A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

פרוטוקול זה מציג מודל עכבר סטנדרטי להרחבת תפרים ושיטת הדמיה תלת-ממדית לחקר השינויים המכנוביולוגיים של התפר ועיצוב מחדש של העצם תחת העמסת כוח מתיחה.

Abstract

תפרים קרניופלציאליים ממלאים תפקיד מכריע מעבר להיותם מפרקים סיביים המחברים עצמות גולגולתיות; הם משמשים גם כנישה העיקרית לצמיחת עצם קלווארית ופנים, המאחסנים תאי גזע מזנכימליים ואבות ניווניים. מכיוון שרוב עצמות הגולגולת מתפתחות באמצעות אוסיפיקציה תוך ממברנית, אזורי השוליים של התפרים משמשים כנקודות התחלה. בשל חשיבות זו, תפרים אלה הפכו למטרות מסקרנות בטיפולים אורתופדיים כמו הרחבת קמרון גולגולת בסיוע קפיץ, הרחבה מקסילרית מהירה ומשיכה מקסילרית. תחת כוח מעקב אורתופדי, תאי גזע התפרים מופעלים במהירות, והופכים למקור דינמי לעיצוב מחדש של העצם במהלך הרחבה. למרות חשיבותם, השינויים הפיזיולוגיים במהלך תקופות שיפוץ העצם עדיין אינם מובנים. שיטות החתך המסורתיות, בעיקר בכיוון הסגיטלי, אינן לוכדות את השינויים המקיפים המתרחשים לאורך התפר כולו. מחקר זה ביסס מודל עכבר סטנדרטי להרחבת תפר קשת. כדי להמחיש באופן מלא שינויים בעיצוב מחדש של העצם לאחר הרחבת התפרים, שיטת ניקוי הרקמה של פגסוס שולבה עם צביעת EdU בהרכבה מלאה ותיוג כפול של כלאט סידן. זה איפשר הדמיה של תאים מתרבים מאוד והיווצרות עצם חדשה על פני כל העצמות הקלוואריאליות לאחר ההתרחבות. פרוטוקול זה מציע מודל סטנדרטי של עכבר הרחבת תפרים ושיטת הדמיה תלת-ממדית, השופכת אור על השינויים המכנוביולוגיים בתפרים ובעיצוב מחדש של העצם תחת עומס כוח מתיחה.

Introduction

תפרים קרניופלציאליים הם רקמות סיביות המחברות בין עצמות גולגולת וממלאות תפקידים חיוניים בצמיחה ושיפוץ של עצמות גולגולתיות. מבנה התפר דומה לנהר, ומספק זרימה של משאבי תאים כדי להזין ולבנות את "גדת הנהר", המכונה חזיתות אוסטאוגניות, התורמות להיווצרות עצמות גולגולת באמצעות אוסטאוגנזה תוך ממברנית1.

העניין בתפרים קרניופלציאליים מונע על ידי צרכים קליניים להבין סגירה מוקדמת של תפרים גולגולתיים ותפקוד לקוי של תפרי הפנים, מה שעלול להוביל לעיוותים גולגולתיים ואף למצבים מסכני חיים אצל ילדים. כריתת סוטורקטומיה פתוחה משמשת באופן שגרתי בטיפול קליני, אך מעקב ארוך טווח הראה הישנות לא מלאה של אוסיפיקציה חוזרת בחלק ....

Protocol

כל ההליכים הניסיוניים המתוארים כאן אושרו על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים של בית החולים העממי התשיעי בשנחאי, בית הספר לרפואה של אוניברסיטת ג'יאו טונג בשנגחאי (SH9H-2023-A616-SB). במחקר זה נעשה שימוש בעכברים זכרים C57BL/6 בני 4 שבועות. כל המכשירים בהם נעשה שימוש עוקרו לפני ההליך.

1. הכנת מודל הרחבת התפרים

  1. הכנת שני בעלי שמירה.
    1. השתמש בחוט אוסטרלי בגודל 0.014 אינץ' או חוט נירוסטה (ראה טבלת חומרים) ליצירת לולאה סלילית עם צבת חוט קלה. קוטר הלולאה הוא 2 מ"מ, והזנב בקוטר 1 מ"מ שמור משני הצדדים (איור 1A).
    2. יש לעקר את החוטים והמחזיקים לצורך הניתוח באוטוקלאב, מעקר ....

תוצאות

באמצעות פרוטוקול זה נקבע מודל עכברי להרחבת תפר סגיטלי (איור 1-2). לצורך הדמיה תלת-ממדית של שינויים במידול העצם לאחר הרחבת התפרים, יושמה שיטת ניקוי רקמות פגסוס על כל עצמות הקלוואריה לאחר הרחבה. לאחר הזילוח הופרדו עצמות קלווריאלי (איור 3A), והמ?.......

Discussion

יישמנו מודל סטנדרטי של עכבר הרחבת תפר כדי לבחון את השינויים המורפולוגיים הקבועים המתרחשים מדי שבוע במהלך כל מחזור השיפוץ בן החודש10. מודל זה שימושי לחקר עיצוב מחדש והתחדשות עצם קלווריאלית על ידי הרחבת תפרים קלווריאליים, כמו גם לחקר תאי תפר שונים in vivo. כדי להציג באופן מלא א.......

Disclosures

למחברים אין מה לחשוף.

Acknowledgements

אנו מודים על פלטפורמת המעבדה והסיוע של מכון האוזן, בית הספר לרפואה של אוניברסיטת ג'יאוטונג בשנחאי. עבודה זו נתמכה על ידי תוכנית שנחאי פוג'יאנג (22PJ1409200); הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס '11932012); קרן המחקר המדעי לפוסט-דוקטורט של בית החולים העממי התשיעי בשנחאי, בית הספר לרפואה של אוניברסיטת ג'יאו טונג בשנחאי; מימון תוכנית מחקר בסיסית של בית החולים העממי התשיעי המסונף לבית הספר לרפואה של אוניברסיטת ג'יאו טונג בשנגחאי (JYZZ154).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
37% Acid etchingXihubiomE10-02/1807011
Alizarin redSigma-AldrichA3882
AUSTRALIAN WIREA.J.WILCOCK0.014''
Benzyl benzoateSigma-AldrichB6630
Calcein greenSigma-AldrichC0875
Copper(II) sulfate, anhydrousSangon BiotechA603008
DynamometerSanliangSF-10N
EDTASigma-AldrichE9884
EdUInvitrogenE104152
Laser Confocal MicroscopeLeicaSP8
PBSSangon BiotechE607008
PEG-MMA 500Sigma-Aldrich447943
PFASigma-AldrichP6148 
pH MetersMettler ToledoS220
QuadrolSigma-Aldrich122262
Sodium AscorbateSigma-AldrichA4034
Sodium bicarbonateSangon BiotechA500873
Sodium chlorideSangon BiotechA610476
Sodium hydroxideSigma-AldrichS5881
SpringTAOBAO0.2*1.5*1*7
Sulfo-Cyanine3 azideLumiprobeA1330
tert-ButanolSigma-Aldrich360538 Protect from light. Do not freeze.
Transbond MIP
Moisture Insensitive Primer
3M Unitek712-025
Transbond XT
Light Cure Adhesive Paste
3M Unitek712-035
TriethanolamineSigma-AldrichV900257
Tris-buffered salineSangon BiotechA500027

References

  1. Opperman, L. A. Cranial sutures as intramembranous bone growth sites. Developmental Dynamics. 219 (4), 472-485 (2000).
  2. Thenier-Villa, J. L., Sanromán-Álvarez, P., Miranda-Lloret, P., Plaza Ramírez, M. E.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

EdU

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved