未分化甲状腺癌の自発的マウスモデル

要約

ここでは、自発的に遺伝子操作されたマウスモデルによってマウスATC腫瘍を取得するための標準パイプラインを提示します。さらに、原発巣と転移病変に関する腫瘍動態と病理学的情報を提示します。このモデルは、研究者が腫瘍形成を理解し、創薬を促進するのに役立ちます。

要約

未分化甲状腺がん(ATC)はまれですが致命的な悪性腫瘍であり、予後は悲惨です。ATC患者では標準治療が本質的に枯渇しているため、ATCの発がんと発症、および治療法に関するより詳細な研究が緊急に必要です。しかし、有病率が低いため、徹底的な臨床研究や組織サンプルの採取が妨げられており、効果的な治療法の作成はほとんど進んでいません。遺伝子工学を用いて、C57BL/6バックグラウンドで条件付き誘導性ATCマウスモデル(mATC)を作成しました。ATCマウスモデルはTPO-cre/ERT2によって遺伝子型決定されました。ブラフ^{CA / wt};Trp53^{ex2-10 / ex2-10}およびタモキシフェンによる腹腔内注射によって誘導された。マウスモデルを用いて、腫瘍動態(導入後4ヶ月後の腫瘍サイズは12.4 mm 2から32.5 mm²の範囲)、生存期間(生存期間の中央値は130日)、転移(肺転移はマウスの91.6%で発生した)曲線および病理学的特徴(Cd8、Foxp3、F4/80、Cd206、Ki67、およびCaspase-3免疫組織化学染色によって特徴付けられる)を調査した。その結果、自然発生型mATCはヒトATC腫瘍と高度に類似した腫瘍動態と免疫学的微小環境を有することが示された。結論として、mATCモデルは、病態生理学的特徴と統一された遺伝子型の高い類似性により、臨床ATC組織とサンプルの不均一性の不足をある程度解決しました。したがって、ATCのメカニズムとトランスレーショナル研究を促進し、ATCに対する低分子医薬品と免疫療法剤の治療可能性を調査するためのアプローチを提供します。

概要

甲状腺がんは、甲状腺上皮に由来する最も一般的な内分泌悪性腫瘍1の¹つです。近年、甲状腺がんの発生率は世界中で急速に増加しています²。甲状腺がんは、腫瘍細胞の分化の程度に応じて異なるタイプに分類できます。甲状腺がんは、臨床行動と組織学に基づいて、甲状腺乳頭がん(PTC)や濾胞性甲状腺がん(FTC)、低分化型がん(PDTC)、甲状腺の未分化がん(ATC^)などの高分化型がんに分類されます3。軽度の行動と予後が良好な一般的なタイプであるPTCとは対照的に⁴、ATCはまれで非常に侵攻性の高い悪性腫瘍であり、すべての甲状腺腫瘍の2%から3%を占めています⁵。ATCはまれですが、甲状腺がん関連の死亡の約50%の原因であり、生存期間は悲惨です(6〜8^か月)6,7。ATC症例の50%以上が肺転移と診断^{されています8。}ATCの攻撃的な性質に加えて、限られた効果的な治療法が診療所で開発されています。したがって、ATC患者は暗い予後を有する9、^10、<....

プロトコル

ここに記載されている動物の手順は、中国四川省成都にある四川大学西中国病院の動物倫理委員会の承認を得て実施されました。

1. TBPマウスの誘導

1. マウスの遺伝子型を特定する
   1. 約3週間で、雌マウスを雄マウスから分離します。同時に、イヤータグクランプを使用してイヤータグを固定します。イヤータグを下半分と耳の中央3分の1に配置し、毛細血管が最も集中している領域を避けます。
   2. マウスを優しくしかししっかりと拘束します。マウスの尾の付け根をしっかりとつかみます。マウスを握れる面に置きます。
   3. 空いている手を肩にそっとしっかりと置き、親指と人差し指で首の首筋をすばやくつかみます。小指で尾を持ちます。
   4. アルコールで尾を拭きます。滅菌ハサミを使用して皮膚サンプルを<5 mm切り取り、ラベル付きの清潔なサンプル容器に入れます。マウスの毛皮を取り除く必要はありません。止血を達成するために滅菌スポンジで尾を圧縮します。
   5. 次に、マウスの尾を溶菌し、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を実行して遺伝子型を特定します。
      注:ネズミの尾を1つ切った後、ネズミの尾の間の遺伝子の相互汚染を避けるために、はさみの表面をアルコール綿で拭く必要があります。それらをケージに入れた後、マウスを5分間監視して、創傷部位での出血の兆候を探す必要があります。本試験で使用したプラ....

結果

mATCを誘導して腫瘍増殖、マウス生存時間、病理学的特徴を調べた。誘導後、マウスを直ちに屠殺し、以下の条件のいずれかが見つかったらサンプル(甲状腺、肺、および肝臓)を採取した:1)腫瘍圧迫による呼吸困難;2)食欲減退および異常な発声;3)異常に無気力;4)20%以上の体重減少。サンプリングプロセス中に、すべてのマウス(12/12)が誘導後に腫瘍の形成に成功したことがわかりました。マウス.......

ディスカッション

甲状腺腫瘍解離のためのプロトコル内の重要なステップ
解剖中、甲状腺の解剖学的位置を正しく理解する必要があります。甲状腺は、顎下腺の背側、甲状軟骨と気管の近くに位置する蝶の形をした腺です。処置中、首の両側の血液動脈を切断することは慎重に避けられました。

mATC品種の修正とトラブルシューティング
ATCはまれで非常に攻?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
100x Citrate antigen retrieval solution (PH 6.0)	MXB	Cat# MVS-0101
50x EDTA antigen retrieval solution(pH 9.5)	ZSGB-GIO	Cat# ZLI-9071
Brafflox/wt mice	Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China
Caspase-3	Beyotime	Cat# AC033
CD8	Cell Signaling Technology	Cat# 98941; RRID:AB_2756376
CD206	Cell Signaling Technology	Cat# 24595; RRID:AB_2892682
Chamber for anesthesia induction	RWDlifescience
Enhanced DAB chromogenic kit	MXB	Cat# DAB-2031
Eosin staining solution	ZSGB-GIO	Cat# ZLI-9613
F4/80	Abcam	Cat# 100790; RRID:AB_10675322
Foxp3	Cell Signaling Technology	Cat# 12653; RRID:AB_2797979
Fully enclosed tissue dehydrator	Leica Biosystems	ASP300S
Hematoxylin staining solution	ZSGB-GIO	Cat# ZLI-9610
HistoCore Arcadia fully automatic tissue embedding machine	Leica Biosystems
Ki67	Beyotime	Cat# AF1738
Rotating Slicer	RWDlifescience	Minux S700
SPlink detection kits (Biotin-Streptavidin HRP Detection Systems)	ZSGB-GIO	Cat# SP-9001
TPO-cre/ERT2 mice	Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China
Trp53flox/wt mice	Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China
Ultrasonic cell crusher	Ningbo Xinyi Ultrasound Equipment Co., Ltd	JY92-IIN
Ultrasound gel	Keppler	KL-250
Ultrasound system	VisualSonics	Vevo 3100