Modelo Murino Espontâneo de Câncer Anaplásico de Tireoide

Resumo

Aqui, apresentamos um pipeline padrão para a obtenção de tumores ATC murinos por modelos espontâneos de camundongos geneticamente modificados. Além disso, apresentamos a dinâmica tumoral e informações patológicas sobre as lesões primárias e metastizadas. Esse modelo ajudará os pesquisadores a entender a tumorigênese e facilitará a descoberta de drogas.

Resumo

O câncer anaplásico de tireoide (ATC) é uma neoplasia maligna rara, mas letal, com prognóstico sombrio. Há uma necessidade urgente de pesquisas mais aprofundadas sobre a carcinogênese e o desenvolvimento de ATC, bem como métodos terapêuticos, uma vez que os tratamentos padrão são essencialmente esgotados em pacientes com ATC. No entanto, a baixa prevalência tem dificultado estudos clínicos aprofundados e a coleta de amostras de tecido, de modo que pouco progresso foi alcançado na criação de tratamentos eficazes. Usamos engenharia genética para criar um modelo murino ATC condicionalmente induzível (mATC) em um fundo C57BL/6. O modelo murino ATC foi genotipado por TPO-cre/ERT2; Braf^CA/wt; Trp53 ex2-10^/ex2-10 e induzido por injeção intraperitoneal com tamoxifeno. Com o modelo murino, investigamos a dinâmica tumoral (o tamanho do tumor variou de 12,4 mm 2 a 32,5 mm² após 4 meses da indução), a sobrevida (o período mediano de sobrevida foi de 130 dias) e as metástases (metástases pulmonares ocorreram em 91,6% dos camundongos) e as características patológicas (caracterizadas pela imuno-histoquímica Cd8, Foxp3, F4/80, Cd206, Ki67 e Caspase-3). Os resultados indicaram que o mATC espontâneo possui dinâmica tumoral e microambiente imunológico altamente semelhantes aos tumores ATC humanos. Em conclusão, com alta similaridade nas características fisiopatológicas e genótipos unificados, o modelo mATC resolveu a escassez de ATC clínica e heterogeneidade da amostra até certo ponto. Portanto, facilitaria o mecanismo e os estudos translacionais da ATC e forneceria uma abordagem para investigar o potencial de tratamento de pequenas drogas moleculares e agentes de imunoterapia para ATC.

Introdução

O câncer de tireoide é uma das neoplasias endócrinas mais^comuns1, originando-se do epitélio tireoidiano. Nos últimos anos, a incidência do câncer de tireoide tem aumentado rapidamente em todo o^mundo2. O câncer de tireoide pode ser dividido em tipos distintos de acordo com o grau de diferenciação das células tumorais. Com base no comportamento clínico e histológico, os carcinomas de tireoide são divididos em carcinomas bem diferenciados, incluindo carcinoma papilífero de tireoide (CPT) e carcinoma folicular de tireoide (FTC), carcinoma pouco diferenciado (PDTC) e carcinoma indiferenciado ou anaplásico da tireoide (ATC)

Protocolo

Os procedimentos em animais aqui descritos foram realizados com a aprovação do Comitê de Ética Animal do West China Hospital, Sichuan University, Chengdu, Sichuan, China.

1. Indução de camundongos TBP

1. Identificar genótipo de camundongos
   1. Por volta das 3 semanas, separe os camundongos fêmeas dos machos. Ao mesmo tempo, use uma pinça de marca auricular para fixar uma marca auricular. Coloque as marcas auriculares na metade inferior e no terço médio da orelha, certificando-se de evitar a área com maior concentração de capilares.
   2. Segure suavemente, mas com segurança, os ratos. Segure firmemente na bas....

Resultados

Induzimos o mATC para investigar o crescimento tumoral, o tempo de sobrevivência em camundongos e as características patológicas. Após a indução, os camundongos foram imediatamente sacrificados e amostras (tireoide, pulmão e fígado) foram coletadas uma vez que uma das seguintes condições foi encontrada: 1) desconforto respiratório causado pela compressão tumoral; 2) diminuição do apetite e vocalização anormal; 3) letargia incomum; e 4) perda de peso corporal superior a 20%. Durante o processo de amostrage.......

Discussão

Etapas críticas dentro do protocolo de dissecção de tumor de tireoide
Durante a dissecção, a localização anatômica da glândula tireoide precisa ser corretamente compreendida. A glândula tireoide é uma glândula em forma de borboleta localizada no lado dorsal da glândula submandibular perto da cartilagem tireoide e da traqueia. Durante o procedimento, o corte das artérias sanguíneas de ambos os lados do pescoço foi cuidadosamente evitado.

Modificação.......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
100x Citrate antigen retrieval solution (PH 6.0)	MXB	Cat# MVS-0101
50x EDTA antigen retrieval solution(pH 9.5)	ZSGB-GIO	Cat# ZLI-9071
Brafflox/wt mice	Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China
Caspase-3	Beyotime	Cat# AC033
CD8	Cell Signaling Technology	Cat# 98941; RRID:AB_2756376
CD206	Cell Signaling Technology	Cat# 24595; RRID:AB_2892682
Chamber for anesthesia induction	RWDlifescience
Enhanced DAB chromogenic kit	MXB	Cat# DAB-2031
Eosin staining solution	ZSGB-GIO	Cat# ZLI-9613
F4/80	Abcam	Cat# 100790; RRID:AB_10675322
Foxp3	Cell Signaling Technology	Cat# 12653; RRID:AB_2797979
Fully enclosed tissue dehydrator	Leica Biosystems	ASP300S
Hematoxylin staining solution	ZSGB-GIO	Cat# ZLI-9610
HistoCore Arcadia fully automatic tissue embedding machine	Leica Biosystems
Ki67	Beyotime	Cat# AF1738
Rotating Slicer	RWDlifescience	Minux S700
SPlink detection kits (Biotin-Streptavidin HRP Detection Systems)	ZSGB-GIO	Cat# SP-9001
TPO-cre/ERT2 mice	Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China
Trp53flox/wt mice	Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China
Ultrasonic cell crusher	Ningbo Xinyi Ultrasound Equipment Co., Ltd	JY92-IIN
Ultrasound gel	Keppler	KL-250
Ultrasound system	VisualSonics	Vevo 3100