Modèle murin spontané de cancer anaplasique de la thyroïde

Résumé

Ici, nous présentons un pipeline standard pour obtenir des tumeurs ATC murines par des modèles murins spontanés génétiquement modifiés. En outre, nous présentons la dynamique tumorale et des informations pathologiques sur les lésions primaires et métastasées. Ce modèle aidera les chercheurs à comprendre la tumorigenèse et facilitera la découverte de médicaments.

Résumé

Le cancer anaplasique de la thyroïde (CTA) est une tumeur maligne rare mais mortelle dont le pronostic est sombre. Il est urgent de mener des recherches plus approfondies sur la cancérogenèse et le développement de l’ATC, ainsi que sur les méthodes thérapeutiques, car les traitements standard sont essentiellement épuisés chez les patients atteints d’ATC. Cependant, la faible prévalence a entravé les études cliniques approfondies et la collecte d’échantillons de tissus, de sorte que peu de progrès ont été réalisés dans la création de traitements efficaces. Nous avons utilisé le génie génétique pour créer un modèle murin ATC inductible conditionnellement (mATC) dans un arrière-plan C57BL/6. Le modèle murin ATC a été génotypé par TPO-cre/ERT2; Braf^CA/poids; Trp53 ex2-10^/ex2-10 et induit par injection intrapéritonéale de tamoxifène. Avec le modèle murin, nous avons étudié la dynamique tumorale (la taille de la tumeur variait de 12,4 mm 2 à 32,5 mm² après 4 mois d’induction), la survie (la période de survie médiane était de 130 jours) et les métastases (métastases pulmonaires survenues chez 91,6% des souris) courbes et caractéristiques pathologiques (caractérisées par une coloration immunohistochimique Cd8, Foxp3, F4/80, Cd206, Ki67 et Caspase-3). Les résultats ont indiqué que le mATC spontané possède une dynamique tumorale et un microenvironnement immunologique très similaires aux tumeurs ATC humaines. En conclusion, avec une grande similitude dans les caractéristiques physiopathologiques et les génotypes unifiés, le modèle mATC a résolu la pénurie de tissu ATC clinique et l’hétérogénéité des échantillons dans une certaine mesure. Par conséquent, il faciliterait le mécanisme et les études translationnelles de l’ATC et fournirait une approche pour étudier le potentiel de traitement des médicaments à petits molécules et des agents d’immunothérapie pour l’ATC.

Introduction

Le cancer de la thyroïde est l’une des tumeurs malignes endocriniennes les plus courantes¹, provenant de l’épithélium thyroïdien. Ces dernières années, l’incidence du cancer de la thyroïde a augmenté rapidement dans le monde^{entier 2}. Le cancer de la thyroïde peut être divisé en types distincts en fonction du degré de différenciation des cellules tumorales. Sur la base du comportement clinique et de l’histologie, les carcinomes thyroïdiens sont divisés en carcinomes bien différenciés, y compris le carcinome papillaire de la thyroïde (PTC) et le carcinome folliculaire de la thyroïde (FTC), le carcinome peu différencié (PDT....

Protocole

Les procédures animales décrites ici ont été effectuées avec l’approbation du Comité d’éthique animale de l’hôpital de Chine occidentale, Université du Sichuan, Chengdu, Sichuan, Chine.

1. Induction de souris TBP

1. Identifier le génotype des souris
   1. Vers 3 semaines, séparer les souris femelles des souris mâles. Dans le même temps, utilisez une pince d’étiquette d’oreille pour fixer une étiquette d’oreille. Placez les étiquettes d’oreille dans la moitié inférieure et sur le tiers moyen de l’oreille, en vous assurant d’éviter la zone avec la plus forte concentration de capillaires.
   2. Retenez doucement m....

Résultats

Nous avons induit mATC pour étudier la croissance tumorale, le temps de survie de la souris et les caractéristiques pathologiques. Après l’induction, les souris ont été immédiatement sacrifiées et des échantillons (thyroïde, poumon et foie) ont été prélevés une fois que l’une des conditions suivantes a été trouvée: 1) détresse respiratoire causée par la compression tumorale; 2) diminution de l’appétit et vocalisation anormale; 3) léthargie inhabituelle; et 4) perte de poids corporel de plus de 2.......

Discussion

Étapes critiques du protocole de dissection tumorale thyroïdienne
Pendant la dissection, l’emplacement anatomique de la glande thyroïde doit être correctement compris. La glande thyroïde est une glande en forme de papillon située sur la face dorsale de la glande sous-maxillaire près du cartilage thyroïdien et de la trachée. Pendant la procédure, la sectionnement des artères sanguines des deux côtés du cou a été soigneusement évité.

Modification et.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
100x Citrate antigen retrieval solution (PH 6.0)	MXB	Cat# MVS-0101
50x EDTA antigen retrieval solution(pH 9.5)	ZSGB-GIO	Cat# ZLI-9071
Brafflox/wt mice	Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China
Caspase-3	Beyotime	Cat# AC033
CD8	Cell Signaling Technology	Cat# 98941; RRID:AB_2756376
CD206	Cell Signaling Technology	Cat# 24595; RRID:AB_2892682
Chamber for anesthesia induction	RWDlifescience
Enhanced DAB chromogenic kit	MXB	Cat# DAB-2031
Eosin staining solution	ZSGB-GIO	Cat# ZLI-9613
F4/80	Abcam	Cat# 100790; RRID:AB_10675322
Foxp3	Cell Signaling Technology	Cat# 12653; RRID:AB_2797979
Fully enclosed tissue dehydrator	Leica Biosystems	ASP300S
Hematoxylin staining solution	ZSGB-GIO	Cat# ZLI-9610
HistoCore Arcadia fully automatic tissue embedding machine	Leica Biosystems
Ki67	Beyotime	Cat# AF1738
Rotating Slicer	RWDlifescience	Minux S700
SPlink detection kits (Biotin-Streptavidin HRP Detection Systems)	ZSGB-GIO	Cat# SP-9001
TPO-cre/ERT2 mice	Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China
Trp53flox/wt mice	Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China
Ultrasonic cell crusher	Ningbo Xinyi Ultrasound Equipment Co., Ltd	JY92-IIN
Ultrasound gel	Keppler	KL-250
Ultrasound system	VisualSonics	Vevo 3100