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Neste Artigo

  • Resumo
  • Resumo
  • Introdução
  • Protocolo
  • Resultados
  • Discussão
  • Divulgações
  • Agradecimentos
  • Materiais
  • Referências
  • Reimpressões e Permissões

Resumo

Aqui, apresentamos um pipeline padrão para a obtenção de tumores ATC murinos por modelos espontâneos de camundongos geneticamente modificados. Além disso, apresentamos a dinâmica tumoral e informações patológicas sobre as lesões primárias e metastizadas. Esse modelo ajudará os pesquisadores a entender a tumorigênese e facilitará a descoberta de drogas.

Resumo

O câncer anaplásico de tireoide (ATC) é uma neoplasia maligna rara, mas letal, com prognóstico sombrio. Há uma necessidade urgente de pesquisas mais aprofundadas sobre a carcinogênese e o desenvolvimento de ATC, bem como métodos terapêuticos, uma vez que os tratamentos padrão são essencialmente esgotados em pacientes com ATC. No entanto, a baixa prevalência tem dificultado estudos clínicos aprofundados e a coleta de amostras de tecido, de modo que pouco progresso foi alcançado na criação de tratamentos eficazes. Usamos engenharia genética para criar um modelo murino ATC condicionalmente induzível (mATC) em um fundo C57BL/6. O modelo murino ATC foi genotipado por TPO-cre/ERT2; BrafCA/wt; Trp53 ex2-10/ex2-10 e induzido por injeção intraperitoneal com tamoxifeno. Com o modelo murino, investigamos a dinâmica tumoral (o tamanho do tumor variou de 12,4 mm 2 a 32,5 mm2 após 4 meses da indução), a sobrevida (o período mediano de sobrevida foi de 130 dias) e as metástases (metástases pulmonares ocorreram em 91,6% dos camundongos) e as características patológicas (caracterizadas pela imuno-histoquímica Cd8, Foxp3, F4/80, Cd206, Ki67 e Caspase-3). Os resultados indicaram que o mATC espontâneo possui dinâmica tumoral e microambiente imunológico altamente semelhantes aos tumores ATC humanos. Em conclusão, com alta similaridade nas características fisiopatológicas e genótipos unificados, o modelo mATC resolveu a escassez de ATC clínica e heterogeneidade da amostra até certo ponto. Portanto, facilitaria o mecanismo e os estudos translacionais da ATC e forneceria uma abordagem para investigar o potencial de tratamento de pequenas drogas moleculares e agentes de imunoterapia para ATC.

Introdução

O câncer de tireoide é uma das neoplasias endócrinas maiscomuns1, originando-se do epitélio tireoidiano. Nos últimos anos, a incidência do câncer de tireoide tem aumentado rapidamente em todo omundo2. O câncer de tireoide pode ser dividido em tipos distintos de acordo com o grau de diferenciação das células tumorais. Com base no comportamento clínico e histológico, os carcinomas de tireoide são divididos em carcinomas bem diferenciados, incluindo carcinoma papilífero de tireoide (CPT) e carcinoma folicular de tireoide (FTC), carcinoma pouco diferenciado (PDTC) e carcinoma indiferenciado ou anaplásico da tireoide (ATC)

Protocolo

Os procedimentos em animais aqui descritos foram realizados com a aprovação do Comitê de Ética Animal do West China Hospital, Sichuan University, Chengdu, Sichuan, China.

1. Indução de camundongos TBP

  1. Identificar genótipo de camundongos
    1. Por volta das 3 semanas, separe os camundongos fêmeas dos machos. Ao mesmo tempo, use uma pinça de marca auricular para fixar uma marca auricular. Coloque as marcas auriculares na metade inferior e no terço médio da orelha, certificando-se de evitar a área com maior concentração de capilares.
    2. Segure suavemente, mas com segurança, os ratos. Segure firmemente na bas....

Resultados

Induzimos o mATC para investigar o crescimento tumoral, o tempo de sobrevivência em camundongos e as características patológicas. Após a indução, os camundongos foram imediatamente sacrificados e amostras (tireoide, pulmão e fígado) foram coletadas uma vez que uma das seguintes condições foi encontrada: 1) desconforto respiratório causado pela compressão tumoral; 2) diminuição do apetite e vocalização anormal; 3) letargia incomum; e 4) perda de peso corporal superior a 20%. Durante o processo de amostrage.......

Discussão

Etapas críticas dentro do protocolo de dissecção de tumor de tireoide
Durante a dissecção, a localização anatômica da glândula tireoide precisa ser corretamente compreendida. A glândula tireoide é uma glândula em forma de borboleta localizada no lado dorsal da glândula submandibular perto da cartilagem tireoide e da traqueia. Durante o procedimento, o corte das artérias sanguíneas de ambos os lados do pescoço foi cuidadosamente evitado.

Modificação.......

Divulgações

Os autores declaram não haver conflitos de interesse.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado pelo Programa Nacional de Desenvolvimento de Pesquisa Chave da China (2021YFA1301203); a Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (82103031, 82103918, 81973408, 82272933); o Projeto de Incubação de Pesquisa Clínica, West China Hospital, Sichuan University (22HXFH019); o Projeto de Cooperação Internacional da Secretaria Municipal de Ciência e Tecnologia de Chengdu (2020-GH02-00017-HZ); Fundação de Ciências Naturais de Sichuan, 2022NSFSC1314; o "projeto 1.3.5 para disciplinas de excelência, West China Hospital, Sichuan University" (ZYJC18035, ZYJC18025, ZYYC20003, ZYJC18003); e Programa de Ciência e Tecnologia de Sichuan (2023YFS0098).

Materiais

NameCompanyCatalog NumberComments
100x Citrate antigen retrieval solution (PH 6.0)MXBCat# MVS-0101
50x EDTA antigen retrieval solution(pH 9.5)ZSGB-GIOCat# ZLI-9071
Brafflox/wt miceCollaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China
Caspase-3BeyotimeCat# AC033
CD8Cell Signaling TechnologyCat# 98941; RRID:AB_2756376
CD206Cell Signaling TechnologyCat# 24595; RRID:AB_2892682
Chamber for anesthesia inductionRWDlifescience
Enhanced DAB chromogenic kitMXBCat# DAB-2031
Eosin staining solutionZSGB-GIOCat# ZLI-9613
F4/80AbcamCat# 100790; RRID:AB_10675322
Foxp3Cell Signaling TechnologyCat# 12653; RRID:AB_2797979
Fully enclosed tissue dehydratorLeica BiosystemsASP300S
Hematoxylin staining solutionZSGB-GIOCat# ZLI-9610
HistoCore Arcadia fully automatic tissue embedding machineLeica Biosystems
Ki67BeyotimeCat# AF1738
Rotating SlicerRWDlifescience Minux S700
SPlink detection kits (Biotin-Streptavidin HRP Detection Systems)ZSGB-GIOCat# SP-9001
TPO-cre/ERT2 miceCollaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China
Trp53flox/wt miceCollaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China
Ultrasonic cell crusherNingbo Xinyi Ultrasound Equipment Co., LtdJY92-IIN
Ultrasound gelKepplerKL-250
Ultrasound systemVisualSonicsVevo 3100

Referências

  1. Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2019. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 69 (1), 7-34 (2019).
  2. Parenti, R., Salvatorelli, L., Magro, G. Anaplastic thyroid carcinoma: Current treatments an....

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