינומה לא ממוינת או אנפלסטית של בלוטת התריס (ATC)3. בניגוד ל-PTC, שהוא סוג נפוץ עם התנהגות קלה ופרוגנוזה טובה יותר4, ATC הוא ממאירות נדירה ואגרסיבית מאוד המהווה 2% עד 3% מכלל גידולי בלוטת התריס5. למרות ATC הוא נדיר, הוא אחראי על כ 50% של מקרי מוות הקשורים לסרטן בלוטת התריס, עם הישרדות עגומה (6-8 חודשים)6,7. מעל 50% ממקרי ATC מאובחנים כגרורות ריאה8. בנוסף לאופי האגרסיבי של ATC, פותח טיפול יעיל מוגבל במרפאה. לכן, לחולי ATC יש פרוגנוזה עגומה 9,10,11. זה מצביע על כך שיש צורך דחוף במחקרים מעמיקים נוספים על המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס הפיתוח של ATC וטיפול.

הגידול של ATC הוא תהליך דינמי dedifferentiated. הקושי באיסוף דגימות גידול אנושי בכל שלב במחקרים קליניים פגע בהבנת מנגנון ההתפתחות מקרצינומה ממוינת היטב לבלתי מובחנת. לעומת זאת, השימוש במודלים של מורין ATC (mATC) מעדיף את איסוף דגימות mATC בכל קורס הגידול. לכן, אנו יכולים להבין טוב יותר את מנגנוני היווצרות הגידול על ידי ניתוח התהליך הדינמי dedifferentiated. בנוסף, ההטרוגניות של דגימות ATC קליניות תרמה גם היא לקושי בהבנת המנגנון המולקולרי. עם זאת, עכברים חלקו את אותו רקע גנטי והוחזקו בסביבות חיים דומות, מה שהבטיח את עקביותו של כל גידול. זה מאפשר לחקור את התפקיד הכללי של פיתוח ATC12,13,14. בנוסף, mATC הוא מודל גידול באתרו שיכול לשחזר את ההשפעה של המיקום האנטומי והמיקרו-סביבה הספציפית לרקמה. ככזה, בהשוואה לעכברים מדוכאי חיסון נפוצים, mATC הוא מודל מורין ספונטני עם מערכת חיסון שלמה ומיקרו-סביבה חיסונית.

לכן, בנינו mATC מושרה מותנה עם זן C57BL/6, שהוא מודל מורין המסוגל לשחזר את התכונות הפתולוגיות של קרצינומה של בלוטת התריס dedifferentiated. בהתבסס על מודל זה, נתנו סקירה קצרה של הבסיס המולקולרי, רעיונות בנייה, תכונות פתולוגיות ויישומים של mATC. בנוסף, צפינו ודיווחנו על צמיחת גידולים, זמן הישרדות, גרורות ומאפיינים פתולוגיים של mATC. אנו מאמינים שזו תהיה סקירה אינפורמטיבית שתסייע לחוקרים אחרים להשתמש במודל זה ביתר קלות.

בנינו מודל mATC מושרה מותנה, כפי שדווח לראשונה על ידי McFadden15; בתחילה בנינו עכברים: TPO-cre/ERT2, Braf flox/wt ו-Trp53flox/wt. באופן ספציפי, עכברי TPO-cre/ERT2 כללו את מקדם הפרוקסידז האנושי של בלוטת התריס (TPO) (מקדם ספציפי לבלוטת התריס), המניע את הביטוי של גן היתוך cre-ERT2 (cre recombinase המאוחה לתחום קשירת ליגנד קולטן אסטרוגן אנושי). Cre-ERT2 מוגבל בדרך כלל לציטופלסמה ונכנס לגרעין רק כאשר הוא נחשף לטמוקסיפן, אשר גורם ל-CRE להפעיל פעילות אנזים רקומביננטי. כאשר מוצלבים את העכברים עם עכברים הנושאים רצפי loxP, לאחר השראת טמוקסיפן, רקומבינציה בתיווך cre מוחקת את הרצפים floxed בתאי בלוטת התריס כדי להשיג את המטרה של נוקאאוט או דפיקה של גנים ספציפיים.

בנוסף, עכברי Braf flox/wt הם אלל נוק-אין של Braf אנושי המבוסס על מערכת cre-loxP. תעתיק Brafflox/wt murine מקודד על ידי אקסונים אנדוגניים 1-14 ואקסונים אנושיים צמודים loxP 15-18. לאחר כריתה בתיווך cre-mediated של האזורים floxed, אקסון מוטנטי 15 (שונה עם תחליף חומצת אמינו V600E מקושר עם BrafV600E פעיל באופן מכונן בסרטן אנושי) ואת exons אנדוגניים 16-18 משמשים כדי ליצור את התמלילים. יתר על כן, עכברי Trp53 flox/wt הם אללי נוקאאוט של Trp53 אנושי ויש להם אתרי loxP הצמודים לאקסונים 2-10 של Trp53. כאשר חוצים אותו עם עכברים עם cre recombinase, רקומבינאז בתיווך cre מוחק את הרצף floxed כדי להסתיר את Trp53. לאחר מכן, עכברי TPO-cre/ERT2, Braf flox/w ו-Trp53flox/wt נחצו כדי לקבל שחפת (TPO-cre/ERT2; Brafflox/wt) עכברים ו-TBP (TPO-cre/ERT2; Brafflox/wt; Trp53flox/wt) עכברים, אשר יכול לשמש ליצירת PTC ו- ATC. לאחר כ-8 שבועות, העכברים הושרו על ידי מתן תוך-צפקי (כלומר ) של 150 מ"ג/ק"ג טמוקסיפן מומס בשמן תירס במשך שני נתינים. ניתן היה לעקוב אחר צמיחת הגידול על ידי אולטרה-סאונד בתדירות גבוהה (נקודת הזמן הראשונה של אולטרה-סאונד נרשמה כיום 0). אולטרה-סאונד ראשוני בוצע 40 יום לאחר הכנסת הטמוקסיפן.

Protocol

ההליכים בבעלי חיים המתוארים כאן בוצעו באישור ועדת האתיקה של בעלי חיים בבית החולים מערב סין, אוניברסיטת סצ'ואן, צ'נגדו, סצ'ואן, סין.

1. השראת עכברי TBP

  1. זיהוי גנוטיפ עכברים
    1. בסביבות 3 שבועות, להפריד את נקבות העכברים מן העכברים הזכרים. במקביל, השתמש במהדק תג אוזן כדי לתקן תג אוזן. הניחו את תגי האוזן בחצי התחתון ובשליש האמצעי של האוזן, והקפידו להימנע מהאזור עם ריכוז הנימים הגבוה ביותר.
    2. בעדינות אך בבטחה לרסן את העכברים. אחזו בחוזקה בבסיס זנב העכבר. הניחו את העכברים על משטח שיאפשר להם לאחוז בהם.
    3. הניחו בעדינות אך בחוזקה את היד החופשית על הכתפיים, ואז תפסו במהירות את קשקוש הצוואר בין האגודל לאצבע. החזיקו את הזנב עם האצבע הקטנה.
    4. ספוג את הזנב עם אלכוהול. השתמש מספריים סטריליים כדי לחתוך את דגימת העור <5 מ"מ ולשים אותו במיכל דגימה נקי עם תווית. אין צורך להסיר את הפרווה של העכברים. דחסו את הזנב עם ספוגים סטריליים כדי להשיג המוסטאזיס.
    5. לאחר מכן, ליז את זנב מורין ולבצע תגובת שרשרת פולימראז (PCR) כדי לזהות את הגנוטיפ.
      הערה: לאחר חיתוך זנב מורין אחד, יש לנגב את פני השטח של המספריים עם כותנה אלכוהולית כדי למנוע זיהום הדדי של גנים בין זנבות מורין. לאחר הכנסתם לכלוב, יש להשגיח על העכברים במשך 5 דקות כדי לחפש סימני דימום באתר הפצע. עיין בטבלה 1 לקבלת רשימת הפריימרים והגדרות ה-PCR שבהן נעשה שימוש במחקר זה.
  2. עכברי TBP הנגרמים מטמוקסיפן
    1. שוקלים 0.3 גרם טמוקסיפן וממיסים אותו ב 15 מ"ל של שמן תירס על ידי אולטרסאונד (כוח = 20%, משך = 20 דקות, טמפרטורה = 4 ° C), בריכוז של 20 מ"ג / מ"ל. יש לאחסן בטמפרטורה של 4°C.
      הערה: טמוקסיפן רגיש לאור ויש למקם אותו במיכל חום.
    2. בסביבות 8 שבועות, לשקול את העכברים עם מאזניים אלקטרוניים ולתת להם i.p. זריקה של טמוקסיפן במינון של 150 מ"ג / ק"ג, מנוהל פעמיים עם מרווח של שבוע.

2. דיסקציה והדמיה של גידולי בלוטת התריס בעכבר וגידולים גרורתיים

  1. הכנה
    1. מכינים את כלי הדיסקציה: מספריים ומלקחיים סטריליים, להב סטרילי, בקבוק ספריי 75% אלכוהול, ישר 20 ס"מ, קליפרים ורנייר, מגבות נייר וכותנה אלכוהולית.
    2. פתרון תיקון רקמות עכבר: להכין 4% paraformaldehyde תמיסת תיקון רקמות.
    3. נקו צלחת בקוטר 10 ס"מ מלאה בכ-10 מ"ל מלח חוצץ פוספט סטרילי (PBS) לאחסון זמני של רקמות, ושטפו את הדם על פני הרקמה.
  2. מיצוי בלוטת התריס
    1. הרדימו את העכברים עם פחמן דו חמצני בקצב זרימה של 2.0 ליטר/דקה למשך 5 דקות. הוציאו את העכברים מהכלוב ובצעו פריקת צוואר הרחם.
    2. הניחו את העכבר על לוח הניתוח כאשר הצד הגחוני פונה כלפי מעלה והראש הרחק מהנסיין, וקיבעו את הגפיים על לוח הניתוח באמצעות מחטי מזרק סטריליות. להסרה נוחה יותר של רקמת בלוטת התריס, השתמש במחט מזרק סטרילית אחרת כדי לתקן את הראש.
    3. יש לחטא את הצוואר בשלושה סיבובים לסירוגין של פילינג כלורהקסידין או פובידון-יוד ולאחר מכן 75% אלכוהול. לאחר מכן, בצע חתך קטן מעל מרכז עצם הבריח עם מספריים סטריליים ומלקחיים.
    4. ממשיכים את קו האמצע של החתך עד לפה. מצא את בלוטת submandibular ולהסיר אותו כדי לחשוף את המיקום האנטומי של בלוטת התריס, אשר ממוקם ליד סחוס בלוטת התריס קנה הנשימה.
    5. מצא את בלוטת התריס, לנתח בזהירות את בלוטת התריס משאר אזור הצוואר עם מספריים סטריליים, ולאחר מכן לשים את בלוטת התריס הוסר בצלחת 10 ס"מ מלא 10 מ"ל של PBS סטרילי.
      הערה: במהלך הסרת בלוטת התריס, היו עדינים ואיטיים והימנעו מחיתוך כלי הדם בצוואר. אם כלי הצוואר נחתכים, הצוואר יתמלא מיד בדם, ויש להסיר את הדם מיד עם ספוגי אלכוהול כדי לחשוף את המיקום האנטומי של בלוטת התריס. לפני הסרת רקמת בלוטת התריס, בזהירות לבחון את המאפיינים של האונות השמאלית והימנית של בלוטת התריס (גודל, צורה, וכו ') כדי למנוע חוסר יכולת להבחין בין האונות השמאלית והימנית של בלוטת התריס לאחר הסרה.
    6. ב PBS סטרילי, להסיר את הדם מפני השטח של רקמת בלוטת התריס עם מספריים סטריליים לחתוך בזהירות את קנה הנשימה. לאחר מכן, לשים את רקמת בלוטת התריס על בד סטרילי, ולמדוד את גודל האונות השמאלית והימנית של בלוטת התריס עם קליפרים vernier.
    7. מחלקים את האונות השמאלית והימנית של בלוטת התריס לשני חלקים עם להב סטרילי. הכניסו חלק אחד לתוך 2 מ"ל של תמיסת 4% פרפורמלדהיד לקיבוע, והכניסו את החלק השני לחנקן נוזלי לשימור.
  3. מיצוי ריאות וכבד
    1. יש לחטא את הבטן בשלושה סבבים לסירוגין של פילינג כלורהקסידין או פובידון-יוד ו-75% אלכוהול. לאחר מכן, צבטו ממש מעל איבר המין של העכבר ועשו חתך קטן, חתכו לאורך קו האמצע של הבטן לעצם התת-קרקעית, וחשפו את חלל הבטן.
    2. מצא את הכבד בחלק העליון של הבטן בזהירות להסיר אותו. הכניסו את הכבד ל-PBS סטרילי.
    3. בזהירות לחתוך את הסרעפת לאורך הצלעות כדי לחשוף את חלל החזה. לאחר מכן, אחזו בעצם החזה ומשכו למעלה כדי להרחיב את החלל עוד יותר. מצא את הריאה והסר אותה. הכניסו את הריאה שהוסרה ל-PBS סטרילי.
    4. שימו לב באופן גס אם יש גרורות בריאה ובכבד. ספרו את מספר הגרורות וקחו רשומה דיגיטלית. לאחר מכן, השתמש להב סטרילי כדי לחלק את רקמות הריאה והכבד לשני חלקים. שים חלק אחד לתוך 3 מ"ל של 4% תמיסת paraformaldehyde לקיבוע וחלק אחר לתוך חנקן נוזלי לשימור.
    5. התייבשות רקמות
      1. הכניסו את הרקמות לקופסת ההתייבשות. הכניסו את קופסת ההתייבשות לסלסלה בהתייבשות אלכוהול הדרגתית כדלקמן: 70% אלכוהול למשך שעה; 80% אלכוהול במשך 1 שעות; 95% אלכוהול במשך 30 דקות; 95% אלכוהול במשך 30 דקות; אתנול נטול מים I במשך 30 דקות; אתנול נטול מים II במשך 30 דקות; קסילן I במשך 20 דקות; קסילן II למשך 20 דקות; שעוות פרפין I במשך 30 דקות; שעוות פרפין II במשך 1 שעות; שעוות פרפין III למשך 30 דקות.
    6. הטמע את הרקמות ספוגות השעווה במכונת ההטבעה.
      1. הכניסו תחילה את השעווה המומסת למסגרת ההטבעה. לפני שהשעווה מתמצקת, הסר את הרקמה מקופסת ההתייבשות והכנס אותה למסגרת ההטבעה, ולאחר מכן צרף את התווית.
      2. מניחים לשעווה להתקרר בטמפרטורה של -20°C על שולחן ההקפאה. לאחר שהשעווה מתמצקת, מסירים את גוש השעווה ממסגרת ההטבעה וקוצצים אותו.
    7. מניחים את גוש השעווה הגזוז על פרוסת פרפין, בעובי של 5 מיקרומטר ובגודל של 2X2 ס"מ. לאחר החיתוך, לאפשר את החלקים לצוף על מפזר עם מים חמים ב 45 ° C כדי לשטח את הרקמה. להרים את הטישו עם שקופית, ואופים את הפרוסות בתנור ב 65 מעלות צלזיוס במשך 2 שעות.
    8. לאחר שהמים מתייבשים והשעווה נמסה, הסירו את המגלשה עם הרקמה והשתמשו בה לצביעת המטוקסילין ואאוזין (HE) ואימונוהיסטוכימיקל (IHC)16. יש לוודא שהקטעים צמודים לשקופיות לצורך צביעה.

3. הכתמת הגידול הראשוני והריאה

  1. דיואקסינג
    1. שים את השקופיות עם המקטעים בקסילן למשך 10 דקות.
    2. יש לעבור לאלכוהול נטול מים (100%) (שני בקבוקים) למשך כ-3 דקות כל אחד.
    3. מעבירים ל-95% אלכוהול (שני בקבוקים) למשך כ-3 דקות כל אחד.
    4. עברו ל-80% אלכוהול למשך כ-3 דקות.
    5. עברו ל-50% אלכוהול למשך כ-3 דקות.
    6. מעבירים למי הברז ושוטפים את האלכוהול למשך כדקה.
  2. צביעה
    1. העבירו את המגלשות להמטוקסילין למשך 8 דקות.
    2. העבר את המגלשות למים למשך דקה אחת כדי לשטוף את המטוקסילין; הרקמה משתנה מכחול לאדום.
    3. העבירו את המגלשות ל-1% חומצה הידרוכלורית למשך כ-30 שניות.
    4. מעבירים את המגלשות למים, שוטפים במשך 5 דקות.
    5. העבר את המגלשות לתוך eosin במשך 90 שניות, ולאחר מכן לשטוף אותם עם מים במשך 5 דקות.
    6. העבירו את המגלשות ל-50% אלכוהול, 80% אלכוהול, 95% אלכוהול (שני בקבוקים) ואלכוהול נטול מים (100%) (שני בקבוקים), למשך דקה אחת כל אחד.
    7. העבירו את המגלשות לקסילן למשך 5 דקות.
    8. לאחר שהשקופיות יבשות, אטמו אותן בשרף ניטרלי.

תוצאות

גרמנו ל-mATC לחקור את גדילת הגידול, זמן הישרדות עכברים ומאפיינים פתולוגיים. לאחר הזירוז, העכברים הוקרבו מיד, ודגימות (בלוטת התריס, הריאות והכבד) נאספו לאחר שנמצא אחד מהמצבים הבאים: 1) מצוקה נשימתית הנגרמת כתוצאה מדחיסת הגידול; 2) ירידה בתיאבון וקולות חריגים; 3) עייפות יוצאת דופן; ו-4) ירידה במשקל ?...

Discussion

שלבים קריטיים בפרוטוקול לדיסקציה של גידול בבלוטת התריס
במהלך דיסקציה, המיקום האנטומי של בלוטת התריס צריך להיות מובן כראוי. בלוטת התריס היא בלוטה בצורת פרפר הממוקמת בצד הגבי של הבלוטה התת-לסתית ליד סחוס בלוטת התריס וקנה הנשימה. במהלך ההליך נמנעה בזהירות קטיעת עורקי הדם משני ציד?...

Disclosures

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי התוכנית הלאומית לפיתוח מחקר מפתח של סין (2021YFA1301203); הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82103031, 82103918, 81973408, 82272933); פרויקט הדגירה של המחקר הקליני, בית החולים מערב סין, אוניברסיטת סצ'ואן (22HXFH019); פרויקט שיתוף הפעולה הבינלאומי של לשכת המדע והטכנולוגיה העירונית של צ'נגדו (2020-GH02-00017-HZ); הקרן למדעי הטבע של סצ'ואן, 2022NSFSC1314; "פרויקט 1.3.5 לדיסציפלינות של מצוינות, בית החולים מערב סין, אוניברסיטת סצ'ואן" (ZYJC18035, ZYJC18025, ZYYC20003, ZYJC18003); ותוכנית המדע והטכנולוגיה של סצ'ואן (2023YFS0098).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
100x Citrate antigen retrieval solution (PH 6.0)MXBCat# MVS-0101
50x EDTA antigen retrieval solution(pH 9.5)ZSGB-GIOCat# ZLI-9071
Brafflox/wt miceCollaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China
Caspase-3BeyotimeCat# AC033
CD8Cell Signaling TechnologyCat# 98941; RRID:AB_2756376
CD206Cell Signaling TechnologyCat# 24595; RRID:AB_2892682
Chamber for anesthesia inductionRWDlifescience
Enhanced DAB chromogenic kitMXBCat# DAB-2031
Eosin staining solutionZSGB-GIOCat# ZLI-9613
F4/80AbcamCat# 100790; RRID:AB_10675322
Foxp3Cell Signaling TechnologyCat# 12653; RRID:AB_2797979
Fully enclosed tissue dehydratorLeica BiosystemsASP300S
Hematoxylin staining solutionZSGB-GIOCat# ZLI-9610
HistoCore Arcadia fully automatic tissue embedding machineLeica Biosystems
Ki67BeyotimeCat# AF1738
Rotating SlicerRWDlifescience Minux S700
SPlink detection kits (Biotin-Streptavidin HRP Detection Systems)ZSGB-GIOCat# SP-9001
TPO-cre/ERT2 miceCollaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China
Trp53flox/wt miceCollaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China
Ultrasonic cell crusherNingbo Xinyi Ultrasound Equipment Co., LtdJY92-IIN
Ultrasound gelKepplerKL-250
Ultrasound systemVisualSonicsVevo 3100

References

  1. Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2019. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 69 (1), 7-34 (2019).
  2. Parenti, R., Salvatorelli, L., Magro, G. Anaplastic thyroid carcinoma: Current treatments and potential new therapeutic options with emphasis on TfR1/CD71. International Journal of Endocrinology. 2014, 685396 (2014).
  3. Baldini, E., et al. In vitro and in vivo effects of the urokinase plasminogen activator inhibitor WX-340 on anaplastic thyroid cancer cell lines. International Journal of Molecular Sciences. 23 (7), 3724 (2022).
  4. Haugen, B. R. American Thyroid Association Management guidelines for adult patients with thyroid nodules and differentiated thyroid cancer: what is new and what has changed. Cancer. 123 (3), 372-381 (2015).
  5. O'Neill, J. P., Shaha, A. R. Anaplastic thyroid cancer. Oral Oncology. 49 (7), 702-706 (2013).
  6. Simoes-Pereira, J., Capitao, R., Limbert, E., Leite, V. Anaplastic thyroid cancer: Clinical picture of the last two decades at a single oncology referral centre and novel therapeutic options. Cancers. 11 (8), 1188 (2019).
  7. Fagin, J. A., Wells, S. A. Biologic and clinical perspectives on thyroid cancer. The New England Journal of Medicine. 375 (11), 1054-1067 (2016).
  8. Neff, R. L., Farrar, W. B., Kloos, R. T., Burman, K. D. Anaplastic thyroid cancer. Endocrinology and Metabolism Clinics of North America. 37 (2), 525-538 (2008).
  9. Lareau, C. A., et al. Droplet-based combinatorial indexing for massive-scale single-cell chromatin accessibility. Nature Biotechnology. 37 (8), 916-924 (2019).
  10. Guo, H., et al. Single-cell methylome landscapes of mouse embryonic stem cells and early embryos analyzed using reduced representation bisulfite sequencing. Genome Research. 23 (12), 2126-2135 (2013).
  11. Mooijman, D., Dey, S. S., Boisset, J. -. C., Crosetto, N., van Oudenaarden, A. Single-cell 5hmC sequencing reveals chromosome-wide cell-to-cell variability and enables lineage reconstruction. Nature Biotechnology. 34 (8), 852-856 (2016).
  12. Smallridge, R. C., Marlow, L. A., Copland, J. A. Anaplastic thyroid cancer: molecular pathogenesis and emerging therapies. Endocrine-Related Cancer. 16 (1), 17-44 (2009).
  13. Charles, R. -. P. Overview of genetically engineered mouse models of papillary and anaplastic thyroid cancers: enabling translational biology for patient care improvement. Current Protocols in Pharmacology. 69, 1-14 (2015).
  14. Tuttle, R. M., Haugen, B., Perrier, N. D. Updated American joint committee on cancer/tumor-nodemetastasis staging system for differentiated and anaplastic thyroid cancer (8th Edition): What changed and why. Thyroid. 27 (6), 751-756 (2017).
  15. McFadden, D. G., et al. p53 constrains progression to anaplastic thyroid carcinoma in a Braf-mutant mouse model of papillary thyroid cancer. Protocols of the National Academy of Sciences. 111 (16), 1600-1609 (2014).
  16. Gunda, V., et al. Combinations of BRAF inhibitor and anti-PD-1/PD-L1 antibody improve survival and tumour immunity in an immunocompetent model of orthotopic murine anaplastic thyroid cancer. British Journal of Cancer. 119 (10), 1223-1232 (2018).
  17. He, Y., et al. High-resolution ultrasonography for the analysis of orthotopic ATC tumors in a genetically engineered mouse model. Journal of Visualized Experiments. (188), e64615 (2022).
  18. Zhang, L., et al. Novel recurrent altered genes in Chinese patients with anaplastic thyroid cancer. The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 106 (4), 988-998 (2021).
  19. Luo, H., et al. Pan-cancer single-cell analysis reveals the heterogeneity and plasticity of cancer-associated fibroblasts in the tumor microenvironment. Nature Communications. 13 (1), 6619 (2022).
  20. Luo, H., et al. Characterizing dedifferentiation of thyroid cancer by integrated analysis. Science Advances. 7 (31), (2021).
  21. Knostman, K. A. B., Jhiang, S. M., Capen, C. C. Genetic alterations in thyroid cancer: the role of mouse models. Veterinary Pathology. 44 (1), 1-14 (2007).
  22. Kim, C. S., Zhu, X. Lessons from mouse models of thyroid cancer. Thyroid. 19 (12), 1317-1331 (2009).
  23. Champa, D., Di Cristofano, A. Modeling anaplastic thyroid carcinoma in the mouse. Hormones and Cancer. 6 (1), 37-44 (2015).
  24. Cabanillas, M. E., Ryder, M., Jimenez, C. Targeted therapy for advanced thyroid cancer: kinase inhibitors and beyond. Endocrine Reviews. 40 (6), 1573-1604 (2019).
  25. Ljubas, J., Ovesen, T., Rusan, M. A systematic review of phase II targeted therapy clinical trials in anaplastic thyroid cancer. Cancers. 11 (7), 943 (2019).
  26. Huang, N. -. S., et al. An update of the appropriate treatment strategies in anaplastic thyroid cancer: a population-based study of 735 patients. International Journal of Endocrinology. 2019, 8428547 (2019).
  27. Subbiah, V., et al. Dabrafenib and trametinib treatment in patients with locally advanced or metastatic BRAF V600-mutant anaplastic thyroid cancer. Journal of Clinical Oncology. 36 (1), 7-13 (2018).
  28. Baldini, E., et al. Effects of selective inhibitors of Aurora kinases on anaplastic thyroid carcinoma cell lines. Endocrine-Related Cancer. 21 (5), 797-811 (2014).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

192

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved